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1、 医学微生物学实验三医学微生物学实验三南华大学病原学实验中心南华大学病原学实验中心微生物学与免疫学教研室微生物学与免疫学教研室1、细菌的人工培养（讲授）、细菌的人工培养（讲授）2、细菌的培养方法：、细菌的培养方法：固体培养基接种法（自做）；固体培养基接种法（自做）；半固体、液体培养基接种法（示教）半固体、液体培养基接种法（示教）3、葡萄球菌、链球菌培养及生化（示教）、葡萄球菌、链球菌培养及生化（示教）4、细菌的形态观察、细菌的形态观察 自阅片：自阅片：甲型链球菌、结核杆菌甲型链球菌、结核杆菌 示教片：示教片：淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭
2、疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌实验内容实验内容第四节第四节 细菌的人工培养细菌的人工培养 p31p31一、一、培养基培养基（culture medium）：）：是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的使用的混合营养物混合营养物制品制品。常用培养基的种类常用培养基的种类 按营养组成和用途分按营养组成和用途分厌氧培养基厌氧培养基基础培养基基础培养基增菌培养基增菌培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基二、细菌在培养基中的生长情况二、细菌在培养基中的生长情况 据物理状态分据物理状态分1 1、液体培养基：、液体培养基：均匀混浊均匀混浊、沉淀生长沉
3、淀生长、表面生长表面生长（菌膜）；（菌膜）；多用于增菌多用于增菌均匀混浊均匀混浊对照对照沉淀生长沉淀生长2 2、固体培养基：、固体培养基：含含1.5%1.5%琼脂琼脂 用于分离培养用于分离培养菌落菌落：单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见 的细菌集团。的细菌集团。纯培养纯培养：挑取一个菌落，移种到另一培养挑取一个菌落，移种到另一培养 基中，生长出来的细菌均为纯基中，生长出来的细菌均为纯 种，称为种，称为纯培养纯培养。菌落特征菌落特征大小、形状、颜色、气味、透明度、大小、形状、颜色、气味、透明度、光滑或粗糙、湿润或干燥、隆起或扁平、边缘整光滑或粗糙、湿润或干燥、隆起或扁平
4、、边缘整齐与否、是否溶血等齐与否、是否溶血等有助于细菌鉴定有助于细菌鉴定菌落（菌落（S型）型）菌苔菌苔菌落（菌落（R型）型）光滑型光滑型(S型型)粗造型粗造型(R型型)粘液型粘液型(M型型)3 3、半固体培养基：、半固体培养基：含含0.3%0.5%琼脂琼脂 鞭毛菌鞭毛菌混浊生长混浊生长（沿穿刺线呈云雾状（沿穿刺线呈云雾状/羽毛状）羽毛状）无鞭毛菌无鞭毛菌沿穿刺线呈沿穿刺线呈线状生长线状生长 用于用于检测细菌的动力检测细菌的动力和和保存菌种保存菌种斜面划线示意图斜面划线示意图4 4、斜面培养基接种法、斜面培养基接种法应用：短期保存菌种应用：短期保存菌种三、三、人工培养细菌的用途人工培养细菌的用途
5、u在医学中的应用在医学中的应用 1.1.感染性疾病的病原学诊断感染性疾病的病原学诊断：明确病因，指导用明确病因，指导用药药 2.2.细菌学的研究细菌学的研究：细菌遗传、变异、耐药性细菌遗传、变异、耐药性 3.3.生物制品的制备生物制品的制备：疫苗、类毒素、抗毒素疫苗、类毒素、抗毒素u在工农业生产中的应用在工农业生产中的应用（抗生素、维生素、酶制剂等）（抗生素、维生素、酶制剂等）u在基因工程中的应用在基因工程中的应用（基因工程菌基因工程菌乙肝疫苗）乙肝疫苗）进入实验内容讲授进入实验内容讲授1 1、固体培养基、固体培养基(平板平板)接种法接种法分区划线法分区划线法连续划线法连续划线法第一区划线第一
6、区划线灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环，取菌准备灭菌接种环，取菌准备分区划线法分区划线法原划线原划线标本：混合菌液标本：混合菌液分组：分组：1人一个固体平板人一个固体平板连续划线法连续划线法菌落示意图菌落示意图细菌在细菌在固体固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象细菌在固体培养基中的生长现象细菌在固体培养基中的生长现象 菌菌 落落 菌落特征菌落特征：大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光：大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光滑或粗糙、湿润或干燥、边缘整齐与否、溶血性等。滑或粗糙、湿润或干燥、边缘整齐与否、溶血性等
7、。菌落类型：菌落类型：S型、型、R型、型、M型菌落。型菌落。菌菌 苔苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌落（菌落（S型）型）菌苔菌苔菌落（菌落（R型）型）光滑型光滑型(S型型)粗造型粗造型(R型型)粘液型粘液型(M型型)注意事项注意事项1、无菌操作、无菌操作2、密而不重叠、密而不重叠3、勿划破琼脂、勿划破琼脂4、做好标记，、做好标记，第二天观察结果第二天观察结果2、葡萄球菌培养（示教）、葡萄球菌培养（示教）营养要求不高，普通培养基生长良好营养要求不高，普通培养基生长良好 菌菌 落落：S S型菌落，金黄型菌落，金黄色、表皮、腐生葡萄球色、表皮、腐生葡
8、萄球菌各自形成菌各自形成金黄色、白金黄色、白色、柠檬色色、柠檬色-脂溶性色素脂溶性色素血平板：血平板：金黄色葡萄球菌形金黄色葡萄球菌形成的成的-溶血环溶血环金黄色色素金黄色色素白色色素白色色素3 3、链球菌培养（示教）、链球菌培养（示教）血平板上的菌落：血平板上的菌落：甲型溶血性链球菌形甲型溶血性链球菌形成草绿色溶血现象，乙型溶血性链球菌形成草绿色溶血现象，乙型溶血性链球菌形成透明的完全溶血现象，丙型链球菌无溶成透明的完全溶血现象，丙型链球菌无溶血现象。血现象。甲链甲链溶血溶血草绿色溶血草绿色溶血乙链乙链溶血溶血丙链丙链不溶血不溶血4、常见致病菌的形态与染色性、常见致病菌的形态与染色性甲型溶血
9、性链球菌甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100自阅片之一自阅片之一结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌取材：痰涂片取材：痰涂片染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色放大倍数：放大倍数：10X100自阅片之二自阅片之二菌体染成菌体染成红色红色，细长略微弯曲杆细长略微弯曲杆菌，单个或分枝菌，单个或分枝状排列；状排列；（非抗酸菌及细非抗酸菌及细胞染成蓝色胞染成蓝色）淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌示教片之一示教片之一取材：泌尿道脓性分泌物取材：泌尿道脓性分泌物染色法：革兰染色染色法：革
10、兰染色放大倍数：放大倍数：10X100淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌中性粒细胞分叶核中性粒细胞分叶核淋球菌染成淋球菌染成红色红色/G-，肾形或豆形，成，肾形或豆形，成双排列双排列肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌示教片之二示教片之二取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100G+粗短杆菌，粗短杆菌，芽胞呈椭圆形，芽胞呈椭圆形，比菌体粗，次极比菌体粗，次极端，细菌呈端，细菌呈汤匙汤匙状或网球拍状状或网球拍状产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌示教片之三示教片之三取材：小鼠腹腔渗出液取材：小鼠腹腔渗出液染色法：革兰染色染色法：革兰
11、染色放大倍数：放大倍数：10X100G+粗大杆菌，粗大杆菌，两端几乎平切，两端几乎平切，在被感染得人在被感染得人或动物体内形或动物体内形成成明显的荚膜明显的荚膜炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌示教片之四示教片之四取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100G+粗大杆菌，粗大杆菌，有氧条件下形有氧条件下形成成椭圆形芽胞椭圆形芽胞，位于菌体中央位于菌体中央白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：美蓝染色染色法：美蓝染色放大倍数：放大倍数：10X100取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：染色法：Neisser
12、染色染色放大倍数：放大倍数：10X100示教片之五示教片之五菌体细长弯曲的杆菌，粗细不一，常一菌体细长弯曲的杆菌，粗细不一，常一端或两端膨大呈棒状；排列不规则，呈端或两端膨大呈棒状；排列不规则，呈栅栏状、栅栏状、V字形或字形或L字形。字形。异染颗粒异染颗粒1、细菌的人工培养（讲授）、细菌的人工培养（讲授）2、细菌的培养方法：、细菌的培养方法：固体培养基接种法（自做）；固体培养基接种法（自做）；半固体、液体培养基接种法（示教）半固体、液体培养基接种法（示教）3、葡萄球菌、链球菌培养及生化（示教）、葡萄球菌、链球菌培养及生化（示教）4、细菌的形态观察、细菌的形态观察 自阅片：甲型链球菌、结核杆菌自
13、阅片：甲型链球菌、结核杆菌 示教片：淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、示教片：淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌第第2 2页：页：实验名称：实验名称：细菌平板划线分离法细菌平板划线分离法 （记录实验结果绘一简图并描述平板上的（记录实验结果绘一简图并描述平板上的菌落特征菌落特征）第第3页页：实验名称：实验名称：细菌的形态观察（绘图）细菌的形态观察（绘图）甲型链球菌、结核杆菌、淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、甲型链球菌、结核杆菌、淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌 实验内容实验内容第第1页：页：实验名
14、称：细菌培养及形态观察实验名称：细菌培养及形态观察甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌取材：痰涂片取材：痰涂片染色法：抗酸染色染色法：抗酸染色放大倍数：放大倍数：10X100 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌取材：泌尿道脓性分泌物取材：泌尿道脓性分泌物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌肉毒梭菌取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌取材：小鼠腹腔渗出液取材：小鼠腹腔渗出液染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：革兰染色染色法：革兰染色放大倍数：放大倍数：10X100白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌取材：纯培养物取材：纯培养物染色法：染色法：Neisser染色染色放大倍数：放大倍数：10X100