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1、第三节第三节 细菌的人工培养细菌的人工培养 是指把细菌生长繁殖所需的各种营养物质是指把细菌生长繁殖所需的各种营养物质 合理地调配在一起制成的营养基质。合理地调配在一起制成的营养基质。一、一、培养基的概念培养基的概念二、培养基种类二、培养基种类 液体培养基、固体培养基和半固体培养基液体培养基、固体培养基和半固体培养基三三种。种。液体培养基：液体培养基：含有各种营养成分的水溶液。含有各种营养成分的水溶液。固体培养基：固体培养基：在液体培养基中加入在液体培养基中加入2 23%3%琼脂琼脂即为固体培养基。即为固体培养基。半固体培养基：半固体培养基：加入加入0.0.3 3 0.5%0.5%琼脂即为半固琼
2、脂即为半固体培养基。体培养基。(一一)按其物理性状分为按其物理性状分为1、基础培养基、基础培养基 含有培养一般细菌的最基本成分。含有培养一般细菌的最基本成分。可供大多可供大多数细菌人工培养用。如肉汤培养基、普通琼脂培数细菌人工培养用。如肉汤培养基、普通琼脂培养基和蛋白胨水等。养基和蛋白胨水等。(二二)按其用途分为按其用途分为2 2、营养培养基、营养培养基于基础培养基中加入于基础培养基中加入高营养物质如葡萄高营养物质如葡萄糖、血液、血清、腹水、生长因子糖、血液、血清、腹水、生长因子等，以等，以满足营养要求较高的细菌生长需要。有的满足营养要求较高的细菌生长需要。有的细菌还需加入特殊物质，如结核杆菌
3、需加细菌还需加入特殊物质，如结核杆菌需加入鸡蛋清、马铃薯、甘油等才能良好生长。入鸡蛋清、马铃薯、甘油等才能良好生长。3、选择培养基、选择培养基 在培养基中加入某些化学物质，而选在培养基中加入某些化学物质，而选择性地择性地让欲分离的细菌旺盛生长的培养基，让欲分离的细菌旺盛生长的培养基，使用后可以达到选择分离的目的。如胆盐使用后可以达到选择分离的目的。如胆盐和蔷薇色酸可以选择性地抑制和蔷薇色酸可以选择性地抑制G+G+菌的生长，菌的生长，而不影响而不影响GG菌的生长。在培养基中加入二菌的生长。在培养基中加入二药后可选择性地分离出肠道杆菌。药后可选择性地分离出肠道杆菌。利用细菌分解底物及其代谢产物的利
4、用细菌分解底物及其代谢产物的不同，可不同，可在培养基中加入某种物质和指在培养基中加入某种物质和指示剂示剂，即制为鉴别培养基，目的是使得，即制为鉴别培养基，目的是使得混合在一起的多种细菌在同一种培养基混合在一起的多种细菌在同一种培养基上生长时，表现出不同的、肉眼可鉴别上生长时，表现出不同的、肉眼可鉴别的变化，从而达到鉴别细菌的目的。的变化，从而达到鉴别细菌的目的。4 4、鉴别培养基、鉴别培养基5.5.厌氧培养基厌氧培养基厌氧菌不能在有氧环境中生长。厌氧菌不能在有氧环境中生长。将培养基与空将培养基与空气隔绝，或向培养基中加入一些物质，使培养气隔绝，或向培养基中加入一些物质，使培养基中的氧气耗尽基中
5、的氧气耗尽，则可用于培养厌氧菌。如肝则可用于培养厌氧菌。如肝片肉汤培养基，应用时于液体表面加盖液体石片肉汤培养基，应用时于液体表面加盖液体石蜡以隔绝空气。蜡以隔绝空气。区分选择培养基和鉴别培养基区分选择培养基和鉴别培养基选择培养基上的菌类，有选择培养基上的菌类，有2种或两种以上种或两种以上时，时，只有适应环境（选择培养基的基底）只有适应环境（选择培养基的基底）的菌种才能存活的菌种才能存活。鉴别培养基上的菌类，有两种或两种以鉴别培养基上的菌类，有两种或两种以上时，在培养基中加入某种试剂或化学上时，在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而药品，使培养后会发生某种变化，从而区别
6、不同类型的微生物（但区别不同类型的微生物（但培养基上的培养基上的各个菌种均不死亡各个菌种均不死亡）。）。三、制备培养基的基本程序三、制备培养基的基本程序配料配料溶化溶化测定及矫正测定及矫正pHpH过滤过滤分装分装灭菌灭菌无菌检验无菌检验备用备用培养基的基本要求培养基的基本要求1.含有丰富的营养物质，不含任何抑菌物质。2.具有适当的pH值和水分。3.均匀透明，易于观察。4.经过灭菌和无菌检验。1 1、细菌在固体培养基上的生长现象：、细菌在固体培养基上的生长现象：观察细菌在平板上的菌落特征：观察细菌在平板上的菌落特征：菌落：细菌接种在固体培养基上，经过一菌落：细菌接种在固体培养基上，经过一定时间的
7、培养后，表面可出现肉眼可见的单个细定时间的培养后，表面可出现肉眼可见的单个细菌集团，称为菌落。菌集团，称为菌落。四、细菌在培养基上的生长情况四、细菌在培养基上的生长情况形态、大小、边缘、表面构造（湿润度和光滑形态、大小、边缘、表面构造（湿润度和光滑度）、隆起度、透明度、颜色等，及在血平板度）、隆起度、透明度、颜色等，及在血平板上的溶血现象（上的溶血现象（溶血、溶血、溶血）。溶血）。2、细菌在半固体培养基中的生长现象有鞭毛的细菌，沿有鞭毛的细菌，沿穿剌线呈模糊穿剌线呈模糊羽毛羽毛状状生长。生长。无鞭毛的细菌，沿无鞭毛的细菌，沿穿剌线呈穿剌线呈清晰清晰的线的线状生长状生长。3、细菌在液体培养基中的
8、生长现象观察肉汤培养物的观察肉汤培养物的混浊度、管底沉淀、混浊度、管底沉淀、肉汤表面菌膜或菌肉汤表面菌膜或菌环，以及有无汽泡环，以及有无汽泡等。等。临床标本预处理增 菌接种培养基，分离单个菌落各种鉴定试验涂片染色快速诊断试验生化试验血清学实验涂片染色药敏试验动物试验初步诊断报告最终诊断报告第四节第四节 细菌病的一般诊断程序细菌病的一般诊断程序一、病料的采集、保存及运送一、病料的采集、保存及运送1 1）尽早采集尽早采集 一旦怀疑细菌感染，应及一旦怀疑细菌感染，应及时采集标本进行细菌学检验，尽早获得时采集标本进行细菌学检验，尽早获得病原学诊断和抗生素敏感资料，对细菌病原学诊断和抗生素敏感资料，对细
9、菌感染的治疗具有极其重要意义；感染的治疗具有极其重要意义；2 2）标本采集尽量在）标本采集尽量在用药前进行用药前进行；3 3）根据可疑病原菌和实验方法的不同）根据可疑病原菌和实验方法的不同选选择合适的采集时期择合适的采集时期；4 4 4 4）注意注意注意注意无菌操作无菌操作无菌操作无菌操作，尽量避免杂菌污染，尽量避免杂菌污染，尽量避免杂菌污染，尽量避免杂菌污染；5 5 5 5）注意采集的注意采集的注意采集的注意采集的方法和部位方法和部位方法和部位方法和部位；6 6 6 6）标本必须新鲜，）标本必须新鲜，）标本必须新鲜，）标本必须新鲜，及时运送及时运送及时运送及时运送；7 7 7 7）标本的）标
10、本的）标本的）标本的保存、处理要严格。保存、处理要严格。保存、处理要严格。保存、处理要严格。二、细菌的形态检查二、细菌的形态检查1.1.单染色法单染色法2.2.复染色法复染色法革兰氏（革兰氏（G）染色法染色法 革兰氏阳性菌（革兰氏阳性菌（G G+菌）蓝紫色菌）蓝紫色革兰氏阴性菌（革兰氏阴性菌（G G-菌菌）红色红色细菌的接种培养方法1.倾注平皿接种法2.平板划线分离法3.斜面接种法4.穿刺接种法5.液体培养基接种法三、细菌的分离培养三、细菌的分离培养必须用纯培养物鉴定必须用纯培养物鉴定选用单个菌落选用单个菌落四、细菌的生化试验四、细菌的生化试验1.1.糖分解试验糖分解试验2.2.维维-培试验培试验3.3.甲基红试验甲基红试验4.4.枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验5.5.吲哚试验吲哚试验6.6.硫化氢试验硫化氢试验7.7.触媒试验触媒试验8.8.氧化酶试验氧化酶试验9.9.脲酶试验脲酶试验五、动物接种试验五、动物接种试验 主要是为了证明所分离细菌是否有致病性。主要是为了证明所分离细菌是否有致病性。六、细菌的血清学试验六、细菌的血清学试验 主要用于细菌病的诊断和细菌的鉴定。主要用于细菌病的诊断和细菌的鉴定。