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1、实验八实验八实验八实验八 血型鉴定及交叉配血血型鉴定及交叉配血血型鉴定及交叉配血血型鉴定及交叉配血实验实验实验实验（一）ABO血型鉴定 1 1实验原理实验原理红细胞膜上具有血型糖蛋白，作为抗原，也称为凝集原；ABO血型就是根据红细胞表面抗原来确定的，根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。血清中含有相应的特异性抗体称为凝集素。凝集原和相应的凝集素特异性结合，使红细胞凝集成团，进而引起红细胞破裂，产生溶血。ABO血型鉴定的原理是利用红细胞凝集试验，将待测血液分别与已知含A抗体和B抗体的标准血清混合，观察是否发生凝集现象，判断待测血液红细胞上有何种抗原，由此确
2、定待测血液的血型。ABO血型分类ABO血型正反定型结果（一）ABO血型鉴定2 2血型鉴定方法血型鉴定方法标记凹载玻片：左上角写A，右上角写B。分别吸取标准A血清和标准B血清各1滴滴于双凹载玻片左端和右端。采血针刺破左手无名指尖，待血液出来后，用2支毛细滴管吸取血液，分别加入到玻片左、右两侧的血清内，并用牙签搅拌，使标准血清与血液混匀。（切勿混用毛细滴管和牙签！）手持玻片转动数次，转动时玻片应保持在一个水平面上，然后置室温下5min后观察结果。肉眼观察：如果外观略呈花边状或锯齿状，看上去有沉淀，则多为凝集；如果血滴呈均匀状态，边缘整齐，则多为不凝集。进一步在低倍镜下观察：在低倍镜下，如果观察到红
3、细胞凝集成团，或尚有少数游离细胞，则为凝集现象；如果红细胞均为游离状态，则为不凝集。根据镜下所见有无凝集现象判定血型。取干净载玻片取干净载玻片滴加定型剂滴加定型剂消毒消毒取血取血消毒消毒取血取血消毒消毒观察观察记录结果记录结果实验步骤实验步骤抗抗A抗抗B用7075的酒精消毒取血部位消毒取血部位用针扎一下消毒部位，使血冒出，立即滴一滴血液在抗A或B上。抗抗A抗抗B再用7075的酒精擦洗消毒刚用针扎的部位，然后再取一滴血液于抗B或A上。抗抗A抗抗B观察有无凝集，并按下表判定结果。血型抗A试剂抗B试剂ABOAB+-+-+-+呈现均匀的淡红色时，表明不凝集，用呈现均匀的淡红色时，表明不凝集，用“一一”
4、号表示。号表示。在试剂里凝结成絮团状，形成鲜明的对比，表明凝集，用在试剂里凝结成絮团状，形成鲜明的对比，表明凝集，用“十十”号表示。号表示。主侧配血主侧配血主侧配血主侧配血 用患者血清与供用患者血清与供用患者血清与供用患者血清与供者红细胞进行试验者红细胞进行试验者红细胞进行试验者红细胞进行试验次测配血次测配血次测配血次测配血 供血者血清与患供血者血清与患供血者血清与患供血者血清与患者红细胞进行试验者红细胞进行试验者红细胞进行试验者红细胞进行试验患者献血者主侧次侧（二）交叉配血试验（二）交叉配血试验 交叉配血的要求交叉配血的要求 主侧配血要求：主侧配血要求：主侧配血要求：主侧配血要求：绝对不可以
5、有凝集或溶绝对不可以有凝集或溶绝对不可以有凝集或溶绝对不可以有凝集或溶血现象。血现象。血现象。血现象。次测配血要求：次测配血要求：次测配血要求：次测配血要求：供血者血清加受血者红供血者血清加受血者红供血者血清加受血者红供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，可细胞在允许范围内，可细胞在允许范围内，可细胞在允许范围内，可以有凝集现象，但不可以有凝集现象，但不可以有凝集现象，但不可以有凝集现象，但不可以有溶血。以有溶血。以有溶血。以有溶血。凝集不凝集 交叉配血的目的交叉配血的目的n n交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受交叉配血试验是输血前必要的步
6、骤，主要是检查受交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要目的是为了防止输血后产生溶血性反应。目的是为了防止输血后产生溶血性反应。目的是为了防止输血后产生溶血性反应。目的是为了防止输血后产生溶血性反应。n n尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后
7、能保持不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持最长的存活时间。最长的存活时间。最长的存活时间。最长的存活时间。交叉配血试验方法交叉配血试验方法 盐水介质配血盐水介质配血盐水介质配血盐水介质配血 酶介质配血酶介质配血酶介质配血酶介质配血 菠萝酶，无花果酶，木瓜酶菠萝酶，无花果酶，木瓜酶菠萝酶，无花果酶，木瓜酶菠萝酶，无花果酶，木瓜酶 抗球蛋白介质配血抗球蛋白介质配血抗球蛋白介质配血抗球蛋白介质配血 经典方法，加经典方法，加经典方法，加经典方法，加LISSLISS（低离子介质溶液）的方法低离子介质溶液）的方
8、法低离子介质溶液）的方法低离子介质溶液）的方法 聚凝胺介质配血聚凝胺介质配血聚凝胺介质配血聚凝胺介质配血 凝胶方法配血凝胶方法配血凝胶方法配血凝胶方法配血 盐水介质配血方法盐水介质配血方法患者献血者主侧次侧离心看结果阳性阴性 抗球蛋白配血方法抗球蛋白配血方法患者献血者主侧次侧37 37水浴30分钟三洗 抗球蛋白方法配血方法抗球蛋白方法配血方法加抗球蛋白离心看结果阳性阴性 酶介质配血方法酶介质配血方法主次侧均加酶患者献血者主侧次侧 酶介质配血方法酶介质配血方法离心看结果阳性阴性37 37水浴30分钟二、二、Rh定型定型1、使用盐水介质试剂使用盐水介质试剂 用用LIM配制的红细胞悬液，可以代替配制的红细胞悬液，可以代替由生理盐水配制的红细胞悬液在盐水介质由生理盐水配制的红细胞悬液在盐水介质试剂中进行试剂中进行Rh定型，两者定型方法和效果定型，两者定型方法和效果均相同。均相同。聚凝胺聚凝胺(Polybrene)配血方法配血方法患者献血者主侧次侧室温放置1 分钟主次侧均加聚凝胺 聚凝胺聚凝胺(Polybrene)配血方法配血方法离心聚凝胺引起红细胞非特异性凝集阳性阴性主次侧均加重悬液看结果