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1、基因工程的基本操作程序第1页，本讲稿共16页自学提纲（自学教材自学提纲（自学教材P12P15，完成问题），完成问题）1、什么叫转化？、什么叫转化？2、将目的基因导入植物细胞的方法有哪些？常用的是哪种、将目的基因导入植物细胞的方法有哪些？常用的是哪种方法？如何使用？方法？如何使用？3、将目的基因导入动物细胞的方法是什么？过程？、将目的基因导入动物细胞的方法是什么？过程？4、将目的基因导入微生物细胞的方法是什么？、将目的基因导入微生物细胞的方法是什么？5、怎样完成目的基因分子水平的检测？、怎样完成目的基因分子水平的检测？6、怎样完成目的基因个体生物水平的鉴定？、怎样完成目的基因个体生物水平的鉴定？
2、第2页，本讲稿共16页三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化 方法方法将目的基因导入将目的基因导入植物细胞植物细胞将目的基因导入将目的基因导入动物细胞动物细胞将目的基因导入将目的基因导入微生物细胞微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态细胞感受态细胞目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受体受体细胞内维持细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达第3页，本讲稿共16页1 1、将目的基因导入植物细胞的方法：、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化农杆菌转化法法（1 1）农杆菌介绍）农
3、杆菌介绍（2 2）原理及适用范围）原理及适用范围第4页，本讲稿共16页2 2、将目的基因导入动物细胞、将目的基因导入动物细胞（1）方法：）方法：显微注射法显微注射法（2）程序：）程序：第5页，本讲稿共16页3 3、将目的基因导入微生物细胞、将目的基因导入微生物细胞（1）思考：为什么选用微生物作为受体细胞）思考：为什么选用微生物作为受体细胞？（2）方法：）方法：Ca2+第6页，本讲稿共16页四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定检查是否成功检查是否成功检测检测鉴定鉴定检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录
4、出了检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子杂交分子杂交分子杂交分子杂交（注意与上不同之处）（注意与上不同之处）抗原抗原抗体杂交抗体杂交第7页，本讲稿共16页v多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰
5、无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。例：用棉铃饲喂棉铃虫，例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。虫基因并得到表达。从个体水平鉴定从个体水平鉴定第8页，本讲稿共16页DNADNA分子杂交示意图分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的采用一定的技术手段，将两种生物的DNADNA分子分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基的单链放
6、在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。是两条游离的单链。第9页，本讲稿共16页1）以下说法正确的是）以下说法正确的是（）A、所所有有的的限限制制酶酶只只能能识识别别一一种种特特定定的的核核苷苷酸序列酸序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体、质粒是基因工程中唯一的运载体C、运运载载体体必必须须具具备备的的条条件件之之一一是是：具具有有多多个限制酶切点，以便与外源基因连接个限制酶切点，以便与外源基因连接D、基因
7、控制的性状都能在后代表现出来、基因控制的性状都能在后代表现出来C C练习练习第10页，本讲稿共16页2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是）不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制、能复制（）B、有多个限制酶切点、有多个限制酶切点C、具有标记基因、具有标记基因D、它是环状、它是环状DNAD D练习练习第11页，本讲稿共16页3）有关基因工程的叙述中，错误的是（）有关基因工程的叙述中，错误的是（）A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入受体细胞、目的基因须由运载体导入受
8、体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶人工合成目的基因不用限制性内切酶A A练习练习第12页，本讲稿共16页4）有关基因工程的叙述正确的是）有关基因工程的叙述正确的是（）A、限制酶只在获得目的基因时才用、限制酶只在获得目的基因时才用B、重组质粒的形成在细胞内完成、重组质粒的形成在细胞内完成C、质粒都可作为运载体、质粒都可作为运载体D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D D练习练习第13页，本讲稿共16页5）基基因因工工程程是是在在DNA分分子子水水平平上上进进行行设设计计施施工工的的。在在基基因因操操作作的的基基本本步步骤骤中中，不不进进行行碱碱基
9、基互互补补配配对对的的步骤是步骤是（）A、人工合成目的基因、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达C C练习练习第14页，本讲稿共16页为为扩扩大大可可耕耕地地面面积积，增增加加粮粮食食产产量量，黄黄河河三三角角洲洲等等盐盐碱碱地地的的开开发发利利用用备备受受关关注注。我我国国科科学学家家应应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。获得耐盐基因后，构建重组获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限分子所用的限制性内切酶作用于图中的制性内切酶作用于图
10、中的_处，处，DNA连接酶连接酶作用于作用于_处。（填处。（填“a”或或“b”）aa第15页，本讲稿共16页将将重重组组DNA分分子子导导入入水水稻稻受受体体细细胞胞的的常常用用方方法法有有农农杆杆菌菌转转化化法法和和_法。法。（3 3）为为了了确确定定耐耐盐盐转转基基因因水水稻稻是是否否培培育育成成功功，既既要要用用放放射射性性同同位位素素标标记记的的_做做 探探 针针 进进 行行 分分 子子 杂杂 交交 检检 测测，又又 要要 用用_方方法法从从个个体体水水平平鉴鉴定定水水稻植株的耐盐性。稻植株的耐盐性。基因枪（花粉管通道）基因枪（花粉管通道）耐盐基因（目的基因）耐盐基因（目的基因）一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）第16页，本讲稿共16页