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1、植物组织培养快速繁殖技术 植物组织培养快繁影响因素的调控 一、一、培养基的成分的影响培养基的成分的影响 1.培养基中盐浓度培养基中盐浓度；2.糖浓度糖浓度；3.维生素维生素；4.植物生长物质植物生长物质 1.培养基无机盐浓度的影响培养基无机盐浓度的影响 MS培养基适用于许多种植物的培养。但对某些植物来说，MS的无机盐浓度过高，甚至表现出抑制和毒害。如越橘的嫩茎在1/4MS培养基中生长得极好，而对全量MS盐浓度表现出有毒害。对于在MS培养基上未能成功培养的植物，可以降低培养基的盐浓度再试一试是很有必要的。2.糖浓度的影响糖浓度的影响 适宜的糖浓度对器官发生很重要，糖的作用之一是维护良好的渗透势，
2、在糖分被消耗到不能维护正常的渗透势之后，要让培养的材料发生理想的形态变化不可能的。把培养材料及时转移到新鲜培养基上是非常重要的。如每升90g的糖将抑制百合产生小鳞茎，在每升30g糖，茎尖外植体可以百分之百地产生小鳞茎 3.维生素的影响维生素的影响 从烟草愈伤组织的培养中了解到，离体培养的细胞能够自行合成许多必需的维生素。把烟酸、吡哆醇和生物素从培养基中除去，并不影响愈伤组织的生长。核黄素可能抑制生长。叶酸和对氨基苯甲酸能促进生长，但并非必要。只有硫胺素对烟草愈伤组织的生长是必需的，通常以每升0.11mg的用量加入到培养基中。4.植物生长物质的影响植物生长物质的影响 植物生长物质的影响主要是生长
3、素与细胞分裂素的影响。植物生长物质的影响主要是生长素与细胞分裂素的影响。在初代培养中，通常使用较高浓度的生长素，以诱导脱分化和促进愈伤组织生长。在组织培养中，为避免发生变异，大多希望较少产生愈伤组织，能尽快出苗，因此生长素用量要适当控制。不同种类的生长素效果不大一样。一般认为2，4-D用量较高时会抑制形态的发生，而且它的后效常维持很久，因此，一般不用2，4-D或使用较低的浓度。但在诱导胚状体发生的时候，一般认为2，4-D是必需因子。用于侧芽、不定芽发生或诱导生根时，较多地使用萘乙酸、吲哚丁酸和吲哚乙酸，而不用2，4-D。一般认为单子叶和双子叶植物对2，4-D的反应不同。愈伤组织器官分化的受细胞
4、分裂素与生长素比例的控制。但这并不意味着促进腋芽生长和不定芽形成也同样需要生长素和细胞分裂素。多数情况下只有细胞分裂素一种也可以获得良好的嫩茎增殖。培养物对激素的需要取决于它本身内源激素的水平，而内源激素水平又随植物种类、组织的部位以及生长期等条件而变动。在通常的情况下，生长素含量过高，培养物表现为发生旺盛生长的愈伤组织，细胞团比较松散，会出现水浸状，这样的细胞团几乎不可能分化出苗。一般能分化出苗的愈伤组织较为紧密，表面多突起，花椰菜状或粗粒状，多处出现半球形的光滑突起等。与生长素的作用不同，细胞分裂素有强烈的诱导芽形成的能力。通常情况下，都是与生长素一同使用。高浓度会抑制芽的发生，对已形成的
5、芽也有抑制，不能萌发生长，节间极度缩短。如果细胞分裂素用量太低，表现的状况是几乎没有侧芽生长，一根独苗长得细高。如果是叶切块、叶柄或茎切段诱导不定芽，细胞分裂素用量太低或没有，就不可能诱导出苗，而且，有些植物还会因缺乏细胞分裂素而加速衰老，逐渐死亡。细胞分裂素的浓度范围常在每升0.530mg之间，但大多数植物在每升12mg是适宜的。高水平的细胞分裂素倾向于诱导不定芽形成，也使侧芽增生加速，结果形成过于细密的嫩芽，同时嫩茎的质量下降，不利于下一步的生根诱导。因此，在力求提高嫩茎质量兼顾有较多数量的情况下，就必须减少细胞分裂素的用量。二、二、外植体的影响外植体的影响 1.植物不同器官和组织对离体培
6、养的反应是不同的，其形态发生的能力也是不同的。外植体的种类是影响组织培养效果的主要因素之一。即使是相同的器官，由于其生理学或发育年龄的差异，也会影响形态发生的类型及方式。同一植株上不同器官的再生能力有所不同。最适的为茎尖、带芽茎段，再是叶片、子叶、根段、花器官等。2.外植体脱分化难易程度与其生理状态有关 外植体的年龄对组织的再生能力有很大的影响。通常植株的幼嫩组织，如胚、子叶、实生苗的嫩茎和嫩芽、幼龄植株上的组织作为外植体，要比老龄化植株上的组织容易诱导成功。幼龄材料酚类化合物含量少，而成熟材料比较多。不同季节取材，对植株的再生能力影响差异很大，通常春季是植物生长旺季，植株再生能力也最强。3.
7、植物生理年龄的影响 按照植物生理学的观点，沿植物体的主轴，越向上的部位其生长时间越短，即形成较晚的组织，其生理或发育的年龄越老，即越接近发育上的成熟，越易形成花器官。在树木组织培养中，外植体的生理年龄对培养结果的影响尤其较大，离体培养时应选取生理年龄较短的外植体。一般情况下，木本植物中胚和实生苗组织具有较高的再生能力，幼年组织 比老年组织具有较高的形态发生能力。4.外植体大小的影响 一般的快繁培养，外植体不能太小，否则影响成活率，除非是用于脱毒苗的生产。三、三、培养环境条件的影响培养环境条件的影响 1.光的影响。光对试管苗生长、增殖有明显影响，表现在光强、光质和光周期等方面。2.温度的影响 3.湿度的影响 4.气体状况的影响