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1、流式细胞仪的工作原理 The working principle of flow cytometry 流式细胞术 概述 流式细胞术（flow cytometry,FCM）是上世纪70年代収展起来的一种可以快速、准确、客观，可同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，并且，可以对特定群体加以分选。2 流式细胞术 特点 研究对象：各种细胞、微生物及人工合成微球等 研究的微粒特性：包括多种物理及生物学特征，并加以定量。研究内容：细胞的群体特性 3 流式细胞仪 概述 流式细胞仪是一种集流体力学、细胞化学、激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机、图像技术以及细胞荧光化学技术等
2、等为一体的新型高科技仪器。4 一定波长的激光束直接照射到高压驱动的液流内的细胞上，产生的光信号被多个接收器接收。一个是在激光束直线方向上接收到的前向散射光信号（FSC），其他的是在激光束垂直方向上接收到的光信号，包括侧向角散射光信号（SSC）及荧光信号。散射光信号和荧光信号的强弱就能反映出每个细胞的物理和化学特征。流式细胞仪 原理 5 流式细胞仪的工作原理图 6 流式细胞仪 特点 单个细胞或微粒分析 统计学意义：提供细胞群体的均值和分布情况 速度快：10000个细胞(微粒)/秒 同时多参数分析 分选感兴趣的细胞或微粒 7 流式细胞仪 结构 液流系统 检测分析系统 光路系统 8 流式细胞仪液流系
3、统示意图 流式细胞仪 液流系统 9 鞘流与液流聚焦原理示意图 10 流式细胞仪 光路系统 是流式细胞仪的“灵魂”由一系列透镜、滤光片和小孔组成，以滤光片最为重要。分为长通滤片(long-pass filter，LP)、短通滤片(short-pass filter，SP)及带通滤片(band-pass filter，BP)，它们分别将不同波长的荧光信号送到不同的电子探测器 11 LONG(700nm)550 Long Pass(650LP)650 Short Pass(600SP)SHORT(500nm)Pass Through Filters600/100 Band Pass(600/100)
4、Transmitted 550 nm550-650 nm(600?0)Wavelengths Blocked650 nm550 nm650 nmShort PassLong PassBand PassLONG(700nm)550 Long Pass(650LP)650 Short Pass(600SP)SHORT(500nm)Dichroic FiltersTransmitted 550 nmDiflected 90?650 nm550 nm滤光片原理图 流式细胞仪 光路系统 12 650SP 550LP 650SP 550SP 激光束的形成与聚焦示意图 流式细胞仪 光路系统 13 流式细胞仪
5、 光路系统 光路系统示意图 14 488nm激光侧面接收光光信号分离示意图 流式细胞仪 光路系统 15 流式细胞仪 检测分析系统 以通道为单位，将细胞的光信号汇总分析，得出群体细胞的物理化学特征 根据光性质的不同分为：散射光信号通道和荧光信号通道 16 流式细胞仪 检测分析系统 散射光分为前向角散射(forward scatter、FSC)和侧向角散射(side scatter、SSC)，散射光不依赖任何细胞样品的制备技术(如染色)，因此，被称为细胞的物理参数或称固有参数。以上两种信号都是来自激光的原光束，其波长与激光的波长相同。1散射光信号：17 前向角和侧向角检测原理 流式细胞仪 检测分析系统 18 流式细胞仪 检测分析系统 19 散射光信号 前向角散射光（FSC,Forward Scatter）细胞相对大小及其表面积 侧向角散射（SSC,Side Scatter）细胞粒度及细胞内相对复杂性 流式细胞仪 检测分析系统 激光的作用原理 2荧光信号 20 某流式细胞仪荧光通道命名表 流式细胞仪 检测分析系统 21 荧光信号脉冲的面积（A）、高度（H）和宽度（W）因参数A比H及W更准确，所以，也更常用，如FSC-A 流式细胞仪 检测分析系统 22 流式细胞仪 检测分析系统 荧光信号的宽度(如FL2W)常用来区分双联体细胞等非单个细胞 23