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1、微生物学基础知识第一章微生物概述一.什么是微生物微生物是一类肉眼不克不及直截了当看见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大年夜几百倍、几千倍甚至几万倍才能不雅察到的微小生物的总称。微生物具有形体微小、构造简单；滋长灵敏、轻易变异；种类繁多、分布广泛等特点。二.微生物的分类：依照微生物有无细胞全然构造、分化程度、化学构成等特点，可分为三大年夜类。1.非细胞型微生物无细胞构造，无产生能量的酶体系，由单一核酸（DNA/RNA）和蛋白质衣壳构成，必须在活细胞内增殖。病毒属于此类微生物。2.原核细胞型微生物细胞核分化程度低，只有 DNA 盘绕而成的拟核，无核仁和核膜。这类微生物包含细菌、衣原体、支原体、立
2、克次体、螺旋体和放线菌。3.真核细胞型微生物细胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色体，能进行有丝决裂。如真菌、藻类等。三.微生物的感化及损害1.微生物的感化绝大年夜多半微生物对人和动物是有益的，已广泛应用于农业、食物、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的感化。例如与我们日常生活紧密相干的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。2.微生物的损害微生物中也有一部分能引起人及动、植物产生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物。如人类的专门多感染病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。从药品临盆的卫生学而言，微生物对药品的原料、临盆情形和成品的污染
3、是造成临盆掉败、成品不合格的重要身分。第二章微生物的类群和形状构造一.细菌细菌是一类细胞细而短、构造简单、细胞壁坚强，以二决裂方法无性滋长的原核微生物，分布广泛。1.细菌的形状与构造不雅察细菌最常用的仪器是光学显微镜，其大年夜小能够用测微尺在显微镜下测量，一样以微米为单位。细菌按其形状不合，重要分为球菌、杆菌和螺形菌三类。（1）球菌多半球菌直径在 1 微米阁下，外不雅呈球形或近似球形。因为滋长时决裂平面不合可形成不合的分列方法，分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。（2）杆菌形状多半呈直杆状，也有的菌体稍弯，多半呈分散存在，也有的呈链状分列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。（3）螺形菌菌体曲折，呈
4、弧形或螺旋形。如幽门螺杆菌。细菌虽小，仍具有必定的细胞构造和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等各类细菌都有，是细菌的全然构造。2.细菌的滋长二决裂滋长是细菌最广泛、最重要的滋长方法。在决裂前先延长菌体，染色体复制为二，然后垂直于长轴决裂，细胞赤道邻近的细胞质膜凹陷进展，直至形成横隔阂，同时形成横近邻，如许便产生两个子细胞。细菌进展速度专门快，一样约 20min 决裂一次。若按此速度运算，细菌群体将宏大年夜到不可思议的程度。但事实上因为细菌滋长中养分物质的逐步消费，有害代谢产品的逐步积聚，细菌弗成能始终保持高速度的无穷滋长。经由一段时刻后，细菌滋长速度逐步减慢，逝世亡菌数增多，活菌增长率随之降
5、低并趋于停止。3.细菌的菌落单个或少数细菌细胞进展滋长后，会形成以母细胞为中间的一堆肉眼可见、有必定形状构造的子细胞集团，这确实是菌落。细菌菌落常表示为潮湿、粘稠、滑腻、较透亮、易挑取、质地平均以及菌落正不和或边沿与中心部位色彩一致等。二.真菌真菌是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方法生计，少数为单细胞，多半为多细胞，能进行无性或有性滋长的一类真核细胞型微生物。真菌包含单细胞与多细胞两类。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为酵母菌；多细胞真菌由菌丝和孢子构成，并交错成团，称丝状菌或霉菌。真菌进展的最适的温度为 2228，最适的 pH 值为 46。其滋长才能强，但进展速度比细菌慢，常需 1-4 周
6、才形成菌落。真菌对热的抗击力不强，一样加热6070 1 小时即被杀逝世，但对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抗击力，但对 2.5碘酒、10甲醛则较敏锐。1.霉菌霉菌是丝状真菌的俗称，意即发霉的真菌，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大年夜型的子实体。（1）霉菌的形状、大年夜小和构造构成霉菌养分体的全然单位是菌丝。菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下不雅察，专门像一根透亮胶管，它的直径一样为 3-10 微米，比细菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产生分枝，专门多分枝的菌丝互订交错在一路，就叫菌丝体。（2）霉菌的滋长霉菌有着极强的滋长才能，同时滋长方法也是多种多样的。在
7、天然界中，霉菌重要依附产生形形色色的孢子进行滋长。孢子有点像植物的种子，只是数量专门多，专门小。霉菌的孢子具有小、轻、干、多，以及形状光荣各别、休眠期长和抗逆性强等特点，每个个别所产生的孢子数，经常是成千上万的，有时竟达几百亿、几千亿甚至更多。这些特点有助于霉菌在天然界中到处分布和滋长。对人类的实践来说，孢子的这些特点有利于接种、扩大年夜培养、菌种选育、保藏和剖断等工作，对人类的晦气之处则是易于造成污染、霉变和易于传播动植物的霉菌病害。（3）霉菌的菌落因为霉菌的菌丝较粗而长，因而霉菌的菌落较大年夜，有的霉菌的菌丝舒展，没有局限性。菌落质地一样比较松散，外不雅干燥，不透亮，显现或紧或松的蛛网状、
8、绒毛状或棉絮状；菌落与附着物的连接慎密，不易挑取；菌落正不和的色彩和边沿与中间的色彩常不一致。2.酵母菌酵母菌在天然界平分布专门广，专门爱好在偏酸性且含糖较多的情形中进展，例如，在生果、蔬菜、花蜜的别处和在果园泥土中最为常见。（1）酵母菌的形状、大年夜小和构造酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形状平日有球形、卵圆形、腊肠形、卵形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个别要大年夜得多，一样为 1-5 微米5-30 微米。酵母菌具有典范的真核细胞构造,有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等。（2）酵母菌的滋长酵母菌有多种滋长方法，包含无性滋长和有性滋长。有人把只进行无性滋长的酵母菌称作假
9、酵母，而把进行有性滋长的酵母菌称作真酵母。（3）酵母菌的菌落大年夜多半酵母菌的菌落特点与细菌类似，但比细菌菌落大年夜而厚，菌落别处滑腻、潮湿、粘稠，轻易挑起，菌落质地平均，正不和和边沿、中心部位的色彩都专门均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。三.病毒病毒属非细胞型微生物，在天然界分布专门广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中借居并引起感染。病毒是体积最小、构造最简单的微生物，它仅有一种核酸（DNA 或 RNA）作其遗传物质。病毒必须在宿主活细胞内寄生，依附细胞供给的能量、养分物质及生物大年夜分子合成机制，完成病毒的复制过程。病毒与人类的关系极为紧密，人类的感染病约 75是由病毒引起的
10、。有些病毒感染性强，可引起世界大年夜风行（如流感、艾滋病等）。1.病毒的大年夜小、形状和构造病毒体积微小，大年夜多半病毒只有采取电子显微镜将其放大年夜数千、数万倍才能看见。病毒的形状不一，全然可归纳为三种：杆状、球状和这两种形状结合的复合型。病毒没有细胞构造，病毒粒子的重要成分是核酸和蛋白质，在宿主细胞协助下，经由过程核酸的复制和核酸蛋白装配的情势进行增殖。病毒的构造平日有螺旋对称型、20 面体立体对称型和复合对称型。2.病毒的增殖病毒只有在宿主的活细胞里才能进行增殖。病毒的增殖不是二决裂方法，而是以其基因组为模板，藉 DNA 多聚酶或 RNA 多聚酶以及其它须要身分，经由复杂的生化合成过程，
11、复制出病毒的基因组。现在宿主细胞的生化合成受到克制，病毒基因则经由转录、翻译等过程，产生大年夜量病毒蛋白质，再经由装配，最终开释出子代病毒。病毒这种以核酸分子为模板进行增殖的方法称为自我复制。3.理化身分对病毒的阻碍（1）物理身分温度多半病毒耐冷不耐热。在干冰温度（-70）和液氮温度（-196）下，病毒感染性可保持数月甚至数年。在5060 30 分钟，100几秒钟即可灭活。pH多半病毒在 pH59 范畴内稳固，强酸或强碱前提下可被灭活。射线 X 射线、射线和紫外线都能灭活病毒。（2）化学身分重要有化学消毒剂、抗生素及中草药等。除强酸、强碱消毒剂外，酚类、氧化剂、卤素类、醇类等对病毒均有灭活感化
12、。例如 2003 年非典时代，大年夜家都用 84、过氧乙酸等来消毒，84 的重要成分确实是次氯酸钠，确实是刚才所说的卤素类消毒剂，而过氧乙酸的确实是冰醋酸和过氧化氢按必定比例混淆制成的，属于强酸加氧化。第三章消毒与灭菌下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度。消毒：杀逝世物体上病原微生物的方法,并不必定能杀逝世含细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包含杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：克制体内或体外细菌的进展滋长。常用的抑菌剂为各类抗生素，可克制细菌的滋长。防腐：防止或克制体外细菌进展滋长的方法，细菌一样不逝世
13、亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度经常为防腐剂。消毒与灭菌的方法一样可分为物理学方法和化学方法两大年夜类。一.物理消毒灭菌法用于消毒灭菌的物理身分有热力、辐射、过滤等。1.热力灭菌法高温对细菌具有明显的致逝世感化，是以最常用于消毒与灭菌。多半无芽孢的细菌经 5560感化 3060 分钟后逝世亡。经 80湿热 510 分钟可杀逝世所有细菌滋长体、真菌和酵母菌。细菌芽孢对高温有专门强的抗击力，例如炭疽芽孢杆菌的芽孢，耐受 515 分钟的煮沸，而肉毒梭菌的芽孢则需煮沸 35 小时才逝世亡。热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两大年夜类，雷同温度下，后者的灭菌效力比前者大年夜。2.辐射灭菌法（1）
14、紫外线感化于 DNA，使细菌DNA 的复制和转录受到干扰，导致细菌变异或逝世亡。常用于室内的空气消毒。（2）电离辐射对各类细菌均有致逝世感化。常用于大年夜量一次性医用塑料成品的消毒和食物的消毒。（3）微波是一种波长为 1mm1m 的电磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜及陶瓷等物质，但不克不及穿透金属别处。多用于考查室用品、无菌室的器具的消毒。3.滤过除菌法用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目标。滤菌器含有微微小孔0.22 微米,只许可液体或气体经由过程,而大年夜于孔径的细菌等颗粒不克不及经由过程。有用范畴：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。二.化学消毒灭菌法专门多化学药物能阻碍微生
15、物的化学构成、物理构造和心理活性，从而发挥防腐、消毒及灭菌的感化。洁净室(区)应按期消毒，应用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应按期改换，防止产生耐药菌株。常用消毒剂的种类和用处类别酚类醇类氧化剂感化机制蛋白变性，细胞膜毁伤蛋白变性氧化、蛋白沉淀常用种类石炭酸消毒乙醇高锰酸钾果消毒皮肤、粘膜、小创伤消重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞毒塑料、玻璃器材、皮肤氧化剂氧化、蛋白沉淀过氧乙酸、碘酒消毒手术洗手、浸泡手术器别处活性剂蛋白变性，细胞膜毁伤新洁而灭械皮肤、体温计消毒皮肤、尿道、蔬菜、生用处地面、器具别处、皮肤第四章 GMP 与微生物药品临盆中微生物的生态学分布在药品临盆中
16、，因为受到各类要素（制药厂房情形的空气、制药用水、操作人员、物料、设备等）的阻碍，都可能导致药品的微生物污染。是以，GMP 对各类要素都提出了防止污染的全然要求。中国药典微生物限度检查律例定的检查项目包含细菌数、霉菌数、酵母菌数和操纵菌检查。1.空气中的微生物空气本身并不产生污染，因为空气不含须要的水分和养分，不是合适微生物进展滋长的天然情形，然则一样的大年夜气情形仍含有许多的细菌、霉菌和酵母菌。空气中的微生物来自尘土微粒（天然身分如风，工资身分如车），来自人的皮肤与衣服，以及谈话、咳嗽、打喷嚏等造成的飞沫。空气中微生物数量取决于尘土量和活动状况，例如，有爽朗人群的处所微生物多，不洁净的房间比
17、洁净的房间多，潮湿的处所比干燥的处所多。是以，空气是侵袭我们产品的污染物的重要序言。是以保持空气洁净是极为重要的。在药品临盆中，削减空气中微生物数量的方法有多种，常用的有以下 3 种方法：空气洁净技巧采取的过滤方法过滤是最常用的方法。过滤介质种类专门多，例如：纤维素、玻璃棉或人造纤维等。空气净化妆置可用于全部房间如无菌操作室，也可只限于操作区域局部如超净工作台。化学消毒方法采撤消毒剂感化于室内空气和物体别处。紫外线照耀方法采取紫外线对室内空气进行照耀。2.制药用水中的微生物在临盆过程中，水是应用最广泛的原料之一。从理论上来讲，微生物在纯水中是不克不及进展的。然则，所有的各类水不管如何细心蒸溜或
18、过滤，总会含有必定量的可溶性有机物和盐类。恰是这些可溶性的物质被微生物应用作为它们进展的养料源泉。工艺用水在制药企业防止污染及作为制药用水方面至关重要。因为它不仅直截了当用于产品的临盆，同时也用于清洗设备和用于冷却。药品微生物污染的关键环节在于工艺用水，因为水是微生物进展代谢的一个须要成分。中国药典收载了纯化水和打针用水的质量标准。常用的对水消毒的方法，与空气消毒的方法一样，也是化学消毒剂、过滤与紫外线照耀 3 种。化学消毒剂方法对水的消毒以化学消毒剂方法较常用，后果也最好。常应用次氯酸钠或通氯气。在应用中，应留意到水体系中不克不及留有消毒不到的“逝世角”。膜过滤法有用于水体系的连续轮回处理。
19、紫外线照耀法在水体系中应用紫外线照耀消毒，有用于须要专门处理的水（如光学透亮度要求高），一样在末尾之前。这种方法因处理过的水无臭无味，而优于化学消毒剂方法；因不产生微生物移居滤器的现象，而优于膜滤器。在水体系中，这 3 种方法综合应用，设计安装在恰当的地位。3.厂房建筑与设备别处的微生物厂房建筑物的表里面，以及设备别处、容器表里别处等，都可因此微生物寄生计的处所。因为空气中的湿度，所有别处都包上一层含水的薄膜。这层薄膜因为静电吸引而饱含尘埃微粒，有专门多时刻，别处还覆盖一层油状物质，此层油膜易受到尘粒污染。别处因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。请记住：一个别处看起来专门洁净，而实际
20、上差不多被千百万个微生物所污染，除非差不多做了精确的消毒灭菌。制药企业临盆车间的厂房，库房及实验室都必须洁净整洁。建筑物别处不透水，滑腻平坦、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落，并能耐受清洗和消毒。设备、管道应易于拆卸、构造简单，便于洁净消毒。专门是药品临盆过程中应用的容器，包含内包装容器，都应进行清洗和消毒。4.人体的微生物微生物广泛分布于天然界，人体与天然情形接触，因此也不克不及例外。凡是人体体表皮肤与外界相通的腔道如口腔、鼻腔、肠道、眼结膜、泌尿生殖道等均存在不合种类的微生物，个中有些微生物能够经久借居在人的体表、皮肤和黏膜上。以下举出一些人员污染的门路和方法：人的头发和皮肤水滴衣着化妆品和
21、珠宝手饰临盆过程中人们所引起的混淆和误差(1)人的头发和皮肤每分钟从人类皮肤中要披发出约 10,000 个微生物。我们的手上，也拥有大年夜量的微生物。此外，在人们正常的日常活动中都接触大年夜量微生物。皮肤上经常存在白色葡萄球菌、枯草杆菌、类白喉杆菌、大年夜肠杆菌等，有时还有非致病性的抗酸菌、真菌等。(2)水滴呼吸和咳嗽将产生出大年夜量水滴，这种水滴既含有尘粒污染也含有微生物污染。口腔是对污染最为敏锐的地区，常见的微生物有白色葡萄球菌、类白喉杆菌、乳酸杆菌、放线菌、真菌、螺旋体等。呼吸道常存在空气中的细菌，如葡萄球菌、类白喉杆菌；在鼻咽部还有链球菌、奈氏菌属。一次咳嗽或喷嚏将把千百万个微生物引入
22、工作情形内。(3)衣着从可洗涤的纺织物中，可能披发出棉绒和淀粉粒。而从羊毛、开士米和其它松软的针纺织物中也可能散落出纤维和磨损下的微粒。污染也可能经由过程我们的鞋子进入工作场合。(4)化妆品和珠宝手饰发胶、喷鼻水、睫毛膏、喷鼻粉等，为微生物污染供给了极好的源泉。耳环、戒指、项链、手链能传播微生物污染。假如，一小片珠宝碎片落入一批产品中，则可能引起严峻的尘粒污染。(5)临盆过程中人们所引起的混淆和误差由人引起的污染也可能来自于临盆过程中显现的混淆和误差。例如，当职员没有按照 SOP 进行工作时，车间的污染程度增长。让装产品的容器不加盖存放，将导致产品污染。因为人体携带有不合种类的微生物，是以在药
23、品临盆的全过程中，每个工序都有可能产生由人体携带的微生物导致药品污染的危险。例如，用未经洁净消毒的手直截了当接触药品使其污染，经由过程谈话、咳嗽等方法引起药品的污染。人体不合部位所带细菌数量部位手部前额头皮腋窝鼻腔渗出物唾液粪便5.物料的微生物物料系指原料、辅料和包装材料等。原辅料可能将大年夜量的微生物带入到药物制剂中。是以，选用相符标准的原辅料，将有利于操纵药品和情形的污染程度。来源于动物的原料药或辅料（如明胶），有可能被动物病原体所污染；来源于植物的原料药或辅料（如淀粉）则可能被多种细菌、霉菌、酵母菌所污染。原辅料的处理方法因药物类型而异，专门多原辅料需进行消毒或灭菌处理。植物药材可用晾晒
24、、烘烤方法使之充分干燥，以削减微生物滋长。原辅料在储藏过程中必须留意情形前提。细菌数量1001000/cm21000100000/cm2约 100 万/cm2约 1000 万/g约 1000 万/g约 10 亿/g710 亿/g包装材料，专门是内包装材料，一方面包装药品，另一方面防止外界微生物进入药中。若处理欠妥，在药品储藏和运输过程中，极易引起污染，造成严峻后果。总之，包装材料应推敲不合须要加以洁净或消毒处理进行合理封装。原则是尽量削减微生物数量，预防产生污染。二.微生物污染导致药物变质的身分药品的临盆、储存、应用的全过程，都有因微生物污染而导致药物变质的身分。而药物变质，一样须要专门高的微
25、生物污染程度。也确实是说，微生物面广、量大年夜的滋长才显现明显的易被发觉的破坏现象。微生物污染导致药物变质的身分有以下几个方面：1.微生物污染数量在药品临盆中应将微生物污染数量操纵在最低限度，这就须要采取综合方法。2.微生物进展的养分身分专门多药物成分，都有微生物进展所需的碳源、氮源或无机盐类。临盆用水（纯化水、打针用水）亦能支撑微生物进展。3.pH 值pH 值为中性时最合适微生物进展。某些微生物在 pH3.5 或 pH8.09.5 仍能进展。4.温度关于微生物污染引起药物变质的温度，不合的微生物有不合的最适温度。依照微生物进展的最适温度不合，能够将微生物分为嗜冷、兼性嗜冷、嗜温、嗜热和超嗜热
26、等五种不合的类型。对嗜温微生物来说，可将药物储藏在阴冷、干燥处。三.防止微生物污染的原则1.明白得污染源对药品临盆全过程可能造成污染的来源，进行深刻的明白得研究，从而设计一个无缺的临盆工艺，制订规章轨制和标准操作规程，从各个环节采撤消毒和卫生方法来防止微生物污染，使产品达到所要求的卫生学质量，包含稳固性及各类微生物参数。2.进行微生物监测在药品临盆过程中，应按 GMP 要求赓续进行各项微生物卫生学监测。例如：对洁净室空气中的浮游菌、沉降菌的监测；对无菌设备洁净灭菌的验证；对非无菌药品进行细菌和活菌数测定和病原菌的限制性检查等。四.药品临盆人员卫生留意事项1.新进人员的健康检查药品临盆企业在招收
27、新职工时，必定要对新职工进行周全的健康检查，要确保新进厂的职工不患有急性或慢性感染病。别的还要依照新进职工安排的具体岗亭性质再确信其它具体检查的项目。2.建立临盆人员健康档案药品临盆企业应建立职工小我健康档案，以便于检查、明白得、追踪小我健康状况。3.培养药品临盆人员优胜的小我卫生适应勤洗手、勤剪指甲；按期洗澡、勤理发；勤更衣服、勤洗工作服；在临盆区内做到三个禁止：禁止吃器械、禁止抽烟、禁止大年夜声鼓噪。4.洁净区临盆人员要求洁净区工作人员要尽可能少而精，只有工作须要时才能进入；操作人员在洁净区动作要幸免猛烈活动，以削减人的发尘量；洁净区的门应关紧，幸免不须要的移动，以保持洁净区的风速、风量、
28、风型和风压；假如是无菌区的话，操作人员的自我束缚就更多，要严格按无菌操作规程履行。5.药品临盆防污染操纵方法（1）划分洁净级别：100 级、10000 级、100000 级、300000 级（2）严格更衣法度榜样：一更、二更、三更（3）消毒和灭菌药品临盆洁净室（区）空气洁净度级别洁 净 度级别100 级尘粒最大年夜许可数/个m0.5m35005m0-3微生物最大年夜许可数浮 游 菌/个m-35沉 降 菌/个皿-1110000 级100000 级35000350000010500000200020000100500310300000 级消毒和灭菌6000015消毒：杀灭有害微生物常用消毒剂：新洁
29、尔灭、石炭酸、酒精灭菌：杀灭所有微生物常用灭菌方法：物理法（干热、湿热、紫外）、化学法（甲醛熏蒸等）常用消毒剂浓度及用处消毒液名称石炭酸5%酒精新洁尔灭来苏尔3%6.日常工作（1）临盆停止后岗亭人员的工作：完全洁净临盆现场和设备别处；（2）临盆停止后灭菌人员的工作：用消毒剂擦拭房顶（包含高效送风口）、墙壁、地面等，并开启紫外灯；（3）每月按期进行一次大年夜消毒。用于地面、墙及对象消毒75%0.4%1.5%用于地面的洁净消毒用于各岗亭、工器具、设备别处及人员洗手用于三更洗手、更衣柜擦洗用于一样临盆区洁净浓度1%用处用于设备、墙壁等消毒第二模块第二模块微生物显微技巧和染色技巧微生物显微技巧和染色技
30、巧一、光学显微镜构造一、光学显微镜构造通俗光学显微镜的构造重要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。机械部分机械部分显微镜构造图（1）镜座：是显微镜的底座，用以支撑全部镜体。（2）镜柱：是镜座上面竖立的部分，用以连接镜座和镜臂。（3）镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。（4）镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。（5）物镜转换器(扭转器)简称“扭转器”：接于棱镜壳的下方，可自由迁移转变，盘上有34 个圆孔，是安装物镜部位，迁移转变转换器，能够改换不合倍数的物镜，当听到碰叩声时，方可进行不雅察，现在物镜光轴正好对准通光孔中间，光路接通。转换物镜后
31、，不许可应用粗调剂器，只能用细调剂器，使像清晰。（7）调剂器：是装在镜柱上的大年夜小两种螺旋，调剂时使镜台作高低偏向的移动。粗调剂器(粗准焦螺旋)：大年夜螺旋称粗调剂器，移动时可使镜台作快速和较大年夜幅度的起落，因此能灵敏调剂物镜和标本之间的距离使物象显现于视野中，平日在应用低倍镜时，先用粗调剂器灵敏找到物象。细调剂器(细准焦螺旋)：小螺旋称细调剂器，移动时可使镜台迟缓地起落，多在应用高倍镜时应用，从而获得更清晰的物象，并借以不雅察标本的不合层次和不合深度的构造。照明部分照明部分（2）集光器(聚光器)位于镜台下方的集光器架上，由聚光镜和光圈构成，其感化是把光线集中到所要不雅察的标本上。聚光镜：
32、由一片或数片透镜构成，起汇聚光线的感化，加强对标本的照明，并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调剂螺旋，迁移转变它可起落聚光器，以调剂视野中光亮度的强弱。光圈(虹彩光圈)：在聚光镜下方，由十几张金属薄片构成，其外侧伸出一柄，推动它可调剂其开孔的大年夜小，以调剂光量。光学部分光学部分（1）目镜：装在镜筒的上端，平日备有 23 个，上面刻有 5、10或 15符号以表示其放大年夜倍数，一样装的是10的目镜。（2）物镜：装在镜筒下端的扭转器上，一样有34 个物镜，个中最短的刻有“10”符号的为低倍镜，较长的刻有“40”符号的为高倍镜，最长的刻有“100”符号的为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不合色
33、彩的线，以示差别。显微镜的放大年夜倍数是物镜的放大年夜倍数与目镜的放大年夜倍数的乘积，如物镜为 10，目镜为 10，其放大年夜倍数就为1010=100。显微镜目镜长度与放大年夜倍数呈负相干，物镜长度与放大年夜倍数呈正相干。即目镜长度越长，放大年夜倍数越低；物镜长度越长，放大年夜倍数越高。二、光学显微镜的应用：1.显微镜的取送：右手握镜臂；左手托镜座；置于胸前。2.显微镜的扭转：镜筒朝前，镜臂朝后；置于不雅察者座位前的桌子上，偏向身材左侧，便于左眼向目镜内不雅察；置于桌子内侧，距桌沿 5cm 阁下。3.对光：迁移转变粗准焦螺旋，使镜筒慢慢上升，然后迁移转变转换器，使低倍物镜对准通光孔；用手指迁移
34、转变遮光器（或片状光圈），使最大年夜光圈对准通光孔，左眼向目镜内注目，同时迁移转变反光镜，使其朝向光源，使视野内亮度平均合适。4.低倍物镜的应用：用手迁移转变粗准焦螺旋，使镜筒慢慢降低，同时两眼从侧面注目物镜镜头，当物镜镜头与载物台的玻片相距 23mm 时停止。用左眼向目镜内注目（留意右眼应当同时睁着），并迁移转变粗准焦螺旋，使镜筒慢慢上升，直到看清物象为止。假如不清晰，可调剂细准焦螺旋，至清晰为止。5.高倍物镜的应用：应用高倍物镜之前，必须先用低倍物镜找到不雅察的物象，并调到视野的正中心，然后迁移转变转换器再换高倍镜。换用高倍镜后，视野内亮度变暗，是以一样选用较大年夜的光圈并应用反光镜的凹面
35、，然后调剂细准焦螺旋。不雅看的物体数量变少，然则体积变大年夜。6.油镜的应用方法：（1）道理：应用油镜不雅察时，需加喷鼻柏油，因为油镜须要进入镜头的光线多，但油镜的透气孔最小，如许进入的光线就少，物体不易看清晰。同时又因自玻片透过的光线，因为介质（玻片空气接物镜）密度（玻片：n=1.52，空气：n=1.0）不合而产生了折射散光，是以射入镜头的光线就更少，物体更看不清晰。因此采取一种和玻片折光率相接近的介质如喷鼻柏油，加于标本与玻片之间，使光线不经由过程空气，如许射入镜头的光线就较多，物象就看得清晰（图2）。（2）油镜的应用：a将光线调至最强程度（聚光器进步，光圈全部开放）。b迁移转变粗调剂器使
36、镜筒上升，滴喷鼻柏油 1 小滴（不要过多，不要涂开）于接物镜正下方标本上。c迁移转变接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。d俯身镜旁侧面在肉眼的不雅察下，迁移转变粗调剂器使油镜头慢慢降低浸入喷鼻柏油内，轻轻接触玻片为止。e慢慢迁移转变粗调剂器，使油镜头慢慢上升至见到标本的物象为止。f迁移转变微调剂器，使视野物象达到最清晰的程度。g左手慢慢移动推动器，并迁移转变微调剂器以不雅察标本。h标本不雅察完毕后，迁移转变粗调剂器将镜筒升起，取下标本玻片。急速用擦镜纸将镜头上的喷鼻柏油擦净。7.反光镜的应用：反光镜平日与遮光器（或光圈）合营应用，以调剂视野内的亮度。反光镜有平面和凹面。对光时，假如视野光线太强，
37、则应用反光镜的平面，假如光线仍旧太强，则同时应用较小的光圈；反之，假如视野内光线较弱，则应用较大年夜的光圈或应用反光镜的凹面。8.8.留意事项留意事项持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，弗成单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它处所。轻拿轻放，弗成把显微镜放置在实验台的边沿，应放在距边沿 10cm 处，以免碰翻落地。保持显微镜的洁净，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，假如沾污应急速用擦镜纸擦净。放置玻片标本时要对准通光孔中心，且不克不及反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。要养成两眼同时展开不雅察的适应，以左眼不雅察视野，
38、右眼用以画图。不要随便取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要随便率性拆卸各类零件，以防破坏。应用完毕后，必须答复复兴才能放回镜箱内，其步调是：取下标本片，迁移转变扭转器使镜头分开通光孔，降低镜台，平放反光镜，降低集光器(但不要接触反光镜)、封闭光圈，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内。最后填写应用挂号表。(注：反光镜平日应垂直放，但有时因集光器没提至应有高度，镜台降低时会碰坏光圈，因此那个地点改为平放)三、显微镜的保养1显微镜在从木箱中掏出或装箱时，右手紧握镜臂，左手稳托镜座，轻轻掏出。不要只用一只手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在练习台上或装 入木箱内。2显微镜放到练习台上时，先放镜
39、座的一端，再将镜座全部放稳，切弗成使镜座周全同时与台面接触，如许震动过大年夜，透镜和微调剂器的装配易破坏。3显微镜须经常保持洁净，勿使油污和尘土附着。如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油污，先将擦镜纸蘸少许二甲苯拭去。4显微镜不克不及在阳光下暴晒和应用。5接目镜和接物镜不要随便抽出和卸下必须抽取接目镜时，须将镜筒上口净用布隐瞒，幸免尘土落入镜筒内。改换接物镜时，卸下后应倒置在洁净的台面下，并赶忙装入木箱的置放接物镜的管内。6显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下，再将物镜转成“八”字形，迁移转变粗调剂器使镜筒降低，以免接物镜与聚光器相碰。7显微镜应放在干燥的处所，以防生霉。染色技巧染色技巧因
40、为微生物细胞含有大年夜量水分（一样在80-90%以上），对光线的接收和反射与水溶液的差别不大年夜，与四周背景没有明显的明暗差。因此，除了不雅察活体微生物细胞的活动性和直截了当运算菌数外，绝大年夜多半情形下都必须经由染色后，才能在显微镜下进行不雅察。然则，任何一项技巧都不是完美无缺的。染色后的微生物标本是逝世的，在染色过程中微生物的形状与构造均会产生一些变更，不克不及完全代表其生活细胞的真实情形，染色不雅察时必须留意。一、染色的基来源差不多理微生物染色的基来源差不多理，是借助物理身分和化学身分的感化而进行的。物理身分如细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗入渗出、吸附感化等。化学身分则是依照细胞物质
41、和染料的不合性质而产生地各类化学反响。酸性物质关于碱性染料较易吸附，且吸附感化稳固；同样，碱性物质对酸性染料较易于吸附。如酸性物质细胞查关于碱性染料就有化学亲和力，易于吸附。然则，要使酸性物质染上酸性材料，必须把它们的物理情势加以改变（如改变 pH 值），才利于吸附感化的产生。相反，碱性物质（如细胞质）平日仅能染上酸性染料，若把它们变为合适的物理情势，也同样能与碱性染料产生吸附感化。细菌的等电点较低，pH 值大年夜约在 25 之间，故在中性、碱性或弱酸性溶液中，菌体蛋白质电离后带阴电荷；而碱性染料电离时染料离子带阳电。是以，带阴电的细菌常和带阳电的碱性染料进行结合。因此，在细菌学上常用碱性染料
42、进行染色。阻碍染色的其它身分，还有菌体细胞的构造和其外膜的通透性，如细胞膜的通透性、膜孔的大年夜小和细胞构造完全与否，在染色上都起必定感化。此外，培养基的构成、菌令、染色液中的电介质含量和 pH、温度、药物的感化等，也都能阻碍细菌的染色。二、染料的种类和选择染料分为天然染料和人工染料两种。天然染料有胭脂虫红、地衣素、石蕊和苏木素等，它们多从植物体中提取获得，其成分复杂，有些至今还未搞清晰。今朝重要采取人工染料，也称煤焦油染料，多从煤焦油中提取获得，是苯的衍生物。多半染料为带色的有机酸或碱类，难溶于水，而易溶于有机溶剂中。为使它们易溶于水，平日制成盐类。染料可按其电离后染料离子所带电荷的性质，分
43、为酸性染料、碱性染料、中性（复合）染料和纯真染料四大年夜类。1、酸性染料这类染料电离后染料离子带负电，如伊红、刚果红、藻红、苯胺黑、苦味酸和酸性复红等，可与碱性物质结合成盐。当培养基因糖类分化产酸使 pH 值降低时，细菌所带的正电荷增长，这时选择酸性染料，易被染色。2、碱性染料这类染料电离后染料离子带正电，可与酸性物质结合成盐。微生物实验室一样常用的碱性染料有美兰、甲基紫、结晶紫、碱性复红、中性红、孔雀绿和蕃红等，在一样的情形下，细菌易被碱性染料染色。3、中性（复合）染料酸性染料与碱性染料的结合物叫做中性（复合）染料，如瑞脱氏（Wright）染料和基姆萨氏（Gimsa）染料等，后者常用于细胞核
44、的染色。4、纯真染料这类染料的化学亲和力低，不克不及和被染的物质生成盐，其染色才能视其是否溶于被染物而定，因为它们大年夜多半都属于偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如紫丹类（Sudanb）的染料。制片和染色的全然法度榜样微生物的染色方法专门多，各类方法应用的染料也不尽雷同，然则一样染色都要经由过程制片及一套染色操作法度榜样。1、制片在洁净的载玻片上滴上一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混淆做成悬液并涂成直径约 1 厘米的薄层，为幸免因菌数过多聚成集团，晦气不雅察个别形状，可在载玻片之一侧再加一滴水，从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释，涂布成薄
45、层，若材料为液体培养物或固体培养物中洗下制备的菌液，则直截了当涂布于载玻片上即可。2、天然干燥涂片最好在室温下使其天然干燥，有时为了使之干得更快些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，当心肠在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时刻过长，以防标本烤枯而变形。3、固定标本干燥后即进行固定，固定的目标有三个：）杀逝世微生物，固定细胞构造。）包管菌体能更牢的粘附在载玻片上，防止标本被水冲刷掉落。）改变染料对细胞的通透性，因为逝世的原生质比活的原生质易于染色。固定经常应用高温，手执载玻片的一端（涂有标本的远端），标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的往返经由过程 34 次，共约 23 秒
46、钟，并不时以载玻片后头加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不跨过 60）,放置待冷后，进行染色。以上这种固定法在微生物实验室中因此应用较多广泛，然则应当指出，在研究微生物细胞构造时不有用，应采取化学固定法。化学固定法最常用的固定剂有：酒精（95%），酒精和醚参半的混淆物，丙酮，12%的饿酸等。饿酸能专门快固定细胞但不改变其构造，故较常用。应用饿酸固定细胞的技巧如下：在培养皿中放一玻璃，在玻璃上放置玻璃毛细管，在毛细管中注入少量的 12%饿酸溶液，同时在玻璃上再放置湿标本涂片的载玻片，然后把培养皿盖上，经由 12 分钟后把标本从培养皿中掏出，并使之干燥。4、染色标本固定后，滴加染色液。染色的时刻各不雷同
47、，视标本与染料的性质而定，有时染色时还要加热。染料感化标本的时刻平均约 13 分钟，而所有的染色时刻内，全部涂片（或有标本的部分）应当浸在染料之中。若作复合染色，在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性化合物，可增长染料和细菌的亲和力。一样固定后媒染，但也能够结合固定或染色同时进行。、脱色用醇类或酸类处理染色的细胞，使之脱色。可检查染料与细胞结合的稳固程度，辨别不合种类的细菌。常用的脱色剂是 95%酒精和 3%盐酸溶液。、复染脱色后再用一种染色剂进行染色，与不被脱色部位形成光鲜的对比，便于不雅察。革氏染色在酒精脱色后用番红，石碳酸复红最落后行染色，确实是复染。、水洗染色到必定的时刻，用微小的水流从
48、标本的后头把余外的染料冲刷掉落，被菌体吸附的染料则储存。、干燥着色标本洗净后，将标本晾干，或用吸水纸把余外的水吸去，然后晾干或微热烘干，用吸水纸时，切勿使载玻片翻转，以免将菌体擦掉落。、镜检干燥后的标本可用显微镜不雅察。综上所述，染色的全然法度榜样如下：制片固定媒染染色脱色复染水洗干燥镜检。染色方法微生物染色方法一样分为单染色法和复染色法两种。前者用一种染料使微生物染色，但不克不及辨别微生物。复染色法是用两种或两种以上染料，有协助辨别微生物的感化。故亦称辨别染色法。常用的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法，此外还有辨别细胞各部分构造的（如芽胞、鞭毛、细胞核等）专门染色法。食物微生物考查中常用
49、的是单染色法和革兰氏染色法。、单染色法用一种染色剂对涂片进行染色，简便易行，适于进行微生物的形状不雅察。在一样情形下，细菌菌体多带负电荷，易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。是以，常用碱性染料进行单染色，如美兰、孔雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等。若应用酸性染料，多用刚果红、伊红、藻红和酸性品红等。应用酸性染料时，必须降低染液的 PH 值，使其显现强酸性（低于细菌菌体等电点），让菌体带正电荷，才易于被酸性染料染色。单染色一样要经由涂片、固定、染色、水洗和干燥五个步调。染色成果依染料不合而不合：石碳酸复红染色液：着色快，时刻短，菌体呈红色。美兰染色液：着色慢，时刻长，后果清晰，菌体呈兰色。草酸
50、铵结晶染色液：染色灵敏，着色深，菌体呈紫色。、革兰氏染色法革兰氏染色法是细菌学中广泛应用的一种辨别染色法，1884 年由丹麦医师Gram 创建。细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在必定前提下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，是以可把细菌分为两大年夜类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G）。为不雅察便利，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大年夜多半和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反响；弧菌，螺旋体和大年夜多半致病性的无芽胞杆菌都显现负反响。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学构成和心理性质