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1、精选优质文档-倾情为你奉上Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)操作指南1. 适用范围:本使用规范适用于有机室所备有的Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。2. 仪器设备的主要技术指标:1) 梯度性能:保留时间标准偏差(SD)0.047min。2) ESI正离子灵敏度和精密度:测试样品:磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine),浓度:0.1pg/l指标要求:平均信噪比(S/N)3000:1;平均峰面积60000;峰面积相对标准偏差(%RSD)3.0%;保留时间标准偏差(SD)0.047min测试结果:信噪比(S
2、/N):4500psi;峰面积:;峰面积相对标准偏差(%RSD):2.5%;保留时间标准偏差(SD):0.00min,均符合指标要求。3) ESI负离子灵敏度和精密度:测试样品:氯霉素(chloramphenicol),浓度:0.05pg/l指标要求:平均信噪比(S/N)400:1;平均峰面积1000;峰面积相对标准偏差(%RSD)3.0%;保留时间标准偏差(SD)0.047min测试结果:信噪比(S/N):520psi;峰面积:1500;峰面积相对标准偏差(%RSD):2.8%;保留时间标准偏差(SD):0.00min,均符合指标要求。4) 系统精密度(TUV/PDA):峰面积相对标准偏差(
3、%RSD)0.5%;峰高相对标准偏差(%RSD)0.9%。5) NanoFlow正离子灵敏度 指标要求:峰强(m/z =785.8)1107,测试样品: Glu-Fibrinopeptide B,浓度:100fmol/l测试结果:峰强度(m/z =785.8):1.48107;符合指标要求。6) TRIZAIC正离子模式MS说明:测试样品:ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSA T10, PHO T88指标要求:保留时间标准偏差:0.25%测试结果:ADH T19:标准偏差为 0.02% (23.77min);PHO T
4、33:标准偏差为0.03% (25.12min);ENL T4:标准偏差为0.02% (21.83min);BSA T59:标准偏差为0.01% (21.58min);ENL T43:标准偏差为0.04% (22.33min);ADH T17:标准偏差为0.03% (23.31min);BSA T10:标准偏差为0.02% (24.41min);PHO T88:标准偏差为0.03% (24.81min)7) 系统性能测试一维系统精密度测试:测试样品17-OHP。一维保留时间重复性(PDA)指标:保留时间标准偏差(SD): 1.0s;一维峰面积重复性(PDA)指标:峰面积相对标准偏差(%RSD)
5、: 0.5%;一维峰高重复性(PDA)指标:峰高相对标准偏差(%RSD): 0.9%;二维系统精密度测试:测试样品17-OHP。二维保留时间重复性(PDA)指标:保留时间标准偏差(SD): 1.0s;二维峰面积重复性(PDA)指标:峰面积相对标准偏差(%RSD): 0.5%;二维峰高重复性(PDA)指标:峰高相对标准偏差(%RSD): 0.9%;所有检测方式的回收率指标:90.0%3. 仪器设备的使用环境要求: 1) 电力要求:仪器室电源要求相对稳定,电压变化要小,最好配备不间断稳压电源,防止意外停电。2) 工作温度:19-22度,不要超过25,保持恒温。3) 相对湿度:50%-70%4. 操
6、作程序: 4.1 开机4.1.1 打开电脑,首先打开自动进样器电源,再逐一打开质谱电源和UPLC各电源,各部件通过自检后,双击工作站图标进入Masslynx工作站。4.1.2 选择InstrumentMS Tune进入调谐界面。从调谐界面选择Vacuunpump,打开真空泵,开始抽真空。机械泵和涡轮分子泵开始工作。4.1.3 质谱上的真空灯开始闪烁,当系统达到真空状态,灯变为绿色,不再闪烁,同时观察调谐界面DiagnosticsTurbo Speed 泵转速达到100%即可,达到实验状态大约要抽真空4小时(注意:真空规,测量工具,无异常状况通常无需打开,尤其在刚开始抽真空时不要打开。)4.1.
7、4 气源压力设置:氮气:90-100psi。氩气:0.05Mpa,不超过0.1Mpa(实验前确认氩气瓶压力,低于1Mpa时需更换氩气。)4.2 准备UPLC系统4.2.1 准备流动相:用0.22m的膜过滤缓冲液,所有的缓冲液和超纯水都要新配制,超纯水和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐一定要可挥发的,而且浓度在2mM-5mM之间,不要超过10mM(注:若流动相含有缓冲盐,用完需使用大比例水相长时间冲洗系统和色谱柱,若流动相含有酸,必须为挥发性酸,浓度范围为0.01%-0.1%,进样器高压密封垫要求PH2,不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等离子对试剂)。有机相要使用原装进口的色谱纯。(2) SW+Purg
8、e(弱洗:10%ACN+90%纯水或者与流动相梯度初始比例相同)用于清洗泵头和密封清洗;Wash(强洗:90%ACN+10%纯水);(3)准备样品:所有样品最好都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解,并用0.22m的膜过滤。4.2.2 初始化UPLC泵:在Masslynx主页面上点击MS Console,进入系统控制界面,点击左边Quaternary Solvent Manager选择CONTROLPrime A/B/C/D solvent,选择A/B/C/D输入1min,如果更换了流动相则输入3min,按start。4.2.3 初始化UPLC自动进样器:UPLC控制台上选择Sample Man
9、ager,选择ControlPrime syrings,灌注进样器和洗针系统。选择Sample syringe and syringes, Number of cycles 一般选1,但在更换洗针溶液后选3。完成后,UPLC自动进样器准备好。4.2.4 灌注完泵和自动进样器后UPLC准备好。4.3 建立一个Project如果在已有的Project下进行试验,此步可以不做。从Masslynx主窗口选择FileProject Wizard,出现对话窗口,点击Yes,输入Project Name,选择Create using existing project as template.点击Browse
10、选择project的模板。 4.4 准备质谱如果在已有的Project下进行试验,此步可以不做。 4.4.1 MS Tune,首先打开氮气,再开高压(红色表示高压已关,绿色表示高压已开)。(注:一定要打开氮气和高压才能开流动相,关闭流动相后才能关高压和氮气)。4.4.2点击ES+ Source. 输入以下各参数: Capillary (kV): 3;Cone (V): 30;DesolvationTemp (): 550;Desolvation(L/hr): 800;Cone (L/Hr): 50;以下参数最好直接使用intellistart自动校正仪器质量数时自动生的参数:LM Resolu
11、tion 1: 3;HM Resolution 1: 15;Ion Energy 1: 0.5;LM Resolution 2: 3;HM Resolution 2: 15;Ion Energy 2: 0.5;Collision: 2。4.5 ESI调谐调出目标化合物的最佳质谱参数。4.5.1把调谐液放入A/B/C号位(注:浓度在0.1-1ppm之间,根据实际的灵敏度调整样品浓度)。4.5.2把流动相的流速设为0.2ml/min,有机相和水相比例为1:1。点击Tune界面下的Fluidics,点击Purge syringe 灌注注射器。设置Infusion 流速5uL/min,根据灵敏度可适当
12、调整。设置Flow State模式(Infusion:直接进样;Combined:液相和样品混合进样;LC:液相进样; Waste:废液)。4.5.3 选择Xevo TQ-S MS Detector下面的IntelliStart:Sample Tune and Develop Method 点击Start,调出界面,输入各参数,系统开始自动优化目标化合物的质谱参数。4.6建立质谱的MRM方法。选择InstrumentMS Method进入质谱方法编辑界面。打开新建质谱方法窗口,再点击MRM,按调谐结果输入下列参数:离子模式、化合物名称、母离子质量数、子离子质量数、离子驻留时间、锥孔电压、碰撞能
13、量和MRM运行时间等。4.7建立UPLC方法。选择InstrumentInlet Method进入UPLC方法编辑界面。逐一编辑泵的方法、自动进样器的方法和紫外检测器的方法等。最后把UPLC的方法命名保存。4.8建立样品运行序列表,运行采集数据。在Masslynx主界面上点击FileNew,新建序列表,输入文件名、注释、质谱方法、液相方法、瓶号、进样体积等参数,最后把编辑好的序列表命名保存。4.9处理数据。4.10 关机 一般质谱仪部分不需要关机,不用时只要保持在Standby状态下即可。但如果长时间不用,或是对仪器进行清洗和维修时需要关机。 4.10.1 首先停止液相色谱流速,如果还需要冲洗
14、色谱柱,可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。4.10.2 点击MS Tune进入调谐窗口,点击Standby,关闭高压,让MS进入待机状态时,指示灯会由绿色变成红色。4.10.3 等脱溶剂气温度降到常温,关闭氮气。4.10.4 选择OptionVent,这时质谱开始泄真空,待机械泵停止运行,同时观察调谐界面DiagnosticsTurbo Speed 泵转速为0时即可关闭质谱电源。5. 仪器基本维护与使用注意事项:5.1 仪器室要保持整洁、干净、无尘;配套设施布局合理。5.2 开高压之前一定要先开氮气,关氮气之前一定要先关高压。5.3 溶剂和流动相的要求,所有的流动相都要用0.22m的滤膜过
15、滤,水相要用前新配,并不得超过两天。样品必须使用0.22m的滤膜过滤。 5.4 ESI离子化与溶剂密切相关,在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面:三氟乙酸(TFA)多用于蛋白质和多肽分析,但对ESI离子化有抑制效应:三乙胺(TEA)在m/z 102处有较强的M+H+峰,有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ESI条件下的离子化,也有可能会增强某些碱性化合物在负离子ESI条件下的响应。注意!下列的溶剂添加剂会产生严重的离子化抑制,建议禁用:强酸强碱、不挥发性酸及相应的盐(如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等)、表面活性剂、离子对试剂。5.5 定期清洗样品锥孔:关闭隔断阀,取下样品锥孔,先用甲醇:水:甲
16、酸(45:45:10)的溶液超声清洗20min,然后分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗10分钟,待晒干后再安装到仪器上。当灵敏度下降时,需要清洗Ion Block、二级锥孔和RF lens。5.6 实验完毕要清洗进样针、进样阀等,用过含酸的流动相后,色谱柱、离子源都要用甲醇/水冲洗,延长仪器寿命。仪器长时间不用,有管路用纯甲醇灌注。5.7 真空无油泵的密封圈1年更换1次。5.8 系统安全:注意!质谱连接的电脑禁止更改网络设置,禁止安装防火墙。尽量避免使用U盘等移动存储设备。请使用光盘刻录来完成数据的拷贝。6. 突发情况的处理 操作时如果发生电脑死机的情况,一般不需要关闭仪器部分,只需强制关闭电脑主机,重新启动电脑,连接工作站,即可恢复正常。 如果发生停电事故,一般UPS可以保障仪器不会马上断电,但应当根据停电时间长短,采取相应的措施。(长时间断电(3小时以上)建议停机)。专心-专注-专业