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1、基因组基因组 DNADNA的提取和电泳（实验五）实验报告的提取和电泳（实验五）实验报告一、实验目的了解 DNA 提取的方法，以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA 技术。二、器材和试剂1.1.器材水平琼脂糖电泳仪，离心机，水浴锅，研钵，离心管、移液枪、水稻幼苗等2.2.试剂1.1mol/LTris.Cl(pH8.0)的配制：称取 12.11g 的 Tris，置于 80 mL 的 ddH20,加入浓盐酸（约 4.2 mL）,调节 pH 值至 8.0，定容至 100 mL。2.0.5 mol/L EDTA(pH8.0)的配制：18.61g Na2EDTA2H2O，加入 80 mL 的 ddH2O,用NaOH
2、 颗粒调 pH 值至 8.0（约需 2 g），定容至 100 mL。3.提取缓冲液的配制：100 mmol/L Tris.Cl(pH8.0),20 mmol/LEDTA,500 mmol/L NaCl,1.5%SDS4.80/4/16 氯仿：异戊醇：乙醇5.6Loading buffer：0.15溴酚蓝，0.15二甲苯青 FF，5 mmol/L EDTA，50甘油6.5Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制 1L溶液各成分的用量54g445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水27.5g 硼酸20 ml的 0.5 mol/L EDTA（
3、pH 8.0）补足 1L三、实验步骤1.在 15mL 的离心管中加入 5mL 的提取缓冲液，60水浴预热。2.植物叶 1-2g，剪碎，在钵体中加入石英砂，加入预热的提取缓冲液，磨成粉末状，60水浴保温 20 min，其间不时缓慢摇动。3.5000 rpm 离心 5 分钟，仔细吸取上清液至另一离心管中，4.加入 5 mL 氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀（需带手套，防止皮肤损伤），室温下静置5-10 分钟，使水相和有机相混匀。5.室温下离心 5000 rpm 离心 5 分钟。6.仔细吸取上清液至另一离心管中，加入一倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状沉淀。7.离心 5000 rpm，离心
4、5 min，弃去异丙醇，室温晾干。8.视沉淀多少，加入 1mL 左右 ddH2O 溶解，可在 60水浴中放置 15 分钟以上助溶。9.取 DNA 样品 5 L，加入 1 L6 Loading buffer，混匀，加入 0.7%的琼脂糖凝胶加样孔中，电泳，检测 DNA 的分子大小。4 4、实验结果和讨论实验分析：本次实验由于种种原因我是和植保 102 班的同学一起做的，我们组 3 人，实验过程比较严谨，受到了老师的表扬，实验结果也很令人满意。下面是实验过程中的注意点：1、研磨不能太久太用力，会导致 DNA 片段断掉。2、实验室的某些试剂，如氯仿，有毒性，应带手套进行。电泳的时候不知是时间的原因还是都做得不错，结果相差不是很远（如上图），第五组和第六组是我们的，第六组是我自己加的。实验过程中要耐心细心，这样才能得到满意的结果。园艺 101石颖20100107011