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1、微生物与免疫学试验（三）微生物与免疫学试验（三）实验内容实验内容一、录像：微生物学发展史一、录像：微生物学发展史二、示教：细菌生长现象、细菌变异二、示教：细菌生长现象、细菌变异 消毒灭菌器材消毒灭菌器材三、操作：药物敏感实验三、操作：药物敏感实验、划线分离、划线分离细菌生长现象细菌生长现象(1)液体培养基液体培养基v沉淀生长、混浊生长、表面生长沉淀生长、混浊生长、表面生长(2)半固体培养基（半固体培养基（0.1%0.3%琼脂粉）琼脂粉）v混浊生长混浊生长、线状生长线状生长(3)固体培养基（固体培养基（1.4%2%琼脂粉）琼脂粉）v菌落、菌苔菌落、菌苔液体培养基液体培养基沉沉淀淀生生长长混混浊浊
2、生生长长表表面面生生长长半半固固体体培培养养基基有有鞭鞭毛毛细细菌菌无无鞭鞭毛毛细细菌菌线线状状生生长长混混浊浊生生长长（动力试验）（动力试验）固体培养基固体培养基菌苔菌苔菌落菌落细菌的变异细菌的变异遗传性变异遗传性变异非遗传性变异非遗传性变异遗传性变异（基因型变异）遗传性变异（基因型变异）非遗传性变异（表型变异）非遗传性变异（表型变异）遗传性变异遗传性变异非遗传性变异非遗传性变异基因改变基因改变+-遗传遗传+-可逆性可逆性-+外界环境外界环境-+变异幅度变异幅度个别细胞个别细胞群体群体一、菌落变异（一、菌落变异（SR变异）变异）S型型菌菌落落(Smooth)光光滑滑菌菌落落 表表面面光光滑滑
3、有有光光泽泽，边缘整齐。边缘整齐。R型型菌菌落落(Rough)粗粗糙糙菌菌落落 表表面面粗粗糙糙而而暗暗淡淡，边缘不整齐。边缘不整齐。菌菌落落变变异异是是由由于于菌菌体体本本身身起起变变化化。一一般般光光滑滑的的细细菌有毒力；粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。菌有毒力；粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。smooth cloneRough clone二、鞭毛变异（二、鞭毛变异（HO变异）变异）细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有鞭毛的细菌。鞭毛的细菌。有鞭毛的细菌点种在琼脂平板上，由于鞭毛的有鞭毛的细菌点种在琼脂平板上，由于鞭毛的动力使细菌在平板上弥散生长，称
4、迁徙现象，动力使细菌在平板上弥散生长，称迁徙现象，菌落形似薄膜（德语菌落形似薄膜（德语hauch意为薄膜），故称意为薄膜），故称H菌落。若细菌失去鞭毛，只能在点种处形成菌落。若细菌失去鞭毛，只能在点种处形成不向外扩展的单个菌落，称为不向外扩展的单个菌落，称为O菌落（德语菌落（德语Ohne hauch意为无薄膜）意为无薄膜）变形杆菌变形杆菌 0.1%石炭酸石炭酸迁徙生长（迁徙生长（H）点状生长、单个菌落（点状生长、单个菌落（O）划线分离注意事项划线分离注意事项一、只取一、只取一环一环细菌即可细菌即可二、二、1区划线部分占平板的区划线部分占平板的1/3至至 1/2，划线时要连续，划线时要连续三、三
5、、2区与区与1区、区、3区与区与2区之间区之间 只有只有最初最初12条线条线有连接有连接四、需四、需充分充分利用平板、注意贴利用平板、注意贴 标签位置、平板摆放标签位置、平板摆放123药敏实验药敏实验材料：材料：（G菌、菌、G-菌）细菌菌）细菌1824小时斜面培养物，固体培养基小时斜面培养物，固体培养基平板，抗菌药物干燥滤纸小圆片（青，氯，南，氟），接平板，抗菌药物干燥滤纸小圆片（青，氯，南，氟），接种环，镊子，种环，镊子，95酒精酒精方法：方法：无菌法取斜面培养物上的细菌无菌法取斜面培养物上的细菌接种环在平板内做连续划线，使细菌密布平板表面接种环在平板内做连续划线，使细菌密布平板表面用用镊镊
6、子子蘸蘸酒酒精精通通过过火火焰焰三三次次待待冷冷却却后后，分分别别夹夹取取含含抗抗菌菌药药物的纸片，贴在琼脂表面物的纸片，贴在琼脂表面注注意意：各各纸纸片片间间距距不不小小于于2cm，距距平平板板边边缘缘不不小小于于1cm，在平板边缘做好标记在平板边缘做好标记37度度温箱培养温箱培养24小时后，测量抑菌圈直径小时后，测量抑菌圈直径药物敏感实验注意事项药物敏感实验注意事项一、同组人需一、同组人需分别分别接种接种G、G细菌细菌二、连续划线、细菌二、连续划线、细菌密布密布平板平板三、镊子用前、用后必须灭菌并注意防火三、镊子用前、用后必须灭菌并注意防火四、贴纸片距离、纸片标记（与瓶上标记四、贴纸片距离
7、、纸片标记（与瓶上标记 吻合）；贴标签位置吻合）；贴标签位置青霉素青霉素 为为内酰胺类抗生素。内酰胺类抗生素。繁殖繁殖 期杀菌，作用机制为抑制敏期杀菌，作用机制为抑制敏 感菌细胞壁的形成。感菌细胞壁的形成。氯霉素氯霉素 对对G+、G-菌均有抗菌活性。菌均有抗菌活性。氟哌酸氟哌酸 抗菌谱广，对抗菌谱广，对G-菌和部分菌和部分G+菌具有较强的抗菌活性。菌具有较强的抗菌活性。氨曲南氨曲南 单环类抗生素。作用机制为单环类抗生素。作用机制为 抑制菌细胞壁的合成，并抑抑制菌细胞壁的合成，并抑 制细胞壁水解酶使细胞渗制细胞壁水解酶使细胞渗 性发生改变。性发生改变。细菌对药物的敏感度以纸片周围抑菌圈直细菌对药物的敏感度以纸片周围抑菌圈直径的大小为标准。抑菌圈愈大径的大小为标准。抑菌圈愈大,说明细菌对说明细菌对该药物愈敏感。该药物愈敏感。(1)抑菌圈直径大于抑菌圈直径大于 15 毫米为高度敏毫米为高度敏感感。(2)抑菌圈直径在抑菌圈直径在 10-15 毫米为中度敏毫米为中度敏感感。(3)抑菌圈直径在抑菌圈直径在 7-9 毫米为低度敏感。毫米为低度敏感。(4)无抑菌圈为无抑菌圈为不敏感不敏感。结果判断结果判断:实验报告实验报告记录药敏实验结果（表格）记录药敏实验结果（表格）通知：下两次实验课需带学生证借显微镜通知：下两次实验课需带学生证借显微镜