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1、回顾复习一、微生物基本学问一、微生物基本学问1、微生物的定义：结构简洁、微小、生物、微生物的定义：结构简洁、微小、生物2、微生物的分类：细菌、放线菌、酵母菌、微生物的分类：细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、病毒霉菌、病毒二、微生物试验基本条件和设备二、微生物试验基本条件和设备1、试验室的留意事项：试验平安、无菌操作、试验室的留意事项：试验平安、无菌操作 （环境的无菌、操作的无菌、器皿的无菌）（环境的无菌、操作的无菌、器皿的无菌）2、无菌室的消毒方法：紫外灯照射、甲醛熏、无菌室的消毒方法：紫外灯照射、甲醛熏 蒸、酒精擦拭等蒸、酒精擦拭等回顾复习3、玻璃器皿的洗涤、包扎、灭菌：、玻璃器皿的洗涤、包扎、灭
2、菌：（1）洗涤剂：洗洁精、铬酸洗液等）洗涤剂：洗洁精、铬酸洗液等（2）包扎：锥形瓶、培育皿、移液管、试管）包扎：锥形瓶、培育皿、移液管、试管（3）灭菌：烘箱干燥灭菌、高压蒸汽灭菌）灭菌：烘箱干燥灭菌、高压蒸汽灭菌4、常用设备、常用设备（1）显微镜：酵母的形态视察）显微镜：酵母的形态视察 简洁染色（美兰）简洁染色（美兰）（2）培育箱、烘箱、高压蒸汽灭菌锅）培育箱、烘箱、高压蒸汽灭菌锅回顾复习三、常用试剂的配制方法（第一学期）三、常用试剂的配制方法（第一学期）（1）液体配液体）液体配液体稀释配制稀释配制（2）固体配液体）固体配液体干脆称量配制干脆称量配制今日内容解决三个问题：是什么？解决三个问题：
3、是什么？什么是培育基？什么是培育基？为什么？为什么？为何起培育作用？为何起培育作用？怎么做？怎么做？怎么配制培育基？怎么配制培育基？一、培育基的概念和作用一、培育基的概念和作用1、为什么有、为什么有“培育基培育基”的诞生？的诞生？历史背景：历史背景：一、培育基的概念和作用一、培育基的概念和作用2、什么是培育基？、什么是培育基？培育基是人工配制的，适合微生物生长繁殖培育基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的养分基质。或产生代谢产物的养分基质。3、渗透压 当两种不同成分的溶液或不同浓度的溶液放在一起时，即引起扩散作用，直至成为均一溶液为止。如将两种溶液用羊皮纸或其他类似的半渗透膜隔开，
4、则两种溶液因性质不同可由一方渗透到另一方，结果产生一种压力称为渗透压，这种现象称为渗透现象。渗透压的大小依溶液中溶质的分子数目而定，分子数目越多则压力越大（如细胞质壁分别现象）。在同一重量百分浓度的溶液中，具有小分子溶质较具有大分子溶质的渗透压要大，离子溶液较分子溶液的渗透压大，所以盐类溶液的渗透压大于糖类溶液的渗透压。v渗透压对微生物有很大影响，微生物的生活环境必需具有与其细胞大致相等的渗透压，超过确定限度或隧然变更渗透压对微生物是有害的，甚至引起微生物死亡。微生物在高渗透压溶液中引起细胞脱水，原生质收缩，细胞质变稠，发生质壁分别，影响微生物的活动或使之死亡。一般微生物在高渗透压溶液中不能生
5、长繁殖，所以，常用腌渍（530的食盐）或蜜饯（3080糖）来保存食品。微生物在低渗透压溶液中水分向细胞内渗透，细胞吸水膨胀，甚至裂开，细胞质从细胞内排出.培育基培育基种种 类类成成 分分灭菌灭菌技术技术配制配制技术技术其次节培育基及其配制其次节培育基及其配制教教学学内内容容二、培育基的成分及其作用二、培育基的成分及其作用 任何培育基都应当具备微生物生长所须要任何培育基都应当具备微生物生长所须要五大养分要素：五大养分要素：水、碳源、氮源、矿物质、生长因子水、碳源、氮源、矿物质、生长因子二、培育基的成分及其作用二、培育基的成分及其作用1、水、水v存在状态：游离态（溶媒）存在状态：游离态（溶媒）自由
6、水自由水 结合态（结构组成）结合态（结构组成）结合水结合水v生理作用：组成成分；反应介质；物质运输生理作用：组成成分；反应介质；物质运输媒体；热的良导体媒体；热的良导体二、培育基的成分及其作用二、培育基的成分及其作用2、碳源、碳源定义：凡能供应微生物养分所需碳元素的营定义：凡能供应微生物养分所需碳元素的营 养源。养源。功能：供应合成细胞物质及代谢物的原料；功能：供应合成细胞物质及代谢物的原料；能源。能源。常用碳源常用碳源（1）试验室：葡萄糖、蔗糖、淀粉）试验室：葡萄糖、蔗糖、淀粉（2）发酵工业：玉米粉、米糠、麸皮、糖蜜）发酵工业：玉米粉、米糠、麸皮、糖蜜二、培育基的成分及其作用二、培育基的成分
7、及其作用3、氮源、氮源定义：凡能供应微生物养分所需氮元素的营定义：凡能供应微生物养分所需氮元素的营 养源。养源。功能：供应合成细胞中含氮物（蛋白质等）；功能：供应合成细胞中含氮物（蛋白质等）；一般不作能源。一般不作能源。常用氮源常用氮源（1）试验室：铵盐、硝酸盐、尿素、蛋白胨、）试验室：铵盐、硝酸盐、尿素、蛋白胨、牛肉膏牛肉膏（2）发酵工业：麦芽汁、酵母膏）发酵工业：麦芽汁、酵母膏4、矿物质（无机盐）、矿物质（无机盐）定义：为微生物细胞生长供应碳、氮源以外的定义：为微生物细胞生长供应碳、氮源以外的多种重要元素的物质。多种重要元素的物质。主要功能：构成菌体成分；酶活性基组成或维主要功能：构成菌体
8、成分；酶活性基组成或维持酶活性；调整渗透压、持酶活性；调整渗透压、pH。主要元素：磷（主要元素：磷（P）、钾（）、钾（K）、钙（）、钙（Ca）、）、镁（镁（Mg）、硫（）、硫（S）、钠（、钠（Na）微量元素：铁、锌微量元素：铁、锌二、培育基的成分及其作用二、培育基的成分及其作用5、生长因子、生长因子定义：一类对微生物正常代谢必不行少且又不定义：一类对微生物正常代谢必不行少且又不能从简洁的碳、氮源自行合成的所需极微量的能从简洁的碳、氮源自行合成的所需极微量的有机物。有机物。种类：维生素、氨基酸、嘌呤或嘧啶碱基等。种类：维生素、氨基酸、嘌呤或嘧啶碱基等。来源：酵母膏、玉米浆、麦芽汁、复合维生素、来
9、源：酵母膏、玉米浆、麦芽汁、复合维生素、动植物组织或细胞浸液以及微生物生长环境的动植物组织或细胞浸液以及微生物生长环境的提取液等。提取液等。培养基成分培养基成分提供的主要营养要素提供的主要营养要素牛肉膏 5g碳源、氮源、维生素、磷酸盐蛋白胨 10g氮源、维生素NaCl 5g矿物质琼脂？H2O 定容至1000mL1000mL牛肉膏蛋白胨培育基的养分构成牛肉膏蛋白胨培育基的养分构成二、培育基的成分及其作用二、培育基的成分及其作用6、其他非养分成分、其他非养分成分（1）凝固剂：琼脂、明胶）凝固剂：琼脂、明胶（2）指示剂：伊红、美蓝、孔雀绿）指示剂：伊红、美蓝、孔雀绿（3）抑制剂：抗生素）抑制剂：抗生
10、素三、培育基的类型三、培育基的类型1、依据培育基的物理状态来区分（琼脂作用？）、依据培育基的物理状态来区分（琼脂作用？）液体培育基液体培育基 固体培育基固体培育基 半固体培育基半固体培育基 三、培育基的类型三、培育基的类型2、依据所培育微生物的微生物类群来分：、依据所培育微生物的微生物类群来分：细菌培育基；细菌培育基；放线菌培育基；放线菌培育基；霉菌培育基霉菌培育基3、依据培育目的来分：、依据培育目的来分：种子培育基；种子培育基；发酵培育基发酵培育基4、依据培育基成分是否明确来分：、依据培育基成分是否明确来分：自然培育基；自然培育基；合成培育基；合成培育基；半组合培育基半组合培育基5、依据特殊
11、用途划分：、依据特殊用途划分：选择性培育基；选择性培育基；鉴别性培育基；鉴别性培育基；增殖培育增殖培育基基标准标准培养基类型培养基类型配制特点配制特点主要应用主要应用物物理理性性质质固体培养基固体培养基加入琼脂较多加入琼脂较多菌种分离菌种分离,鉴定鉴定,计数计数半固体培养基半固体培养基加入琼脂较少加入琼脂较少菌种保存菌种保存液体培养基液体培养基不加入琼脂不加入琼脂工业生产，连续培养工业生产，连续培养化化学学组组成成合成培养基合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定菌种分类、鉴定天然培养基天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确由天然成分
12、配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本工业生，产降低成本半合成培养基半合成培养基由天然成分和已知成分相互混合而成由天然成分和已知成分相互混合而成用途广泛用途广泛目目的的用用途途鉴别培养基鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别菌种的鉴别选择培养基选择培养基添加（或缺少）某种化学成分添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离菌种的分离称量称量溶解溶解(过滤过滤)分装、包扎分装、包扎调调PH倒平板或摆斜面倒平板或摆斜面定容定容消毒灭菌消毒灭菌无菌检查无菌检查四、培育基的配制步骤四、培育基的配制步骤思索：你能自己配思索：你能自己配制一份牛肉膏蛋白制一份牛肉膏蛋白胨培育基吗
13、？胨培育基吗？培养基成分培养基成分提供的主要营养要素提供的主要营养要素牛肉膏 5.0g碳源、氮源、维生素、磷酸盐蛋白胨 10.0g氮源、维生素NaCl 5.0g矿物质琼脂 20.0g（不提供营养，只用于凝固）pH 7.6利用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调整将上述物质溶解后，加水定容至1000mL。牛肉膏蛋白胨固体培育基配方牛肉膏蛋白胨固体培育基配方 在配制固体培育基时还要加入确定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培育基中琼脂的含量依据琼脂的质量和气温的不同而有
14、所不同 由于这种培育基多用于培育细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。仪器和试剂v烧杯(500 mL、50mL)v三角烧瓶(250 mL)v量筒v玻璃棒v玻璃漏斗v酒精灯v培育皿v牛皮纸v纱绳v托盘天平v灭菌锅v牛肉膏v蛋白胨vNaClv琼脂v10NaOHv10盐酸v精密pH试纸v超净工作台五、培育基配制器材五、培育基配制器材培育基、玻璃器皿、天平秤、培育基、玻璃器皿、天平秤、烧杯或锥形瓶、药匙、玻璃棒、烧杯或锥形瓶、药匙、玻璃棒、电炉、电炉、pHpH试纸等。试纸等。五、培育基配制过程五、培育基配制过程 1、称量、称量1.在天平上放上称量纸，并把天平归零。2
15、.用药勺取出培育基，按配方称量。留意事项留意事项 称量结束称量结束1.清理桌面和天平清理桌面和天平2.清洗药勺，擦干放回原处清洗药勺，擦干放回原处 3.药品放回药品柜药品放回药品柜五、培育基配制过程五、培育基配制过程 2、溶解、溶解倾倒培育基时，当心不要沾到玻璃瓶或烧杯壁上。倾倒培育基时，当心不要沾到玻璃瓶或烧杯壁上。若有必要，须要利用电炉加热帮助溶解。若有必要，须要利用电炉加热帮助溶解。煮溶后要补加足水份，不能把培育基煮焦，焦化的不煮溶后要补加足水份，不能把培育基煮焦，焦化的不能运用能运用五、培育基配制过程五、培育基配制过程 3、分装、分装分装过程中，留意不要使培育分装过程中，留意不要使培育
16、基沾在管（瓶）口上以免引起基沾在管（瓶）口上以免引起污染。污染。留意：装入试管中的量不宜超留意：装入试管中的量不宜超过试管高度的过试管高度的1/3，装入三角烧，装入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半瓶中的量以烧瓶总体积的一半为限。为限。培育基分装完毕后，在试管口培育基分装完毕后，在试管口或三角瓶上塞好棉塞，以阻挡或三角瓶上塞好棉塞，以阻挡外界微生物污染培育基，并保外界微生物污染培育基，并保证有良好的通气性能。证有良好的通气性能。五、培育基配制过程五、培育基配制过程 3、分装、分装1.调整分注器调整分注器 刻度，按量刻度，按量分装分装 2.分装试管分装试管 3.盖上试管盖上试管半自动分装器半自动分
17、装器五、培育基配制过程五、培育基配制过程 6、摆斜面、摆斜面灭菌的试管培育基冷却至灭菌的试管培育基冷却至50左右，将试管一左右，将试管一端倾斜搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，端倾斜搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管长的一半为宜。搁置的斜面长度以不超过试管长的一半为宜。五、培育基配制过程五、培育基配制过程 6、倒平板、倒平板按无菌要求，在火焰旁操作，取溶化并冷却至不烫手的固化培育基（约50），倒入无菌培育皿中，倒量以铺满皿底为限，不超过培育皿高度的1/2。（）如发觉裂开、水分浸入、色（）如发觉裂开、水分浸入、色泽异样、棉塞被培育基沾染等、泽异样、棉塞被培育基沾染等、均
18、应挑出弃去。并测定其最终均应挑出弃去。并测定其最终pHpH。（）将全部培育基放入（）将全部培育基放入361361恒恒温箱培育过夜，如发觉有菌生温箱培育过夜，如发觉有菌生长，即弃去。长，即弃去。（）用有关的标准菌株接种（）用有关的标准菌株接种1212管管或瓶培育基，培育或瓶培育基，培育24244848小时，小时，如无菌生长或生长不好。应追如无菌生长或生长不好。应追查缘由并重复接种一次，如结查缘由并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培育基即应果仍同前，则该批培育基即应弃去，不能运用。弃去，不能运用。五、培育基配制过程五、培育基配制过程 7、培育基质量检验、培育基质量检验五、培育基配制过程五、培育基
19、配制过程 培育基保存培育基保存（1 1）基础培育基不能超过两周）基础培育基不能超过两周（2 2）生化试验培育基不宜超过一周）生化试验培育基不宜超过一周（3 3）选择性或鉴别性培育最好当天运用，倾）选择性或鉴别性培育最好当天运用，倾注的平板培育基不宜超过注的平板培育基不宜超过3 3天。天。培育基灭菌后，可依据须要进行接种和纯培育接种至斜面接种至平板探讨1、什么时候可以倒平板？2、倒平板时须要留意哪些要点？探讨用手触摸盛有培育基的锥形瓶，感觉刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。探讨用手触摸盛有培育基的锥形瓶，感觉刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基。探讨空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培育基上滋生，因此最好不要用这个平板培育微生物。平板冷凝后，皿盖上会凝合水珠，将平板平板冷凝后，皿盖上会凝合水珠，将平板倒置，既可以防止培育基中水分的蒸发，倒置，既可以防止培育基中水分的蒸发，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，造又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，造成污染。成污染。