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1、如何测定食品中的维生素如何测定食品中的维生素二、类别二、类别二、类别二、类别11/1/202223.13.1样品处理样品处理样品处理样品处理：根据样品性质，根据样品性质，根据样品性质，根据样品性质，可采用皂化法或研磨法可采用皂化法或研磨法可采用皂化法或研磨法可采用皂化法或研磨法。3.1.13.1.1皂化法：皂化法：皂化法：皂化法：适用于维生素适用于维生素适用于维生素适用于维生素A A含量不高的样品，可减少脂溶性物含量不高的样品，可减少脂溶性物含量不高的样品，可减少脂溶性物含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全部试验过程费时，且易导致维生素质的干扰，但全部试验过程费时，且易导致维生素质的干
2、扰，但全部试验过程费时，且易导致维生素质的干扰，但全部试验过程费时，且易导致维生素A A损失。损失。损失。损失。皂化：根据样品中维生素皂化：根据样品中维生素皂化：根据样品中维生素皂化：根据样品中维生素A A含量的不同，称取含量的不同，称取含量的不同，称取含量的不同，称取0.50.55g5g样品于三样品于三样品于三样品于三角瓶中，角瓶中，角瓶中，角瓶中，加入加入加入加入10mL 1:110mL 1:1氢氧化钾及氢氧化钾及氢氧化钾及氢氧化钾及202040mL40mL乙醇，于电热板上乙醇，于电热板上乙醇，于电热板上乙醇，于电热板上回流回流回流回流30 min30 min至皂化完全为止至皂化完全为止至
3、皂化完全为止至皂化完全为止。根据上述性质，测定脂溶性维生素时通常先用皂化法处理样品，水洗去除类根据上述性质，测定脂溶性维生素时通常先用皂化法处理样品，水洗去除类根据上述性质，测定脂溶性维生素时通常先用皂化法处理样品，水洗去除类根据上述性质，测定脂溶性维生素时通常先用皂化法处理样品，水洗去除类脂物。然后用有机溶剂提取脂溶性维生素（不皂化物），浓缩后溶于适当的脂物。然后用有机溶剂提取脂溶性维生素（不皂化物），浓缩后溶于适当的脂物。然后用有机溶剂提取脂溶性维生素（不皂化物），浓缩后溶于适当的脂物。然后用有机溶剂提取脂溶性维生素（不皂化物），浓缩后溶于适当的溶剂中测定。在皂化和浓缩时，溶剂中测定。在皂
4、化和浓缩时，溶剂中测定。在皂化和浓缩时，溶剂中测定。在皂化和浓缩时，为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂为防止维生素的氧化分解，常加入抗氧化剂（如焦性没食子酸，抗坏血酸等）。对于某些含脂肪量低、脂溶性维生素含（如焦性没食子酸，抗坏血酸等）。对于某些含脂肪量低、脂溶性维生素含（如焦性没食子酸，抗坏血酸等）。对于某些含脂肪量低、脂溶性维生素含（如焦性没食子酸，抗坏血酸等）。对于某些含脂肪量低、脂溶性维生素含量较高的样品，可以先用有机溶剂抽提，然后皂化，再提取。对于那些对光量较高的样品，可以先用有机溶剂抽提，然后皂化，再提
5、取。对于那些对光量较高的样品，可以先用有机溶剂抽提，然后皂化，再提取。对于那些对光量较高的样品，可以先用有机溶剂抽提，然后皂化，再提取。对于那些对光敏感的维生素，分析操作一般需要在避光条件下进行。敏感的维生素，分析操作一般需要在避光条件下进行。敏感的维生素，分析操作一般需要在避光条件下进行。敏感的维生素，分析操作一般需要在避光条件下进行。11/1/202293.2 3.2 标准曲线制备标准曲线制备标准曲线制备标准曲线制备 准确取一定量的维生素准确取一定量的维生素准确取一定量的维生素准确取一定量的维生素A A标准液于标准液于标准液于标准液于4 45 5个容量瓶中，个容量瓶中，个容量瓶中，个容量瓶
6、中，以三氯甲烷配制标准系列。以三氯甲烷配制标准系列。以三氯甲烷配制标准系列。以三氯甲烷配制标准系列。取相同数量比色管顺次取取相同数量比色管顺次取取相同数量比色管顺次取取相同数量比色管顺次取1mL1mL三氯甲烷和标准系三氯甲烷和标准系三氯甲烷和标准系三氯甲烷和标准系列使用液列使用液列使用液列使用液1mL1mL，各管加入乙酸酐，各管加入乙酸酐，各管加入乙酸酐，各管加入乙酸酐1 1滴（滴（滴（滴（可除去微量吸入可除去微量吸入可除去微量吸入可除去微量吸入的水分的水分的水分的水分），制成标准比色系列。），制成标准比色系列。），制成标准比色系列。），制成标准比色系列。于于于于620nm620nm波长处，以
7、三氯甲烷调节吸光度至零点，波长处，以三氯甲烷调节吸光度至零点，波长处，以三氯甲烷调节吸光度至零点，波长处，以三氯甲烷调节吸光度至零点，将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入9mL9mL三氯化锑三氯甲烷溶液。于三氯化锑三氯甲烷溶液。于三氯化锑三氯甲烷溶液。于三氯化锑三氯甲烷溶液。于6s6s内内内内测定吸光度。测定吸光度。测定吸光度。测定吸光度。以吸光度为纵坐标，以维生素以吸光度为纵坐标，以维生素以吸光度为纵坐标，以维生素以吸光度为纵坐标，以维生素A A含量为横坐标绘制
8、含量为横坐标绘制含量为横坐标绘制含量为横坐标绘制标准曲线图。标准曲线图。标准曲线图。标准曲线图。11/1/2022103.3 3.3 样品测定样品测定样品测定样品测定于一比色管中加入于一比色管中加入于一比色管中加入于一比色管中加入10mL10mL三氯甲烷，加入三氯甲烷，加入三氯甲烷，加入三氯甲烷，加入1 1滴乙酸滴乙酸滴乙酸滴乙酸酐为空白液。酐为空白液。酐为空白液。酐为空白液。另一比色管中加入另一比色管中加入另一比色管中加入另一比色管中加入1mL1mL三氯甲烷，其余比色管中三氯甲烷，其余比色管中三氯甲烷，其余比色管中三氯甲烷，其余比色管中分别加入分别加入分别加入分别加入1mL1mL样品溶液及样
9、品溶液及样品溶液及样品溶液及1 1滴乙酸酐。滴乙酸酐。滴乙酸酐。滴乙酸酐。其余步骤同标准曲线的制备。其余步骤同标准曲线的制备。其余步骤同标准曲线的制备。其余步骤同标准曲线的制备。4 4 结果计算结果计算结果计算结果计算 11/1/202211水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定 水溶性维生素水溶性维生素B B1 1、B B2 2和和C C，广泛存在于动植物组织，广泛存在于动植物组织中，饮食来源充足。中，饮食来源充足。溶解性：溶解性：溶解性：溶解性：水溶性维生素都水溶性维生素都易溶于水易溶于水易溶于水易溶于水，而不溶于苯、乙，而不溶于苯、乙 醚、氯仿等大多数有机溶剂。醚、氯仿等大多数有机溶剂。稳
10、定性：稳定性：稳定性：稳定性：在酸性介质稳定，既使加热也不破坏；在酸性介质稳定，既使加热也不破坏；在酸性介质稳定，既使加热也不破坏；在酸性介质稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，特别在但在碱性介质中不稳定，易于分解，特别在 碱性条件下加热，可大部或全部破坏。碱性条件下加热，可大部或全部破坏。易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响，易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响，维生素维生素B B2 2对光，特别是紫外线敏感，易被光对光，特别是紫外线敏感，易被光 线破坏线破坏 维生素维生素C C对氧、铜离子敏感，易被氧化。对氧、铜离子敏感，易被氧化。11/1/202212食品中水溶性
11、维生素的测定食品中水溶性维生素的测定食品中维生素食品中维生素食品中维生素食品中维生素B1B1B1B1的测定的测定的测定的测定食品中维生素食品中维生素食品中维生素食品中维生素B2B2B2B2的测定的测定的测定的测定食品中维生素食品中维生素食品中维生素食品中维生素C C C C的测定的测定的测定的测定食品中烟酸的测定食品中烟酸的测定食品中烟酸的测定食品中烟酸的测定食品中维生素食品中维生素食品中维生素食品中维生素B6B6B6B6的测定的测定的测定的测定11/1/202213一、维生素B1的测定维生素维生素B1B1又称硫胺素、抗神经炎素。又称硫胺素、抗神经炎素。测定方法：比色法测定方法：比色法 荧光法
12、（荧光法（GB/T 12390-1990GB/T 12390-1990）HPLCHPLC法法1.1.荧光法原理荧光法原理11/1/202214 硫胺素在硫胺素在硫胺素在硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外线下，在紫外线下，在紫外线下，在紫外线下，噻嘧色素发出荧光噻嘧色素发出荧光噻嘧色素发出荧光噻嘧色素发出荧光。在给定的条件下，。在给定的条件下，。在给定的条件下，。在给定的条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，以及没有其他荧光物质干扰时，以及没有其他荧光物质干扰时，以及没有其他荧光物
13、质干扰时，此荧光之强度与噻嘧此荧光之强度与噻嘧此荧光之强度与噻嘧此荧光之强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。本方法适用于各类食物中硫胺素的测定，但不适本方法适用于各类食物中硫胺素的测定，但不适本方法适用于各类食物中硫胺素的测定，但不适本方法适用于各类食物中硫胺素的测定，但不适用于有吸附硫胺素能力的物质和含有影响噻嘧色素荧用于有吸附硫胺素能力的物质和含有影响噻嘧色素荧用于有吸附硫胺素能力的物质和含有影响噻嘧色素荧用于有吸附硫胺素能力的物质和含有影响噻嘧色素荧光物质的样品
14、。光物质的样品。光物质的样品。光物质的样品。本方法的最小检出限为本方法的最小检出限为本方法的最小检出限为本方法的最小检出限为0.05g0.05g。11/1/2022152.2.主要试剂主要试剂活性人造浮石活性人造浮石硫胺素标准溶液硫胺素标准溶液3.3.仪器设备仪器设备荧光分光光度计荧光分光光度计Maizel-Gerson Maizel-Gerson 反应瓶反应瓶盐基交换管盐基交换管11/1/202216Determination of water-soluble vitaminsn n5.Determination of Vitamin C（抗坏血酸）n nCharacteristics of
15、 Vitamin CCharacteristics of Vitamin C Ascorbic acid(抗坏血酸),activeDehydro-ascorbic acid(脱氢抗坏血酸),active(2,3-二酮古乐糖酸),inactiveTotal ascorbic acidOxidationhydrolysis食品分析中的所谓总抗坏血酸是指抗坏血酸和脱氢抗坏血酸二者的总量，不包括二酮古乐糖酸和进一步的氧化产物。http:/http:/http:/http:/ yyy11/1/202217Determination of Vitamin Cn nFluorescence colorime
16、tric method(Fluorescence colorimetric method(荧光比色法荧光比色法荧光比色法荧光比色法)n nPrinciplePrincipleAscorbic acid(抗坏血酸)Dehydro-ascorbic acid(脱氢抗坏血酸)Quinoxaline(喹喔啉),Fluorescent compoundoxidationOPDA(邻苯二胺)11/1/202218Determination of Vitamin Cn n2 2，4-dinitrophenylhydrazine method(2,4-4-dinitrophenylhydrazine meth
17、od(2,4-二硝基二硝基二硝基二硝基苯肼法苯肼法苯肼法苯肼法)n nPrinciplePrincipleAscorbic acid(抗坏血酸)Dehydro-ascorbic acid(脱氢抗坏血酸)Osazone(脎),Red coloroxidation2,4-DNPH(2,4-2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼)11/1/202219Determination of Vitamin Cn n2,6-dichloro-indophenol redox method(2,6-2,6-dichloro-indophenol redox method(2,6-二氯靛二氯靛二氯靛二氯靛酚氧化还原法酚氧
18、化还原法酚氧化还原法酚氧化还原法)n nPrinciplePrincipletitration还原型抗坏血酸 染料（粉红色）脱氢抗坏血酸 染料（无色）2,6-二氯靛酚H+11/1/202220Determination of Vitamin Cn nHPLC Sample treatmentSample treatmentn n称取一定量的样品用冷的称取一定量的样品用冷的17%17%的偏磷酸均质，离心，过滤。为测抗坏的偏磷酸均质，离心，过滤。为测抗坏血酸，将血酸，将500L500L的滤液同的滤液同115L115L的的45%K45%K2 2HPOHPO4 4缓冲液（缓冲液（pH9.8pH9.8）
19、混合）混合（混合后（混合后pHpH为为7.17.1左右），混合液在左右），混合液在2525恒温恒温30min30min，然后用，然后用0.85%0.85%偏偏磷酸稀释至磷酸稀释至2mL2mL，取其稀释液，取其稀释液100L100L，再用流动相稀释至，再用流动相稀释至10mL10mL。若测。若测脱氢抗坏血酸，加脱氢抗坏血酸，加1%1%半胱氨酸至半胱氨酸至45%K45%K2 2HPOHPO4 4缓冲液中，再与样液混缓冲液中，再与样液混合，后续操作与测抗坏血酸相同。合，后续操作与测抗坏血酸相同。Chromatograph conditionsChromatograph conditionsn n色谱
20、柱：色谱柱：2 2根根PLRP-SPLRP-S柱柱 250mm4.6mm250mm4.6mm（id id），），5m5m串联；流动相：串联；流动相：20mmol/L20mmol/L磷酸二氢钠磷酸二氢钠+0.17%+0.17%偏磷酸，偏磷酸，pH2.2pH2.2；柱温：；柱温：22C22C；流速：；流速：0.7mL/min0.7mL/min；检测器：安培检测器。；检测器：安培检测器。11/1/202221二、维生素二、维生素C C的测定的测定 维生素维生素维生素维生素C C C C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的是一种已糖醛基酸，有抗坏血
21、病的作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢型两种，广泛存在于植物组织中，新型及脱氢型两种，广泛存在于植物组织中，新型及脱氢型两种，广泛存在于植物组织中，新型及脱氢型两种，广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。
22、它是子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是氧化还原酶之一，本身易被氧化，但在有些条氧化还原酶之一，本身易被氧化，但在有些条氧化还原酶之一，本身易被氧化，但在有些条氧化还原酶之一，本身易被氧化，但在有些条件下又是一种抗氧化剂。件下又是一种抗氧化剂。件下又是一种抗氧化剂。件下又是一种抗氧化剂。水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定11/1/202222 维生素维生素维生素维生素C C C C（还原型）纯品为白色无臭结晶，还原型）纯品为白色无臭结晶，还原型）纯品为白色无臭结晶，还原型）纯品为白色无臭结晶，熔点熔点熔点熔点190190190190192192192192，溶于水或乙醇中，不溶于，溶于水
23、或乙醇中，不溶于，溶于水或乙醇中，不溶于，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素C C C C开始开始开始开始氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。如氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。如氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。如氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。如果进一步水解则生成果进一步水解则生成果进一步水解则生成果进一步水解
24、则生成2 2 2 2，3-3-3-3-二酮古乐糖酸，失二酮古乐糖酸，失二酮古乐糖酸，失二酮古乐糖酸，失去生理作用。去生理作用。去生理作用。去生理作用。水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定11/1/202223 根根据据它它具具有有的的还还原原性性质质可可以以测测定定维生素维生素C C的含量。常用的测定方法有：的含量。常用的测定方法有：（1 1 1 1）2 2 2 2，6-6-6-6-二氯靛酚法二氯靛酚法二氯靛酚法二氯靛酚法 （还原型（还原型（还原型（还原型V V V VC C C C）（2 2 2 2）2 2 2 2，4-4-4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼
25、法二硝基苯肼法二硝基苯肼法 （总（总（总（总V V V VC C C C）（3 3 3 3）碘酸法碘酸法碘酸法碘酸法（4 4 4 4）碘量法）碘量法）碘量法）碘量法（5 5 5 5）荧光分光光度法）荧光分光光度法）荧光分光光度法）荧光分光光度法 水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定11/1/202224（一）（一）2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法1 1、原理：、原理：还原型抗坏血酸还原染料还原型抗坏血酸还原染料还原型抗坏血酸还原染料还原型抗坏血酸还原染料2 2 2 2，6-6-6-6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还二氯靛酚，该染料在酸性中
26、呈红色，被还二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原原后红色消失。还原型抗坏血酸还原原后红色消失。还原型抗坏血酸还原原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2 2 2 2，6-6-6-6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准还原标准还原标准还原标准2 2 2 2，6-6-6-
27、6-二氯靛酚的量与样品中所含二氯靛酚的量与样品中所含二氯靛酚的量与样品中所含二氯靛酚的量与样品中所含维生素维生素维生素维生素C C C C的量成正比。的量成正比。的量成正比。的量成正比。水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定11/1/2022252 2、试剂、试剂 1%1%1%1%草草草草酸酸酸酸溶溶溶溶液液液液：称称称称取取取取10101010g g g g草草草草酸酸酸酸，加加加加水水水水至至至至1000100010001000mlmlmlml；2%2%2%2%草草草草酸酸酸酸溶溶溶溶液液液液：称称称称20202020g g g g草草草草酸酸酸酸，加加
28、加加水水水水至至至至1000100010001000mlmlmlml；维维维维生生生生素素素素C C C C标标标标准准准准液液液液：准准准准确确确确称称称称20202020mgVmgVmgVmgVC C C C溶溶溶溶于于于于1%1%1%1%草草草草酸酸酸酸中中中中，并并并并稀稀稀稀释释释释至至至至100100100100mlmlmlml，吸吸吸吸5 5 5 5mlmlmlml于于于于50505050mlmlmlml容容容容量量量量瓶瓶瓶瓶中中中中，加加加加入入入入1%1%1%1%草草草草酸酸酸酸至至至至刻刻刻刻度度度度，此此此此溶溶溶溶液液液液每每每每毫毫毫毫升升升升含有含有含有含有0.0
29、20.020.020.02mgVmgVmgVmgVC C C C；水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（一）（一）2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法11/1/202226 0.02%20.02%20.02%20.02%2，6-6-6-6-二二二二氯氯氯氯靛靛靛靛酚酚酚酚溶溶溶溶液液液液：称称称称取取取取2 2 2 2，6-6-6-6-二二二二氯氯氯氯靛靛靛靛酚酚酚酚50505050mgmgmgmg，溶溶溶溶于于于于200200200200mlmlmlml含含含含有有有有52525252mgmgmgmg碳碳碳碳酸酸酸酸氢氢氢氢钠钠钠钠的的的的热热热
30、热水水水水中中中中，冷冷冷冷却却却却后后后后，稀稀稀稀释释释释至至至至250250250250mlmlmlml，过过过过滤滤滤滤于于于于棕棕棕棕色色色色瓶瓶瓶瓶中中中中，贮贮贮贮存存存存于于于于冰冰冰冰箱箱箱箱内内内内，应应应应用用用用过过过过程程程程中中中中每每每每星星星星期期期期标标标标定一次。定一次。定一次。定一次。水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（一）（一）2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法2 2、试剂、试剂11/1/202227标标定定一一：吸吸吸吸标标标标液液液液（V V V VC C C C）5ml5ml5ml5ml于于于于三三
31、三三角角角角瓶瓶瓶瓶加加加加6%6%6%6%KIKIKIKI溶溶溶溶液液液液0.50.50.50.5mlmlmlml加加加加1%1%1%1%淀淀淀淀粉粉粉粉3 3 3 3滴滴滴滴用用用用0.0010.0010.0010.001N N N N KIOKIOKIOKIO3 3 3 3标标标标液滴定到淡兰色。液滴定到淡兰色。液滴定到淡兰色。液滴定到淡兰色。计计算算：抗抗坏坏血血酸酸浓浓度度（mg/mlmg/ml）=（V V1 1 0.0880.088）/V/V2 2V V V V1 1 1 1-滴定时消耗滴定时消耗滴定时消耗滴定时消耗0.0010.0010.0010.001N KION KION K
32、ION KIO3 3 3 3标液的体积（标液的体积（标液的体积（标液的体积（mlmlmlml）V V V V2 2 2 2-维生素维生素维生素维生素C C C C重量（重量（重量（重量（g g g g）0.088-1ml0.001N KIO0.088-1ml0.001N KIO0.088-1ml0.001N KIO0.088-1ml0.001N KIO3 3 3 3标液标液标液标液维生素维生素维生素维生素C C C C的量的量的量的量（mg/mlmg/mlmg/mlmg/ml）水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（一）（一）2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二
33、氯靛酚滴定法11/1/202228标标定定二二：吸吸吸吸5 5 5 5mlmlmlml已已已已知知知知浓浓浓浓度度度度V V V V C C C C标标标标液液液液 加加加加5 5 5 5ml1%ml1%ml1%ml1%草草草草酸酸酸酸 用用用用染染染染料料料料2 2 2 2，6-6-6-6-二二二二氯氯氯氯靛靛靛靛酚酚酚酚滴滴滴滴定定定定至至至至溶溶溶溶液液液液呈粉红色，在呈粉红色，在呈粉红色，在呈粉红色，在15151515秒不褪色为终点秒不褪色为终点秒不褪色为终点秒不褪色为终点计计算算：每每每每毫毫毫毫升升升升2 2 2 2，6-6-6-6-二二二二氯氯氯氯靛靛靛靛酚酚酚酚相相相相当当当当
34、于于于于维维维维生生生生素素素素C C C C的毫克数等于滴定度（的毫克数等于滴定度（的毫克数等于滴定度（的毫克数等于滴定度（T T T T）T=T=（C VC V1 1）/V/V2 2C-C-C-C-维生素维生素维生素维生素C C C C的浓度（的浓度（的浓度（的浓度（mg/mlmg/mlmg/mlmg/ml）V V V V1 1 1 1-维生素维生素维生素维生素C C C C的体积（的体积（的体积（的体积（mlmlmlml）V V V V2 2 2 2-消耗消耗消耗消耗2 2 2 2，6-6-6-6-二氯靛酚的体积（二氯靛酚的体积（二氯靛酚的体积（二氯靛酚的体积（mlmlmlml）水溶性维
35、生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（一）（一）2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法11/1/202229 0.0010.0010.0010.001N N N N KIOKIOKIOKIO3 3 3 3标标标标液液液液：吸吸吸吸0.10.10.10.1N N N N KIOKIOKIOKIO3 3 3 3溶溶溶溶液液液液5 5 5 5mlmlmlml于于于于500500500500mlmlmlml容容容容量量量量瓶瓶瓶瓶内内内内加加加加水水水水至至至至刻刻刻刻度度度度，每毫升相当于每毫升相当于每毫升相当于每毫升相当于V V V VC C C C0.008m
36、g0.008mg0.008mg0.008mg；0.5%0.5%0.5%0.5%淀粉溶液；淀粉溶液；淀粉溶液；淀粉溶液；6%6%6%6%KIKIKIKI溶液。溶液。溶液。溶液。水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（一）（一）2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法2 2、试剂、试剂11/1/2022304 4、注意事项、注意事项 所有试剂的配制最好都用重蒸馏水；所有试剂的配制最好都用重蒸馏水；所有试剂的配制最好都用重蒸馏水；所有试剂的配制最好都用重蒸馏水；滴滴滴滴定定定定时时时时，可可可可同同同同时时时时吸吸吸吸二二二二个个个个样样样样品品品品。一一一一
37、个个个个滴滴滴滴定定定定，另一个作为观察颜色变化的参考；另一个作为观察颜色变化的参考；另一个作为观察颜色变化的参考；另一个作为观察颜色变化的参考；样样样样品品品品进进进进入入入入实实实实验验验验室室室室后后后后，应应应应浸浸浸浸泡泡泡泡在在在在已已已已知知知知量量量量的的的的2%2%2%2%草酸液中，以防氧化，损失维生素草酸液中，以防氧化，损失维生素草酸液中，以防氧化，损失维生素草酸液中，以防氧化，损失维生素C C C C；贮贮贮贮存存存存过过过过久久久久的的的的罐罐罐罐头头头头食食食食品品品品，可可可可能能能能含含含含有有有有大大大大量量量量的的的的低低低低铁铁铁铁离离离离子子子子（FeFe
38、FeFe2+2+2+2+），要要要要用用用用8%8%8%8%的的的的醋醋醋醋酸酸酸酸代代代代替替替替2%2%2%2%草草草草酸酸酸酸。这这这这时时时时如如如如用用用用草草草草酸酸酸酸，低低低低铁铁铁铁离离离离子子子子可可可可以以以以还还还还原原原原2 2 2 2，6-6-6-6-二二二二氯氯氯氯靛靛靛靛酚酚酚酚，使使使使测测测测定定定定数数数数字字字字增增增增高高高高，使使使使用用用用醋醋醋醋酸可以避免这种情况的发生；酸可以避免这种情况的发生；酸可以避免这种情况的发生；酸可以避免这种情况的发生；水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（一）（一）2 2，6-6
39、-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法11/1/2022313 3、操作方法、操作方法 提提取取：称称称称样样样样50505050gggg加加加加2%2%2%2%草草草草酸酸酸酸100100100100mlmlmlml到到到到入入入入捣捣捣捣碎机中碎机中碎机中碎机中处理处理处理处理过滤过滤过滤过滤颜色若深可加白陶土颜色若深可加白陶土颜色若深可加白陶土颜色若深可加白陶土 滴滴定定：吸吸吸吸5 5 5 5mlmlmlml样样样样液液液液于于于于三三三三角角角角瓶瓶瓶瓶用用用用染染染染料料料料滴滴滴滴定至粉红色定至粉红色定至粉红色定至粉红色15151515秒内不褪色秒内不褪色秒内不褪色秒内不褪色计计算算：V
40、C（mg/100g）=（VT）/W100V-V-V-V-消耗染料体积（消耗染料体积（消耗染料体积（消耗染料体积（mlmlmlml）T-1mlT-1mlT-1mlT-1ml染料所能氧化维生素染料所能氧化维生素染料所能氧化维生素染料所能氧化维生素C C C C的毫克数的毫克数的毫克数的毫克数W-W-W-W-滴定时所有滤液中含有样品的克数滴定时所有滤液中含有样品的克数滴定时所有滤液中含有样品的克数滴定时所有滤液中含有样品的克数 水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（一）（一）2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法11/1/202232 整整整整个个个个操操
41、操操作作作作过过过过程程程程中中中中要要要要迅迅迅迅速速速速，避避避避免免免免还还还还原原原原型型型型抗抗抗抗坏坏坏坏血血血血酸酸酸酸被氧化；被氧化；被氧化；被氧化；在在在在处处处处理理理理各各各各种种种种样样样样品品品品时时时时，如如如如遇遇遇遇有有有有泡泡泡泡沫沫沫沫产产产产生生生生，可可可可加加加加入入入入数滴辛醇消除；数滴辛醇消除；数滴辛醇消除；数滴辛醇消除；测测测测定定定定样样样样液液液液时时时时，需需需需做做做做空空空空白白白白对对对对照照照照，样样样样液液液液滴滴滴滴定定定定体体体体积积积积扣扣扣扣除空白体积。除空白体积。除空白体积。除空白体积。水溶性维生素的测定水溶性维生素的测
42、定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（一）（一）2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法4 4、注意事项、注意事项11/1/202233（二）（二）2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、可测总抗坏血酸，总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与型抗坏
43、血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，然后与2 2 2 2，4-4-4-4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算样品中总比色，由标准曲线计算样品中总比色，由标准曲线计算样品中总比色，由标准曲线计算样品中总V V V VC C C C 水溶性维生素的测定水溶性维生
44、素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定11/1/202234 1 1、原原理理：用用用用酸酸酸酸处处处处理理理理过过过过的的的的活活活活性性性性碳碳碳碳把把把把还还还还原原原原型型型型的的的的抗抗抗抗坏坏坏坏血血血血酸酸酸酸氧氧氧氧化化化化为为为为脱脱脱脱氢氢氢氢型型型型抗抗抗抗坏坏坏坏血血血血酸酸酸酸，在在在在继继继继续续续续氧氧氧氧化化化化为为为为二二二二酮酮酮酮古古古古乐乐乐乐糖糖糖糖酸酸酸酸。二二二二酮酮酮酮古古古古乐乐乐乐糖糖糖糖酸酸酸酸与与与与2 2 2 2，4-4-4-4-二二二二硝硝硝硝基基基基苯苯苯苯肼肼肼肼偶偶偶偶联联联联生生生生成成成成红红红红色色色色的的的的脎脎
45、脎脎，其其其其成成成成色色色色的的的的强强强强度度度度与与与与二二二二酮酮酮酮古古古古乐乐乐乐糖糖糖糖酸浓度呈正比，可以比色定量。酸浓度呈正比，可以比色定量。酸浓度呈正比，可以比色定量。酸浓度呈正比，可以比色定量。水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（二）（二）2，4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法11/1/202235 2 2、步骤、步骤 样品处理与分析样品处理与分析 称一定样称一定样称一定样称一定样 加等量加等量加等量加等量2%2%2%2%草酸草酸草酸草酸 于高速捣于高速捣于高速捣于高速捣碎机捣碎碎机捣碎碎机捣碎碎机捣碎 取匀浆取匀浆取匀浆取匀浆202020
46、20g g g g 用用用用1%1%1%1%草酸定容草酸定容草酸定容草酸定容100100100100ml ml ml ml 过滤过滤过滤过滤 取滤液取滤液取滤液取滤液10101010ml ml ml ml 加加加加1%1%1%1%草酸草酸草酸草酸10101010ml ml ml ml 加少量活性炭加少量活性炭加少量活性炭加少量活性炭 摇摇摇摇1 1 1 1分钟分钟分钟分钟 静置过静置过静置过静置过滤滤滤滤 各取滤液各取滤液各取滤液各取滤液2 2 2 2mlmlmlml于样品管和样品空白管于样品管和样品空白管于样品管和样品空白管于样品管和样品空白管 各管加入各管加入各管加入各管加入1 1 1 1
47、滴硫脲溶液滴硫脲溶液滴硫脲溶液滴硫脲溶液 于样品管中加入于样品管中加入于样品管中加入于样品管中加入2 2 2 2，4-4-4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼二硝基苯肼二硝基苯肼0.50.50.50.5ml ml ml ml 分别于两个管加盖分别于两个管加盖分别于两个管加盖分别于两个管加盖 水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（二）（二）2，4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法11/1/202236 于于于于37373737保温箱保温箱保温箱保温箱3 3 3 3小时小时小时小时 取出后样品管放入取出后样品管放入取出后样品管放入取出后样品管放入冰水中冰水中冰水中冰水中 样品
48、空白管取出后冷至室温样品空白管取出后冷至室温样品空白管取出后冷至室温样品空白管取出后冷至室温 在在在在样品空白管加入样品空白管加入样品空白管加入样品空白管加入2 2 2 2，4-4-4-4-二硝基苯肼二硝基苯肼二硝基苯肼二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5ml ml ml ml 样品管和空白管都于冰浴中样品管和空白管都于冰浴中样品管和空白管都于冰浴中样品管和空白管都于冰浴中 滴加滴加滴加滴加85%85%85%85%H H H H2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 42ml2ml2ml2ml于各管中于各管中于各管中于各管中 边滴边摇边滴边摇边滴边摇边滴边摇 防止温防止温防止温防止温度
49、升高炭化后呈黑色度升高炭化后呈黑色度升高炭化后呈黑色度升高炭化后呈黑色 冰浴中冰浴中冰浴中冰浴中30303030分钟后取出分钟后取出分钟后取出分钟后取出 室温下放置室温下放置室温下放置室温下放置30303030分钟后，在分钟后，在分钟后，在分钟后，在540540540540nmnmnmnm测消光值，测消光值，测消光值，测消光值，从标准曲线上查出相应的含量从标准曲线上查出相应的含量从标准曲线上查出相应的含量从标准曲线上查出相应的含量 水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定二、维生素二、维生素C C的测定的测定（二）（二）2，4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 2 2、步骤、步骤 样品处理与分析样品处理与
50、分析11/1/202237 标准曲线的绘制标准曲线的绘制 取取取取5 5个个个个5050mlml容量瓶编号容量瓶编号容量瓶编号容量瓶编号 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 加加加加VCVC标准液标准液标准液标准液 10 20 30 40 50 10 20 30 40 50mlml 取取取取5 5个比色管取相应个比色管取相应个比色管取相应个比色管取相应 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 加硫脲溶液（滴）加硫脲溶液（滴）加硫脲溶液（滴）加硫脲溶液（滴）1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2，4-4-二硝基苯肼（二硝基苯肼（二硝基苯肼（二硝基苯肼（mlml）0.5 0.5 0.5