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1、高三生物“一轮”复习教学案高三生物“一轮”复习教学案【课【课题】题】DNADNA 的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定【考点要求】【考点要求】1.掌握 DNA 粗提取与鉴定的原理2.能够掌握提取 DNA 的实验操作中的主要步骤3.熟练进行实验操作，掌握实验方法4.根据实验目的和要求进行实验设计【基础梳理】【基础梳理】1提取 DNA 的方法提取生物大分子的基本思路是。对于 DNA 的粗提取而言，就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异，提取 DNA，去除其他成分。1 1）DNADNA 的溶解性的溶解性 DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使
2、杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。在什么浓度下，DNA 的溶解度最小？DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度是如何变化的？如何通过控制 NaCl 溶液的浓度使 DNA 在盐溶液中溶解或析出？此外，DNA不溶于溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将 DNA 与蛋白质进一步的分离。2 2）DNADNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解，但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受 6080oC 的高温，而 DNA 在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对 DNA 没有影响。3 3）DNADNA 的鉴定的鉴定在条件下，DNA 遇会被染成色，因此二苯胺可以作为
3、鉴定DNA 的试剂。2.实验设计1 1）实实验验材材料料的的选选取取凡是含有的生物材料都可以考虑，但是使用的生物组织，成功的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的实验材料：鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌思考：哺乳动物的红细胞的特点？2 2）破碎细胞，获取含破碎细胞，获取含 DNADNA 的滤液的滤液动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的料是植物细胞，需要先用中加入一定的思考：和，同时用搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA 时，在切碎的洋葱，进行充分的搅拌和
4、研磨，过滤后收集研磨液。1为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响?此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？3 3）去除滤液中的杂质去除滤液中的杂质思考：为什么反复地溶解与析出 DNA，能够去除杂质？4 4）DNADNA 的析出与鉴定的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积的，静置，溶液中会出现搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支 20ml 的试管，各加入物质的量浓度为的 NaCl 溶液 5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml 的。混合均匀后，将试管置
5、于中加热 5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA 的溶液是否变3.操作提示、冷却，这就是粗提取的 DNA。用玻璃棒。以血液为实验材料时，每100ml 血液中需要加入 3g，防止。加入洗涤剂后，动作要、，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要，以免，导致 DNA分子不能形成絮状沉淀。二苯胺试剂要，否则会影响鉴定的效果。【典例分析】【典例分析】本实验中有三次过滤：过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤含粘稠物的 0.14mol/LNaCl 溶液过滤溶解有DNA 的 2mol/LNaCl 溶液以上三次过滤分别为了获得（）A 含核物质的
6、滤液、纱布上的粘稠物、含 DNA 的滤液B 含核物质的滤液、滤液中DNA 粘稠物、含DNA 的滤液C 含核物质的滤液、滤液中DNA 粘稠物、纱布上的 DNAD 含较纯的DNA 滤液、纱布上的粘稠物、含DNA 的滤液2DNADNA粗提取和鉴定反馈练习粗提取和鉴定反馈练习1.在研究 DNA 的基因样本前，采集来的血样需要蛋白水解酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。用蛋白水解酶处理血样的目的是（）A.除去血浆中的蛋白质B.除去染色体上的蛋白质C.除去血细胞表面的蛋白质D.除去血细胞中的所有的蛋白质，使 DNA 释放，便于进一步提纯2.与析出 DNA 粘稠物有关的叙述，不正确的是（）A.操作时缓缓滴加蒸
7、馏水，降低DNA 的溶解度B.在操作 A 时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA 分子完整C.加蒸馏水可同时降低DNA 和蛋白质的溶解度，两者均可析出D.当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl 的浓度相当于0.14mol/L3洗涤剂能够瓦解（），但对DNA没有影响。A.细胞壁B.细胞膜C.细胞核D.细胞质4.在沸水浴的条件下，DNA 遇（）会被染成蓝色。A.斐林试剂B.苏丹染液C.双缩脲试剂D.二苯胺5.在 DNA 提取过程中，最好使用塑料试管和烧杯，目的是（）A.不易破碎B.减少提取过程中 DNA 的损失C.增加 DNA 的含量D.容易洗刷6下列操作中，对DNA 的提取量影响最小的是（）A.使鸡血
8、细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA 等核物质B.搅拌时，要使用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌C.在“析出 DNA 粘稠物”时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增加D.在用酒精沉淀 DNA 时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却E 在 DNA 的溶解和再溶解时，要充分搅拌7DNA 的粗提取中，将与滤液体积相等的、冷却的（现白色丝状物。A.09%的 NaClC.质量分数 15%的 HCl），静置 23min，溶液中会出B.0.14mol/L 的 NaCl 溶液D.体积分数为95%的酒精溶液8.以血液为实验材料时，需要向血液中加入（），防止血液凝固。A.醋酸钠B.龙胆紫C.柠檬酸钠D.醋酸洋红
9、9.在向溶解 DNA 的 NaCl 溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（）A.加快溶解 DNA 的速度B.加快溶解杂质的速度C.减少 DNA 的溶解度，加快DNA 析出D.减小杂质的溶解度，加快杂质的析出10.去除滤液中的杂质时，直接在滤液中加入嫩肉粉，利用嫩肉粉中的（A.胃蛋白酶B.胰蛋白酶C.木瓜蛋白酶D.肠肽酶）分解蛋白质。3二、非选择题1.提取鸡血中 DNA 时，要除去血液中的上清液，这是因为什么？2.填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。提取鸡血细胞中核物质溶解核内DNA：析出 2mol/LNaCl 溶液中的 DNADNA 粘稠物的再溶解提取杂质较少的DNA 白色乳状丝状物DNA 的鉴定
10、3.关于 DNA 粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验效果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：鸡血细胞中红细胞，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中细胞树木较多，可以提供丰富的。实验前由老师制备血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是。生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是，这是因为这些动物和人一样，成熟的红细胞中，但若改用动物肝脏做实验材料，实验能顺利进行。这是因为。若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加程序，使组织细胞更易分离。4、以花椰菜为实验材料进行 DNA 的粗提取实验：（1）准备材料：将新鲜的花椰菜和体积分数为 95的酒精溶液放入冰箱冷却 24h。（2）研磨细胞，获取含 DNA 的滤液：将花椰菜中加入一定的洗涤剂和食盐，进行成分的搅拌和研磨，过滤后收集滤液1加入洗涤剂的作用是什么？2加入食盐的作用是什么？3这一步是实验成功与否的关键，如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？4此步骤获得的滤液中可能会有哪些细胞成分？（3）去除溶液中的杂质，也就是 DNA 的纯化1DNA 的纯化利用了 DNA 的哪些特性？2根据实际情况，写出你去除杂质的设计方案并写出方案依据的原理？（4）DNA 的析出与鉴定：DNA 鉴定的方法有哪些？4