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1、第七章第七章 肠道致病菌的检验与鉴定肠道致病菌的检验与鉴定 食品质量检测技术第一节第一节 概述概述一、食品中常见的肠道致病菌一、食品中常见的肠道致病菌 沙门氏菌沙门氏菌 志贺氏菌志贺氏菌 大肠艾希氏菌大肠艾希氏菌 变形杆菌变形杆菌 耶尔森菌耶尔森菌二、生物学特性二、生物学特性1、形态与染色、形态与染色 均为革兰氏阴性杆菌，中等大小，无芽胞，多数具有周身鞭毛均为革兰氏阴性杆菌，中等大小，无芽胞，多数具有周身鞭毛能运动，志贺氏菌属无鞭毛无动力。能运动，志贺氏菌属无鞭毛无动力。 2、培养和生化反应、培养和生化反应 （1）、需氧或兼性厌氧，菌落中等大小，表面光滑，液体培）、需氧或兼性厌氧，菌落中等大小
2、，表面光滑，液体培养基混浊生长。养基混浊生长。 （2）、肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳）、肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多能分解乳糖、葡萄糖产酸或产酸产气。糖、葡萄糖产酸或产酸产气。 （3）、可还原硝酸盐为亚硝酸盐。）、可还原硝酸盐为亚硝酸盐。 三、抗原类型三、抗原类型 O抗原抗原也称菌体抗原，细胞壁脂肪糖，耐热也称菌体抗原，细胞壁脂肪糖，耐热100不不被破坏被破坏H抗原抗原也称鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐热，也称鞭毛抗原，鞭毛蛋白，不耐热，60 30可破坏可破坏K抗原抗原也称表面抗原（荚膜抗原），多糖，具有阻抑也称表面抗原（荚膜抗原），多糖，具有阻抑O抗原发生凝集的现象，加
3、热抗原发生凝集的现象，加热6030可消除可消除抑阻作用抑阻作用菌毛抗原菌毛抗原也称菌毛蛋白抗原 ,不耐热, 干扰O凝集 四、四、 致病性致病性（一）、致病物质（一）、致病物质 1、内毒素：能引起机体发热，白细胞减少，低血糖，、内毒素：能引起机体发热，白细胞减少，低血糖，血压降低，严重者休克。血压降低，严重者休克。 2、外毒素、外毒素：对小肠粘膜细胞具有物殊毒害作用，引起：对小肠粘膜细胞具有物殊毒害作用，引起腹泻。腹泻。 （二）、所致病疾（二）、所致病疾 1、伤寒和副伤寒、伤寒和副伤寒 2、食物中毒、食物中毒 3、细菌性痢疾、细菌性痢疾 五、微生物检验的基本程序五、微生物检验的基本程序 检样检样
4、处理处理增菌培养增菌培养分离培养分离培养生化试验生化试验血清学鉴定血清学鉴定报告报告 思考题1 1、肠道致病菌具有哪些生物学特性、肠道致病菌具有哪些生物学特性? ? 2 2、肠道致病菌具有哪些抗原？又称为什么？有、肠道致病菌具有哪些抗原？又称为什么？有什么特点？什么特点？ 3 3、写出肠道致病菌检验的基本程序、写出肠道致病菌检验的基本程序 第二节、沙门氏菌检验第二节、沙门氏菌检验一、概况一、概况 （一）沙门氏菌的发现与食物中毒（一）沙门氏菌的发现与食物中毒 （二）沙门氏菌的命名（二）沙门氏菌的命名 根据所致疾病命名根据所致疾病命名 根据菌的发现地区命名根据菌的发现地区命名 以发现者的名字命名以
5、发现者的名字命名 （三）沙门氏菌的抵抗力（三）沙门氏菌的抵抗力 60 30可杀死可杀死 （四）沙门氏菌的分类地位及定义（四）沙门氏菌的分类地位及定义1、地位：是肠杆菌科、埃希氏菌族、沙门氏、地位：是肠杆菌科、埃希氏菌族、沙门氏菌属中的细菌菌属中的细菌 2、定义、定义 是肠杆菌科中形态和培养特征，生化反应及是肠杆菌科中形态和培养特征，生化反应及抗原结构相似，被抗原结构相似，被O1噬菌体裂解的一群革兰噬菌体裂解的一群革兰氏阴性杆菌。氏阴性杆菌。二、生物学特性二、生物学特性 （一）、形态与染色：（一）、形态与染色： 革兰氏染色阴性，无荚膜，无芽胞，多数革兰氏染色阴性，无荚膜，无芽胞，多数有鞭毛，有动
6、力，短小杆菌。有鞭毛，有动力，短小杆菌。 （二）、培养特性（二）、培养特性 1、需氧或兼性厌氧，最适温度、需氧或兼性厌氧，最适温度37，PH7.27.4。(沙门氏菌（红色）侵入人体细胞 2、对营养要求不高，在普通培养基生长良、对营养要求不高，在普通培养基生长良好，好，37 ，24h，能形成菌落中等大小，直，能形成菌落中等大小，直径径23mm，圆形或卵形，表面光滑湿润，圆形或卵形，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐的菌落无色半透明，边缘整齐的菌落 3、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长，、在液体培养基中，呈均匀混浊性生长，无菌膜。无菌膜。 （三）、生化特性（三）、生化特性 1、发酵、发酵GLU，甘
7、露醇，山梨醇产酸产气（伤，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤寒鸡伤寒沙门氏菌少数不产气）寒鸡伤寒沙门氏菌少数不产气） 2、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇、不发酵乳糖，蔗糖，侧金黄花醇 3、多数产生、多数产生H2S（+），不产靛基质（），不产靛基质（-），），不分解尿素（不分解尿素（-），不产生乙酰甲基甲醇），不产生乙酰甲基甲醇（VP）（）（-），）， 4、能还原硝酸盐为亚硝酸盐（、能还原硝酸盐为亚硝酸盐（+） 5、在、在KCN培养基中生长（培养基中生长（-），苯丙氨酸脱），苯丙氨酸脱氨酸（氨酸（-） （四）、抗原结构（四）、抗原结构 主要两种：主要两种： A、O抗原抗原 B、H抗原抗原 C、表面抗原（、
8、表面抗原（K抗原）抗原） D、菌毛抗原、菌毛抗原 2 、O抗原抗原 （1） O抗原的表示方法抗原的表示方法 共有共有58种，用字母种，用字母O和阿拉伯数字标记：和阿拉伯数字标记：O1 、O2 、O3、 O4 如： 伤寒杆菌： O9 、O12 （2）沙门氏菌的分群及表示方法）沙门氏菌的分群及表示方法 用大写字母及相关符号表示：用大写字母及相关符号表示： A、B、C、D、E、F Z、 O51 O63、 O65 O67 （3）沙门氏菌中的主要菌群及其群特异性抗原）沙门氏菌中的主要菌群及其群特异性抗原 A群群-O2 B群群-O4 C群群-O6 C1群群-O7、 C2群群- O6 O8 、 C3群群-O
9、8 、 C4群群-O6 O7 O14 D群群-O9 F群群-O11 E群群-O3 E2群群-O3、 O10族族 E3群群-O3、 O15 E4群群-O1 、O3 、O193、H抗原（鞭毛抗原）抗原（鞭毛抗原） 耐热性差：耐热性差：6015或酒精处理可破坏或酒精处理可破坏 沙门氏沙门氏H抗原有两种：抗原有两种： 第第1相：特异相，用英文小写字母表示相：特异相，用英文小写字母表示a、b、cz z1z55 第第2相相：非特异相，用阿拉伯数字表示：非特异相，用阿拉伯数字表示1、2、3其其中也有用小写字母中也有用小写字母a、n、x等表示。等表示。 4 4、表面抗原：、表面抗原： 沙门氏菌沙门氏菌K抗原有
10、三种：抗原有三种：Vi、M、5抗原、抗原、 Vi抗原位于菌体的最表层，包围了抗原位于菌体的最表层，包围了O抗原，可阻碍抗原，可阻碍O抗原的血清抗原的血清学凝集试验。破坏学凝集试验。破坏Vi抗原：抗原：60 30，100 5 含有含有Vi Vi 抗原的抗原的沙门氏沙门氏菌：菌： 伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌 三、沙门氏菌食物中毒三、沙门氏菌食物中毒 （一）、引起食物中毒最常见的沙门氏菌：一）、引起食物中毒最常见的沙门氏菌： 鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌 （二）、易引起沙
11、门氏菌中毒的食品（二）、易引起沙门氏菌中毒的食品 肉、蛋、乳类食品肉、蛋、乳类食品 行业关注：美国两种花生酱含沙门氏菌 (三三)、中毒原因、中毒原因 1、食用病畜禽的肉制品食品、食用病畜禽的肉制品食品 2、病畜禽、带菌人和动物使食品受污染、病畜禽、带菌人和动物使食品受污染 3、用不洁净水外理食品、用不洁净水外理食品 （四）、临床病状（所致病菌）（四）、临床病状（所致病菌） 1、肠热病：伤寒与副伤寒病，为慢性发热的菌血病。、肠热病：伤寒与副伤寒病，为慢性发热的菌血病。 由伤寒与副伤寒菌引起，潜伏期由伤寒与副伤寒菌引起，潜伏期720天天 2、急性肠胃类：主要症状：头痛、发热、恶心、呕吐、急性肠胃类
12、：主要症状：头痛、发热、恶心、呕吐、腹泻、出冷汗、及全身不适，病程腹泻、出冷汗、及全身不适，病程23天天 3、败血病、败血病：高烧、寒战、厌食、局部发炎、由猪霍乱沙：高烧、寒战、厌食、局部发炎、由猪霍乱沙门氏菌等引起门氏菌等引起 四、微生物检验四、微生物检验 （一）、基本步骤（程序）（一）、基本步骤（程序） 检样检样增菌（前增菌）增菌（前增菌）分离培养分离培养生化生化试验初步鉴定试验初步鉴定血清学反应最后鉴定血清学反应最后鉴定报告报告 1、前增菌：用无选择性的培养基使处于濒死、前增菌：用无选择性的培养基使处于濒死状态的状态的M恢复活力恢复活力; 2、选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，基它、选择性
13、增菌：使沙门氏菌优势繁殖，基它细菌变到抑制细菌变到抑制; 3、选择性平板分离培养：分离出所需的细菌、选择性平板分离培养：分离出所需的细菌; 4、生化试验：鉴定分离出来的细菌是否符合、生化试验：鉴定分离出来的细菌是否符合所检项目的细菌所检项目的细菌; 5、血清学鉴定：进一步鉴定。、血清学鉴定：进一步鉴定。 （二）、检验操作关键点（二）、检验操作关键点 1、增菌：使待检菌复壮，抑制杂菌生长，提高检出率。、增菌：使待检菌复壮，抑制杂菌生长，提高检出率。 前增菌：用于加工过的食品，前增菌：用于加工过的食品，37，48h 或或1824h，长有杂菌。，长有杂菌。 增菌培养基：增菌液一般用增菌培养基：增菌液
14、一般用MM和和SC两种，如可能是伤寒沙门两种，如可能是伤寒沙门氏菌用氏菌用TTB，用，用42培养。培养。2、平板分离、平板分离 选择性培养基：选择性培养基：BS、DHL、HE、WS、SS BS中最好，中最好，DHL、HE、WS很好，很好，SS最差最差 一般要用：一般要用：BS和和WS/SS两个平板，两个平板，BS主要用主要用于伤寒沙门氏菌的分离于伤寒沙门氏菌的分离BS上的菌落上的菌落DHL上的菌落上的菌落SS上的菌落上的菌落3、五项生化试验、五项生化试验 H H2 2S S、靛基质、靛基质 、 PH7.2尿素酶、尿素酶、KCN 、 赖氨酸脱羧酶赖氨酸脱羧酶 （1）三糖铁培养的培养）三糖铁培养的
15、培养典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征：典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征： 表面（表面（-）粉红色、底层（）粉红色、底层（+）黄色、）黄色、 H H2 2S S （+）底层有黑色、有动）底层有黑色、有动力力。 在在TSI培养基中培养基中：表面（：表面（+）黄色、）黄色、 H H2 2S S （-）的培养物可）的培养物可排除排除，其，其它培养物均有可能是沙门氏菌。它培养物均有可能是沙门氏菌。 （2）其余四项生化实验）其余四项生化实验靛基质靛基质 PH7.2尿素酶尿素酶 KCN 赖氨酸脱羧酶赖氨酸脱羧酶 反应序号：反应序号：A1、A2多见，多见，B1少见少见 （3）、典型沙门氏菌的五项生化反应及其检
16、验的利用）、典型沙门氏菌的五项生化反应及其检验的利用 A、典型五项生化反应：、典型五项生化反应：A1 H2S（+） 靛基质（靛基质（-） PH7.2尿素酶（尿素酶（-） KCN（-） 赖氨酸脱羧赖氨酸脱羧E（+） B、利用五项生化反应鉴定沙门氏菌的最简单方案、利用五项生化反应鉴定沙门氏菌的最简单方案 a、对于、对于H2S阳性菌，利用五项生化反应试验可判别沙阳性菌，利用五项生化反应试验可判别沙门氏菌和柠檬酸杆菌。门氏菌和柠檬酸杆菌。 b、对于、对于H2S阴性菌，查到阴性菌，查到B1时即：时即： H2S（-） 靛基质（靛基质（-） PH7.2尿素酶（尿素酶（-） KCN（-） 赖氨酸脱羧赖氨酸脱羧
17、E（+），补做），补做ONPE试验，可判定沙门试验，可判定沙门氏菌属和埃希氏菌属（氏菌属和埃希氏菌属（ONPE（-）为沙门氏菌，）为沙门氏菌，ONPE（+）大肠艾希氏菌）大肠艾希氏菌5、血清学试验（最后鉴定）、血清学试验（最后鉴定） （1）、沙门氏菌诊断血清的种类：）、沙门氏菌诊断血清的种类： 10种组合血清：主要用于伤寒和副伤寒沙门氏菌鉴种组合血清：主要用于伤寒和副伤寒沙门氏菌鉴定定 26种组合血清：常见致病菌的定群与分型种组合血清：常见致病菌的定群与分型 57种组合血清：常见定型，初步鉴定种组合血清：常见定型，初步鉴定AF群以外群以外的菌型的菌型 144种组合血清种组合血清：全套装：全套装
18、 （2）、血清学检验步骤、血清学检验步骤 抗原准备抗原准备 AF多价血清检验（判定是否是多价血清检验（判定是否是沙门氏菌）沙门氏菌） 群特异性抗体血清（如群特异性抗体血清（如O2、O4、O3、O7、O8、O9、O10、O11（判定（判定O群别）群别） O单因子血清检查单因子血清检查 H因子血清检查（分型）因子血清检查（分型） 报告报告 五、检验结果的报告五、检验结果的报告1、凡血清学鉴定与生化反应均符合者，报告、凡血清学鉴定与生化反应均符合者，报告发现沙门氏菌。发现沙门氏菌。 经检验，食品发现有沙门氏菌经检验，食品发现有沙门氏菌 2、凡血清学鉴定与生化反应均不符合者，、凡血清学鉴定与生化反应均
19、不符合者，报告未发现沙门氏菌。报告未发现沙门氏菌。 思考题：思考题：1、典型沙门氏菌的五项生化试验结果如何？、典型沙门氏菌的五项生化试验结果如何？ 2、沙门氏菌的形态特征，培养特性是什么？、沙门氏菌的形态特征，培养特性是什么？ 3、沙门氏菌检验时为什么要进行前增菌和增菌？、沙门氏菌检验时为什么要进行前增菌和增菌？ 4、沙门氏菌有哪些抗原？各有何特点？、沙门氏菌有哪些抗原？各有何特点？O、H抗抗原如何表示，原如何表示，AF群沙门氏菌中，代表每群群沙门氏菌中，代表每群O特异性抗原的独特因子是什么？特异性抗原的独特因子是什么？ 5、沙门氏菌哪几个菌型具有、沙门氏菌哪几个菌型具有Vi抗原，抗原，Vi抗
20、抗原对原对O抗原血清涟试验有何影响，对含抗原血清涟试验有何影响，对含Vi抗抗原菌，如何做原菌，如何做O抗原血清学试验。抗原血清学试验。 6、沙门氏菌在、沙门氏菌在SS平板，平板，TSI培养基上生长的培养基上生长的现象如何，说明其原理。现象如何，说明其原理。 7、分离纯化后怎样选用最少的生化试验方、分离纯化后怎样选用最少的生化试验方法初步鉴定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌。法初步鉴定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌。 8、如何进行沙门氏菌的血清学试验。、如何进行沙门氏菌的血清学试验。第三节、志贺氏菌的检验第三节、志贺氏菌的检验 一、生物学特性一、生物学特性 （一）、形态与染色（一）、形态与染色 革兰氏
21、阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛 23um*0.50.7um （二）、培养特性（二）、培养特性1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37，PH7.27.4 2、在普通琼脂和、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落的菌落 3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊
22、生长，无菌膜。、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。 （三）、生化反应（三）、生化反应1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均不发酵乳糖。氏菌外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生、不产生H2S，不分解尿素，不分解尿素，V-P试验阴性，试验阴性，不能利用柠檬酸盐。不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。、甲基红阳性。（四）、抗原结构（四）、抗原结构1、抗原构成：、抗原构成： O抗原：抗原： 群特异性抗原：群特异性抗原：A、B、C、D K抗原：除抗原：除B群外，一般有群外，一般有K抗原抗原 2、志
23、贺氏菌的分群与血清型、志贺氏菌的分群与血清型志贺氏菌分为四群：志贺氏菌分为四群： A群（痢疾志贺氏菌）：群（痢疾志贺氏菌）：110型型 B群（福氏志贺氏菌）：群（福氏志贺氏菌）：16型型+X、Y两个变种，两个变种， C群（鲍氏志贺氏菌群（鲍氏志贺氏菌 ）：）：115型型 D群（宋内氏志贺氏菌）群（宋内氏志贺氏菌） ：1个型个型志贺氏菌属抗原的分类志贺氏菌属抗原的分类 菌 名 血 清 分 类 生 化 特 性 群 型 亚 型 甘露醇 鸟氨酸脱羧酶 志贺氏菌 A 1 10 - 福 氏 菌 B 16 x、y变种 1a、1b、2a、2b、3a、3b 3c、4a、4b + - 鲍 氏 菌 C 1 15 +
24、 - 宋内氏菌 D 1 + 葡萄糖葡萄糖+乳糖- 甘露醇甘露醇- 痢疾志贺痢疾志贺氏菌氏菌1 1、3 3、4 4、5 5、6 6、9 9、1010型型 痢疾志痢疾志贺氏菌贺氏菌2 2、7 7、8 8型型 福氏福氏6型，型，鲍氏鲍氏1、2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、8 8、1010、1212、1414型型 福氏痢疾菌福氏痢疾菌（1、2 2、3 3、4 4、5 5型）鲍氏型）鲍氏5 5、7 7、9 9、1111、1313、1515型型靛基质靛基质- 乳糖乳糖+ 宋氏志宋氏志贺氏菌贺氏菌 靛基质靛基质- 靛基质靛基质+ 靛基质靛基质- 靛基质靛基质+ 甘露醇甘露醇+ 3、属内外抗原关系、属
25、内外抗原关系 （1）群内抗原关系：）群内抗原关系： A群：群：2与与10型，具有密切关系型，具有密切关系 C群：群：1与与4和和11型，型，10与与11相关相关 B群：群抗原是群：群抗原是B群各型之间的共同抗原群各型之间的共同抗原 （2）群间抗原关系：）群间抗原关系： C群群17型与型与A群群3型相关型相关 C群群18型与型与A群群11型相关型相关 （3）属外抗原关系：）属外抗原关系： 志贺氏菌与艾希氏菌属的志贺氏菌与艾希氏菌属的O抗原关系抗原关系非常密切，除非常密切，除A群群9型和型和D群宋氏菌与埃氏群宋氏菌与埃氏希菌的希菌的O抗原关系未见报道外，每一个型抗原关系未见报道外，每一个型都与一定
26、的艾希氏菌的都与一定的艾希氏菌的O抗原有关抗原有关。 4、K抗原对抗原对O抗原血清学试验的影响抗原血清学试验的影响 可阻碍可阻碍O抗原的血清学凝集试验，煮抗原的血清学凝集试验，煮沸处理即可。沸处理即可。 （五）志贺氏菌的抵抗力（五）志贺氏菌的抵抗力志贺氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。 一般在潮湿土壤中能存活34天，37水中存活20天，在粪便内（室温）存活11天。日光直接照射30分钟，56-6010分即被杀死，对高温和化学消毒剂很敏感，1%石炭酸中15-30分钟即被杀死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感，但易产生耐药性。 二、志贺氏菌的致病性与食物中毒二、志贺氏菌
27、的致病性与食物中毒 （一）流行病学（一）流行病学 传染源 食物、病人、粪便、苍蝇等食物、病人、粪便、苍蝇等（二）志贺氏菌的致病性（二）志贺氏菌的致病性致病因素致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、外毒素侵袭力、菌体内毒素、外毒素（二）临床症状（二）临床症状A、急性细菌性痢疾：、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾：、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。三、微生物检验三、微生物检验 （一）检验步骤（程序）（一）检验步骤（程序） 检样检样样品样品处理处理增菌培养增菌培
28、养SS、EMB平板分离培养平板分离培养初步生化鉴定初步生化鉴定最最后血清学鉴定后血清学鉴定报告报告 （二）检验操作要点（二）检验操作要点志贺氏菌在常温中生存的时间较短，应尽快进志贺氏菌在常温中生存的时间较短，应尽快进行试验。行试验。 如如24h内不能检验，样品应在冰箱内内不能检验，样品应在冰箱内 长时间不能检验，放在低温冰箱内。长时间不能检验，放在低温冰箱内。 1、增菌培养、增菌培养培养基：培养基：GN增菌液增菌液 在在361 1 68h 68h，当培养液出，当培养液出现轻微混浊即中止培养。现轻微混浊即中止培养。2 2、分离培养、分离培养 强选择性平板：强选择性平板：SSSS或或HEHE、WS
29、 WS 弱选择性平板：弱选择性平板：EMB或麦康数或麦康数 在工作中在工作中36361 1培养培养 1824h 1824h， 菌落特征：菌落特征：无色透明，中等大小，光滑圆形菌落。无色透明，中等大小，光滑圆形菌落。 HE平板原理及反应平板原理及反应 发酵乳糖的某种肠杆菌 不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生硫化氢，可能是沙门氏菌 不发酵乳糖的肠道菌，可能就是志贺氏菌 SS平板原理及反应平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar)大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌 是沙门氏菌。有黑色中心。 如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了麦康凯琼脂平板麦康凯琼脂平板 EM
30、B平板照片及原理平板照片及原理 3、初步生化鉴定、初步生化鉴定 从平板上挑取从平板上挑取34个可疑菌落，接种于个可疑菌落，接种于TSI和葡萄糖半固体培养基各一管，和葡萄糖半固体培养基各一管，36， 1824h， 三糖铁（三糖铁（TSI）琼脂试验的原理）琼脂试验的原理2志贺氏菌志贺氏菌3沙门氏菌沙门氏菌4大肠杆菌大肠杆菌 葡萄糖半固体原理及结果葡萄糖半固体原理及结果。 Organism Test Result 1. Pseudomonas aeruginosa（铜绿假单胞菌）：Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile 3. Bacillus subti
31、lis：Motile 志贺氏菌在志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）：生长的结果（现象）： （1）斜面产碱仍为红色或粉红色；）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不产气，变黄色；）底层产酸不产气，变黄色； （3）不产）不产H2S，不出现黑色。，不出现黑色。 志贺氏菌在半固体培养基生长：沿线生长，志贺氏菌在半固体培养基生长：沿线生长，无动力。无动力。 在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：（1）在）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物表面上呈现蔓延生长的培养物 （2）在）在1824h发酵乳糖、蔗糖的培养物发酵乳糖、蔗糖的培养物 （3）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面
32、生长）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的培养物。的培养物。 （4）产气的培养物）产气的培养物 （5）有动力的培养物）有动力的培养物 （6）产）产H2S的培养物的培养物 4、血清学试验和生化鉴定试验、血清学试验和生化鉴定试验 （1）血清学分型：）血清学分型： 凡凝为志贺氏菌，挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。 先用先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查现凝集，应将菌液煮沸后再检查； 如果呈现凝集，则用如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和群多价和D群血清分别试验。群血清分别试验。 如系B
33、群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用115各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌312型多价血清及各型因子血清检查。（2）进一步的生化试验）进一步的生化试验 葡萄糖铵葡萄糖铵 - 西蒙氏柠檬酸盐西蒙氏柠檬酸盐 - 赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶 - pH7.2尿素尿素 - KCN生长生长 - 水杨苷和七叶苷的分解水杨苷和七叶苷的分解
34、 - （3）生化分群）生化分群五项生化试验：五项生化试验： 乳糖乳糖 甘露醇甘露醇 棉子糖棉子糖 甘油发酵甘油发酵 靛基质试验靛基质试验， 5、结果报告：、结果报告： 综合生化血清学试验结果判定菌群，菌型，并做出报告。 思考题：思考题：1、志贺氏菌分几个群各称为什么？抗原结构如何？、志贺氏菌分几个群各称为什么？抗原结构如何？K抗原抗原对对O抗原试验有何影响？抗原试验有何影响？ 2、写出志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌在、写出志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌在SS、EMB平板平板上生长的菌落特征？上生长的菌落特征？ 3、志贺氏菌在三糖铁培养基上生长的结果如何？、志贺氏菌在三糖铁培养基上生长的结果如何？ 4、在志贺氏菌中，接种三糖尿病铁培养基和葡萄糖半固体、在志贺氏菌中，接种三糖尿病铁培养基和葡萄糖半固体培养基后，哪些培养物可认为不属于本菌生长现象的范培养基后，哪些培养物可认为不属于本菌生长现象的范围而可弃去？围而可弃去？ 5、如何用生化反应来区分志贺氏菌各群？、如何用生化反应来区分志贺氏菌各群？ 6、写出沙门氏菌、志贺氏菌的检验程序及所用培养基。、写出沙门氏菌、志贺氏菌的检验程序及所用培养基。