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1、第三节吸光光度法的仪器第1页，本讲稿共13页一、吸光光度计的基本部件一、吸光光度计的基本部件l一般由五部分组成：一般由五部分组成：光源光源光源光源单色器单色器单色器单色器吸收池吸收池吸收池吸收池检测系统检测系统检测系统检测系统信号显示系统信号显示系统信号显示系统信号显示系统第2页，本讲稿共13页（一）光源（一）光源l作用：作用：提供一定波长范围的复合光。提供一定波长范围的复合光。l要要求求：能能提提供供具具有有足足够够发发射射强强度度、稳稳定定且且波波长长连连续续的的复复合合光光，同同时时发发射射光光的的强强度度还还应应不不随随波波长长的的变变化化而而明明显显改变。改变。l 常常用用的的光光源
2、源为为6 12伏伏低低压压钨钨丝丝灯灯，发发射射的的复复合合光光的的波波长长约约在在400 2500nm。当当在在近近紫紫外外光光区区测测定定时时应应使使用用氢氢灯灯或或氘氘灯灯作作光光源源，发发射射的的波波长长为为185 375nm。电电源源由由恒恒温温器器供供给给；为为了了保保持持光光源源强强度度的的稳稳定定，以以获获得得准准确确的的测测定定结结果果，电电压压必必须稳定。须稳定。第3页，本讲稿共13页（二）单色器（分光系统）（二）单色器（分光系统）l作用：把复合光中分出所需要的单色光。作用：把复合光中分出所需要的单色光。(1)棱镜是根据不同波长棱镜是根据不同波长光的折射率不同来分光的。光的
3、折射率不同来分光的。(2)光栅是根据光的衍射和光栅是根据光的衍射和干涉原理来分光的。干涉原理来分光的。1.玻璃应在波长玻璃应在波长3603200nm范围使用，主要用于可见分光光度计。范围使用，主要用于可见分光光度计。2.石英可用于波长范围一般为石英可用于波长范围一般为2004000nm，适用于紫外，适用于紫外-可见分光光度计。可见分光光度计。第4页，本讲稿共13页（三）吸收池（比色皿）（三）吸收池（比色皿）作用：作用：盛装参比溶液、试液溶液。盛装参比溶液、试液溶液。比比色色皿皿是是用用透透明明无无色色的的光光学学玻玻璃璃制制作作的的。大大多多数数比比色色皿皿为为长长方方形形，也也有有圆圆柱柱形
4、形的的。一一般厚度为般厚度为0.5、1、2和和3厘米。厘米。(1)在可见光区测定时，使用玻璃吸收池；在可见光区测定时，使用玻璃吸收池；(2)在紫外光区测定时，使用石英吸收池。在紫外光区测定时，使用石英吸收池。第5页，本讲稿共13页（四）检测系统（四）检测系统(又叫光电转化器又叫光电转化器)l作用：作用：检测被吸收的光。检测被吸收的光。l 在在光光度度计计中中，常常用用的的是是硒硒光光电电池池。晒晒光光电电池池和和眼眼睛睛相相似似，对对于于各各种种不不同同波波长长的的光光线线，灵灵敏敏度度是是不不同同的的，对对光光的的响响应应范范围围为为300800nm，对对于于波波长长为为500600nm的的
5、光光线线最最灵灵敏敏，而而对对紫紫外外线线，红红外外线线则则不不能能应应用。用。l 光光电电管管和和光光电电倍倍增增管管用用于于较较精精密密的的分分光光光光度度计计中中。具具有灵敏度高、光敏范围广及不易疲劳等特点。有灵敏度高、光敏范围广及不易疲劳等特点。第6页，本讲稿共13页（五）信号显示系统（五）信号显示系统l作用：作用：记录、显示测量结果。记录、显示测量结果。l 早早期期使使用用的的是是检检流流计计、微微安安表表、电电位位计计、数字电压表、自动记录仪等。数字电压表、自动记录仪等。l 现现代代的的分分光光光光度度计计广广泛泛采采用用数数字字显显示示器器、函数记录仪、示波器及数据处理台等。函数
6、记录仪、示波器及数据处理台等。第7页，本讲稿共13页二、吸光度的测量原理二、吸光度的测量原理l 分分光光光光度度计计实实际际上上测测得得的的是是光光电电流流或或电电压压，通通过过转转换换器器将将测测得得的的电电流流或或电电压压转转换换为为对对应应的的吸吸光光度度A。测测定定时时，只只要要将将待待测测物物质质推推入入光光路路，即即可可直直接接读读出出吸吸光光度值。度值。l测定步骤：测定步骤：l 1.调节检测器零点，即仪器的机械零点。调节检测器零点，即仪器的机械零点。l 2.应用不含待测组分的参比溶液调节吸光零点。应用不含待测组分的参比溶液调节吸光零点。l 3.测定待测组分的吸光度。测定待测组分的
7、吸光度。第8页，本讲稿共13页三、分光光度计的类型三、分光光度计的类型l1.可见分光光度计可见分光光度计l2.紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计l3.红外分光光度计红外分光光度计第9页，本讲稿共13页(一一)单光束分光光度计单光束分光光度计 分为：分为：721、722、751型。型。751型型分分光光光光度度计计是是一一种种波波长长范范围围较较宽宽(2001000nm)、精精密密度度较较高高的的分分光光光光度度计计。由由光光源源(钨钨丝丝灯灯或或氢氢灯灯)发发出出的的光光线线由由反反射射镜镜反反射射，使使光光线线经经狭狭缝缝的的下下半半部部，经经准准光光镜镜进进入入单单色色器器棱棱镜镜色色
8、散散底底，由由准准光光镜镜将将光光聚聚焦焦于于狭狭缝缝上上半半部部而而射射出出，经经液液槽槽照照射射于于光光电电管管上上。由由此此可可见见，仪仪器器用用同同一一狭狭缝缝作作入入光光和和出出光光狭狭缝缝，它它们们始始终终具具有有相相同的宽度。同的宽度。第10页，本讲稿共13页l(1)波长波长200-320nm范围用氢灯作光源，波长范围用氢灯作光源，波长320-1000nm范围用钨丝灯作光源。范围用钨丝灯作光源。l(2)棱镜和透镜均由石英材料作成，反光镜和准光镜表面棱镜和透镜均由石英材料作成，反光镜和准光镜表面镀铝。所以全部系统保证紫外光谱通过。镀铝。所以全部系统保证紫外光谱通过。l(3)波长波长200-625nm用蓝敏光电管用蓝敏光电管(GD-5)测量透射光强度，波测量透射光强度，波长长625-1000nm用红放光电管用红放光电管(GD-6)测量透射光强度。测量透射光强度。l(3)吸光度和透光度通过显示屏读出。吸光度和透光度通过显示屏读出。第11页，本讲稿共13页(二二)双光束分光光度计双光束分光光度计 第12页，本讲稿共13页(三三)双波长分光光度计双波长分光光度计第13页，本讲稿共13页