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1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。体内药物分析-第二章生物样品与样品制备1.体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物2体内药物分析的特点：样品量少，不易重新获得；样品复杂，干扰杂质多；供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施；实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作；工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。需相关学科参与。3体内药物分析样品的种类：最常用且易获得的分析样品有：血样、尿样、唾液和粪便。特殊情况下：乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织4血清：血清
2、是由血液中纤维蛋白原等的影响引起血液凝结而析出的澄清黄色液体，约为全血的30505尿液：尿液的主要成分：水、含氮化合物、盐类；体内药物清除主要通过尿液排出，药物以其原型或代谢物及其缀合物等形式排出；尿药测定主要用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度、药物代谢率的研究，并可推断患者是否按医嘱用药。6生物样品分析的前处理：是指测定生物样品中的药物及其代谢物时，对样品进行分离、纯化、浓集，必要时对待测组分进行衍生化，为测定创造良好的条件。7为何进行前处理？1）药物进入体内除原药外还有多种形式存在2）生物样品的介质组成比较复杂，尤其蛋白质严重影响分离效果，必须进行前处理3）除去介质中含有的大量内源性物
3、质等杂质，提取出低浓度的被测药物，同时浓集药物或代谢物的浓度，使其在所用分析技术的检测范围内。8生物样品处理方法选择的一般原则：待测药物的理化性质；待测药物测定的目的与浓度范围。9去除蛋白质的方法：加与水相混溶的有机溶剂；加入中性盐；加入强酸；加入含锌盐及铜盐的沉淀剂；酶解法。10生物样品的分析由两步组成：样品的前处理（分离、纯化与浓集）和对提取物的仪器分析；提取法是应用最多的分离、纯化方法；提取的目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分药物及其代谢物，并通过溶剂的蒸发使样品得到浓集，以供测定；提取法分为液-液提取法和液-固提取法。11提取溶剂的选择：对被测组分的溶解度大，沸点低，易于浓集、
4、挥散，与水不相混溶，无毒、化学稳定、不易乳化；最常用的溶剂是乙醚和氯仿。12被测组分的浓集：样品在提取过程中被测组分得到纯化但因微量的组分分布在较大体积的提取溶剂中，由于进样量的限制，被测组分量可能达不到检测灵敏度，故需将被测组分浓集后再测定；两种浓集方法：末次提取时加入提取液尽量少；挥去提取溶剂法。13分离前将药物进行衍生化的目的：使药物变成具有能分离的性质；提高检测的灵敏度；增强药物的稳定性；提高对光学异构体分离的能力；GC中的化学衍生化和HPLC中的化学衍生化。第三章体内药物分析方法的设计与验证1生物样品经处理后，需选择适当的分析方法进行测定，目前供生物样品药物及其代谢物监测的分析方法主
5、要有以下五类：光谱分析法；色谱法；毛细管电泳法；免疫分析法；同位素法2体内药物分析方法的选择原则：一般要根据药物的结构、物理性质、体内药物浓度大小、干扰成分的多少、样品的预处理方法、实验条件和目的等因素进行综合考虑，方可选择出可供生物样品中药物及其代谢物含量测定的分析方法。3体内药物分析方法设计的主要依据：（1）明确分析方法的目的要求；（2）调研文献了解待测药物的特性；（3）仪器设备与实验室条件。4体内药物分析方法设立与建立的一般步骤：依据测定目的要求结合药物结构、理化性质及体内存在状态、参考同类药物的文献资料，先拟定初步的分析方法进行一系列的体外和体内试验工作以选择最合适的实验条件，进一步验
6、证所拟定的分析方法是否适应实际样品的检测，主要步骤包括：以纯品进行测定；以处理过的空白样品进行测定；回收率的测定；以水代替空白样品添加标准品测定；以空白样品添加标准品测定；体内实际样品测定。5体内药物分析方法的评价：准确度：回收率绝对回收率和方法回收率精密度：日内或批内精密度、日间或批间精密度灵敏度：检测限、定量限、最低检测浓度专属性：代谢产物、内源性物质、配伍药物的干扰稳定性：短期室温条件下稳定性考察长期低温条件下稳定性考察冷冻解冻稳定性考察另外对体内药物分析方法的考察还要从分析方法的可靠性、操作的难易、每个样品测定耗费时间、仪器设备要求及成本费用多少进行综合评价第四章 所有适用于体内药物分
7、析的方法简介第一节、紫外可见分光光度法：1UV-VIS的基本原理：物质对不同颜色的光能吸收是有选择性的，特定的物质主要吸收一定波长的光，物质吸收了高能量的光以后，就发生能级跃迁产生吸收光谱。当物质吸收的光的波长在200400nm具有共轭结构的有机复杂的外层电子（价电子）发生能级跃迁并伴随着分子振动和转动能级跃迁，形成紫外吸收光谱。400760nm具有较大共轭结构的价电子或有色无机物的价电子发生能级跃迁，并伴随分子振动能级的跃迁形成可见光谱2UV-VIS定量分析的依据：Beer-Lamber即朗伯比耳定律：A=ECL,其中E为吸收系数，在定量分析中尽可能选E值越大的波长处测定以提高测定的灵敏度越
8、好即E值越大所能测量的某物质的溶液浓度越小，测定灵敏度越高。3吸收度的加和性：如果溶液中存在两种以上吸光物质时，只要共存物质不互相影响也不改变各自本身的吸收系数，则溶液的吸收度是各组分吸收度的加和，各组分的吸收度由各自的浓度与吸收系数所决定。物质对光的吸收度加和性是测定混合组分的依据。4影响测定准确度的因素：1、偏离Beer定律而引起的误差主要由于仪器和溶液（理化性质）的实际条件与Beer-Lambert定律的条件不一致而引起；仪器：光源不稳、入射光的谱带宽度不够窄、比色皿的厚度和均匀度不合要求溶液的理化性质：被测物为胶体溶液或浑浊液；被测物的理化性质不稳或溶液浓度改变而使溶质发生解离、缔合导
9、致被测物的组成改变或显色条件控制不好；被测物溶液浓度过大（大于0.01mol/L）导致工作曲线弯曲。2、透光率测定误差：浓度测量值的相对误差DC/C=0.434DT/TlgT，当吸收度值在0.20.7时浓度测量值的相对误差值较小，为最佳测量范围。在体内药物分析中由于药物浓度较低，吸收度的测量值较小，会在0.02-0.001之间，测量值的相对误差值达2.8%-10.3%3、操作不当引起的误差5常用样本处理方法：液液萃取萃取后衍生化固相萃取第二节气相色谱：1基本原理：以气体（载气）为流动相，由于被测样品中各组分在固定相与载气间的分配系数不同而被分离。各组分将按分配系数大小顺序，依次被载气带出色谱柱
10、，分配系数小的组分先流出；分配系数大的后流出。流出色谱柱的各组分被载气带入检测器。检测器将物质的质量变化转变为电压或电流变化，由记录器记录电压或电流随时间的变化，即色谱的峰高或峰面积。由于色谱的峰高或峰面积与被测物质的含量成正比，可用峰高或峰面积进行定量分析；物质的色谱峰出峰时间与物质本性有关，色谱峰的出峰时间即保留时间进行定性分析。2主要仪器装置：载气瓶压力调节器净化器稳压阀柱前压力表转子流量计进样器色谱柱色谱柱恒温箱检测器尾气出口记录器载气由高压气瓶供给，经压力调节器降压，经净化器脱水及净化，由稳压阀调至适宜的流量进入色谱，待流量、温度及基线先定后，即可进样。液态样品用微量注射器吸取，由进
11、样器注入，样品被载气带入色谱柱。气态样品可用六通阀或注射器进样。3固定液的必备条件：一般为高沸点的液体，室温时为固态和液态（1）在操作温度下呈液体状态及蒸气压低，蒸气压低，固定液流失慢、柱寿命长、检测器本底低（2）对样品中各组分有足够的溶解能力，分配系数较大（3）选择性能高，对两个沸点或性质相近的组分的分配系数比不相等（4）与样品中的各组分不产生化学反应。4固定液选择的原则：相似性原则：按被分离组分的极性或官能团与固定液相似的原则来选择，相似相溶的缘故被分离药物为非极性的非极性的固定液被分离药物为极性的极性的固定液被分离药物为酯或醇酯、聚酯或醇、聚乙二醇类固定液难分离药物样品按一定比例组成的混
12、合液涂在载体5常用检测器种类：30多种，主要有：FID、AFID、NPD、ECD、MSD第三节高效液相色普法1基本原理：混合物中各组分在固定相与流动相中的移动速度不同二相互分离。分析HPLC的分离分析质量，主要参数如保留值（tR）、相平衡参数(K)、分离度(R)、理论塔板数(n)。2保留值：保留值：用来描述样品组分在色谱中保留程度的参数，是色谱的定性指标。可用保留时间、保留体积、调整保留时间和调整保留体积来表示。保留时间（tR）：从进样开始到某组分的色谱峰顶点时时间间隔保留体积(VR):从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大点时所需通过色谱柱的流动体积死时间t0：不保留组分（该组分不溶于固定相或
13、不被固定相吸附）的保留时间，相对应的流动相的体积为死体积V0调整保留时间tRtRt0和调整保留体积VRVRV03，相平衡参数：在色谱洗脱过程中样品分子在流动相和固定相之间分配处于动力学平衡状态，这一平衡可用平衡分配系数和容量因子表示。4分离度R：定量分析时要求定量峰与其他峰或内标峰有较好的分离度R,一般R1.5，除另有规定。5理论塔板数n（1）色谱柱的理论塔板数n=5.54(tR/wh/2)2或n=16(tR/w)，是柱效指标（2）在选定条件下用供试品溶液或内标物溶液（规定项规定），测得理论板数n,如果n规定的最小理论板数，应改变柱长、载体性能、色谱柱充填优劣，使n达到要求（3） wh/2越小
14、柱效越高。增加n来提高分离度，即使色谱峰变窄将两相邻峰分开6梯度洗脱：所谓梯度洗脱，具有两种或两种以上不同极性的溶剂在分离过程中按一定程序连续的改变，以改变流动相的配比和极性。7反相键合相色谱：在反相色谱中流动相得极性大于固定相得极性.洗脱次序为极性大得组分先洗脱,极性小得组分后洗脱固定相非极性键合相即键合相表面基团为非极性烃基,最常用得为十八烷基键合相(ODS键合相),但注意键合相的稳定性(pH27.5)及键合相的重现性流动相:与一般液相色谱用流动相的要求一样。化学稳定性好,不与固定相发生化学反应;必须与检测器相适应;对样品有适宜的溶解度;粘度小,因为粘度小的溶剂可增加柱压并影响柱效。最广泛
15、应用的流动相甲醇-水、乙睛-水、四氫呋喃-水8正相键合相色谱：正相键合相色谱中流动相的极性小于固定相的极性。洗脱次序为极性弱的先出峰,极性强的后出峰.正相键合相的分离机理有吸附合分配之分争,吸附过程是主要的相互作用。正相键合相色谱中的固定相为极性键合固定相,主要是氨基、氰基键合相。流动相:正相色谱流动相的选择原则和液-固色谱、薄层色谱的洗脱剂的选择大体相同,用非极性和弱极性的溶剂(如烃类溶剂)加入适量的极性溶剂(氯仿、醇、乙睛等,调节控制洗脱液的洗脱强度)。9 离子对色谱：将离子对的液-液提取用于色谱中所形成的方法,即把与离子型化合物带相反电荷的反离子加到流动相系统,使与被测的组分形成电中性的
16、离子产物而达到分离.这种方法称为离子对色谱,可分为正相离子对色谱和反相离子对色谱。反相离子对色谱在体内药物分析中应用广泛。第四节高效毛细管电泳法1原理：以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品种各组分之间淌度和分配系数的不同而实现分离的一类液相分离技术2 装置：一个高压电源、一根毛细管、一个检测器及两个供毛细管两端插入而又可和电源相连的缓冲液贮瓶。3主要分析参数：（1）淌度与迁移时间（2）电泳：荷电物质（离子）在电场中因受到吸引或排斥而引起的差速运动的现象（3）理论塔板数与分离度4主要分离模式：（1）毛细管区带电泳（2）胶束电动毛细管色谱（3）毛细管凝胶电泳（4）毛细管等电聚焦（5）毛
17、细管等速电泳（6）毛细管电色谱5高效毛细管电泳的柱技术（1）动态修饰毛细管壁（2）毛细管内壁表面涂层（3）凝胶柱荷无胶筛分（4）毛细管填充柱第五章荧光分光光度法。2荧光法定量分析基本原理：，荧光是药物及代谢物等物质在吸收光能之后发射而出的，溶液的荧光强度和该溶液吸收光能的程度以及溶液中荧光物质的荧光量子效率有关。荧光强度与浓度呈线性关系，实际测定的是荧光强度-F=kC。3一般测定方法的建立：标准曲线法：知量的标准物质和供试品进行相同处理后，配成一系列浓度不同的标准溶液，在测定条件相同的情况下，分别测定其荧光强度。以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。在相同条件下测定
18、样品溶液的荧光强度，在标准曲线上求出样品溶液的浓度。标准曲线制作方法：最大浓度的标准溶液做基础，强空白溶液的荧光强度读数调至0将该标准溶液的荧光强度的读数调至100，然后测定标准系列中其他各个标准溶液的荧光强度对照法：如果荧光的标准曲线通过零点，就可选择线性范围，用对照法进行测定。第六章免疫分析1免疫分析基本原理：免疫反应的本质是特异性抗体与抗原的结合反应,抗原只有遇到相应的特异抗体才能发挥抗原抗体反应,形成抗原-抗体复合物.抗原抗体的结合通常无法直接用肉眼看到结果,需要通过向反应系统中加入标记物来显示反应结果,在标记物不影响免疫反应“决定簇”的前提下,被标记的抗原或抗体仍能发生抗原抗体反应.
19、由于抗原与抗体(在生物药物分析中抗原相当于被测药物)结合时具有专一性和可饱和性,则可以利用被测药物(未标记抗原)与标记药物(标记抗原)之间竞争性地与抗体结合,建立药物浓度与响应值(RIA中为发射强度,FIA中为荧光强度)之间地函数关系,对生物样品地药物进行定量分析。2竞争抑制作用：若未标记抗原量增多则标记抗原-抗体复合物地形成就会因受到抑制而减少;体系中地特异抗体量是一定的,有一定饱和量的结合点,当未标记抗原占有的结合点(量)多时,标记抗原的结合点就会相应减少,且减少的程度与未标记抗原的量(浓度)有关.这种特异的竞争性抑制的数量关系就是免疫分析地定量基础。第八章体内手性药物色谱分析1手性药物的
20、专业术语与表示方法：（1）手性药物的分子结构中含有n个手性中心,将产生2n个立体异构体,其中右2n-1个对映体,余者为非对映体.（2） 对于手性药物常用的表达方式:左旋体和右旋体(对映体之间光学活性的差异);D和L系统(以标准参照物的化学相关性来确定的);S和R系统(根据与手性中心连接的各取代基优先顺序决定的结构)2手性药物中对映体药效学差异（1）对映体的药理作用相同（2）对映体的药理作用不同（3）一种具有治疗作用,另一种产生副作用（4）两种对映体具有相同的治疗作用,其中一种产生副作用（5）两种对映体作用互补（6）一种具有药理活性,另一种无活性或活性很弱3手性药物中对映体药动学差异（1）吸收:
21、药物在体内吸收一般分为主动吸收和被动吸收,头孢氨苄在体内是主动吸收,口服后仅有R(+)体被吸收（2） 分布手性药物在体内立体选择性地与血浆蛋白/组织结合程度,将对药物动力学分布容积/总清除率等参数产生影响.（3）代谢:手性药物在体内代谢过程具有立体选择性（4）消除:手性药物在肾小球过滤过程中无立体选择性,但主动分泌过程中有立体选择性4手性药物拆分的意义对于手性药物的安全和有效剂量方案的确定是很重要,采用药物分析方法测定生物体液中的手性药物,以评价其药理活性.药物动力学.毒理学等,会得出完全不同甚至错误的结论.以立体选择性方法对单个对映体进行测定,研究其血药浓度与临床疗效间的关系,分别评价单个对
22、映体的药理.毒理.药物动力学和不良反应等.临床上服用消旋体药物后进行药物检测时,分别检测各对映体的血药浓度,如果只测定两个对映体的总浓度,不但失去临床指导意义,而且还可能对临床合理用药造成误导.可见手性药物的立体选择性测定是必不可少的.第九章色谱-质谱联用技术色谱-质谱联用技术可以进行这样的工作,主要有以下几种:色谱-红外光谱色谱-核磁共振谱色谱-质谱联用.其中色谱-质谱联用在药学研究中发挥着重要作用2色谱-质谱联用仪（1）色谱仪接口质谱仪电子系统记录系统计算机系统（2）色谱仪与质谱仪的联机由接口连接,接口是色谱-质谱的关键部件（3）接口的作用:除去流动相分子,浓集和气化样品,接口性能很大程度
23、上决定着色谱-质谱联用仪的性能优劣.体内药物分析习题1、 体内药物分析主要与哪几门学科关系密切？2、 RIA、FID、ECD、NPD、GCMS、UV、GC、HPCE、NP-HPLC、RP-HPLC分别函指什么？3、 荧光分光光度法的猝灭作用及其影响因素4、 比较反相键合相色谱与正相键合相色谱5、 紫外可见分光光度法的基本原理6、 体内药物分析的对象、任务及特点7、 如何处理生物样品中蛋白质？8、 体内药物分析方法设立与建立的一般步骤9、 内标物应具备的条件及选择原则10、 气相色谱仪的两个主要组成部分11、 体内药物分析最常用且易获得的分析样品是什么？12、 生物样品处理方法选择的一般原则13
24、、 手性药物中对映体药效学差异主要表现哪六个方面？14、 气相色谱法中检测器有哪几种？15、 何谓抗原决定簇？16、 生物样品中待测组分浓集的必要性及浓集的两种方法17、 体内药物分析方法设立的主要依据18、 药物分子结构与荧光的关系19、 免疫分析法的基本原理20、HPCE法的主要分离模式答案1、为人们提供药物在体内的更多信息即了解药物在体内的数量和质量的变化，获得药物代谢动力学的各种参数、药物在体内的生物转化、代谢的方式和途径等信息；为新药的研制、生产和临床应用等方面的研究作出科学估计和评价；为相关学科提供信息和手段如：药物动力学、生物药剂学、临床药物治疗学、临床药理学。2、放射免疫分析、
25、火焰离子化检测器、氮磷检测器、气相质谱联用、紫外分光光度法、气相色谱法、高效毛细管电泳法、反相高效液相色谱法3、由于荧光性分子相互碰撞以及与其它物质的作用，有时会显著地减弱荧光发射强度，这种现象叫荧光地猝灭作用。影响的因素：浓度猝灭、磁性离子猝灭、温度猝灭、溶剂的影响重原子效应4、在反相色谱中流动相得极性大于固定相得极性.洗脱次序为极性大得组分先洗脱,极性小得组分后洗脱。正相键合相色谱中流动相的极性小于固定相的极性。洗脱次序为极性弱的先出峰,极性强的后出峰.正相键合相的分离机理有吸附合分配之分争,吸附过程是主要的相互作用，正相键合相色谱中的固定相为极性键合固定相,主要是氨基、氰基键合相5、物质
26、对不同颜色的光能吸收是有选择性的，特定的物质主要吸收一定波长的光，物质吸收了高能量的光以后，就发生能级跃迁产生吸收光谱，该法的定量依据：Beer-Lamber即朗伯比耳定律：A=ECL。6、体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物任务：培养学生具有强烈的药品全面质量控制的观念，使学生通过各种现代分析技术手段，了解药物在体内的数量和质量的变化进行分析，获得药物动力学的各种参数，以及药物在体内的转变、代谢的方式、途径等信息运用分析手段.特点：样品量少，不易重新获得n样品复杂，干扰杂质多n供临床用药监护的检测分析方法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒解救措施。
27、n实验室拥有多种仪器设备，可进行多项分析工作。n工作量大，测定数据的处理和阐明有时不太容易。需相关学科参与7、去除蛋白质的方法n加与水相混溶的有机溶剂n加入中性盐n加入强酸n加入含锌盐及铜盐的沉淀剂n酶解法8、分析方法地设立与建立的一般步骤以纯品进行测定以处理过的空白样品进行测定体内实际样品测定测定回收率以水代替空白样品添加标准品测定以空白样品添加标准品测定9、内标物是与被测物结构相近但不同的纯物质内标物与被测药物只相差一个化学元素内标物与被测药物为同系物内标物与被测药物结构相似内标物与被测药物结构不相似；但要求其理化性质必须与被测药物及其代谢物相似选择内标物的基本原则：内标物应是试样中不存在
28、的纯物质加入的量应该接近于被测组分不能不为色谱峰位于被测组分色谱峰附近，或几个被测组分色谱峰中间，并与这些组分完全分离10、色谱柱与检测器是构成气相色谱仪的两个主要部分：色谱柱由柱管和固定相组成，在气相色谱中起分离作用检测器是将流出色谱柱的载气中被分离组分的浓度变化，转化为电信号变化的装置。11、最常用的生物样品是较易得到的血样、唾液、尿液（特殊情况选用乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织）n血样（血浆、血清、全血其中的总浓度）n唾液(唾液中药物浓度与血浆中药物浓度有一定的比值时才有意义)n尿液（目的与血液、唾液不同）12、一般根据药物的结构、物理性质、体内药物浓度大小、干扰成分的多少、样
29、品的预处理方法、实验条件和目的等因素进行综合考虑，选择出可供生物样品中药物及其代谢物含量测定的分析方法。13、对映体的药理作用相同n对映体的药理作用不同n一种具有治疗作用，另一种产生副作用n两种对映体具有相同的治疗作用，其中一种产生副作用n两种对映体作用互补n一种具有药理活性，另一种无活性或活性很弱14、作用：将流出色谱柱的载气中被分离组分的浓度变化，转化为电信号变化的装置。色谱柱与检测器是构成气相色谱仪的两个主要部分种类：30多种，主要有：FID、AFID、NPD、ECD、MSD151）抗原决定簇是指抗原分子上的某些特征结构和官能团，它们决定了抗原刺激机体时所产生抗体的特异性2）抗体与药物的
30、特异性结合时针对分子上的抗原决定簇，并非整个药物分子3）药物分子中有足够多的抗原决定簇，才能在相近结构的化合物中被抗体识别，产生特异性结合。4）绝大多数药物是小分子半抗原，其上的决定簇较少；有些合成药具有相同的母核或取代基为决定簇时得到的抗体专一性比较低。16、浓集的必要性样品在提取过程中被测组分得到纯化但因微量的组分分布在较大体积的提取溶剂中，由于进样量的限制，被测组分量可能达不到检测灵敏度，故需将被测组分浓集后再测定两种浓集方法：末次提取时加入提取液尽量少；挥去提取溶剂法17、方法设计的主要依据：1)明确分析方法的目的要求2)、调研文献了解待测药物的特性3)、仪器设备与实验室条件18、药物
31、及其代谢物在光照射下吸收紫外或可见光的能量，使外层电子由基态跃迁到较高能级的激发态。当处于激发态的电子又回到基态时，可将这部分能量以光子形式发射出而产生荧光。产生的荧光其能量比吸收光的能量小一些，所以荧光的波长比照射光的波长要较长一些。药物必须具有一定的结构才能产生荧光，一般要求药物的分子中含有双键共轭体系刚性平面结构，在200800nm波长范围内具有强吸收。但取代基的性质不同或取代基的位置发生变化时，其荧光强度也随之发生变化，一般规律如：1）药物分子直接与斥电子基团（OH,-NH2,-OCH3）联接有利于荧光的发生，与吸电子基团(-NO2,-Br,-I,-CN,-COOH)联接则使荧光减弱2
32、)药物分子结构中共轭体系增加双键，特别是多环芳香结构，可使荧光增加3)药物具有可电离的具体联接在共轭系统上，则pH值的选择将影响测定的灵敏度和选择性，酚类电离成阴离子使荧光增强；芳胺成为芳香铵阳离子可抑制荧光发生。4）药物分子结构中芳环杂原子（N、S、O属于斥电子基团）具有荧光性能，含有氨基-NH2的芳环在酸性介质中，由于N的质子化而使荧光强度增加。19、抗原抗体的结合通常无法直接用肉眼看到结果，需要通过向反应系统中加入标记物来显示反应结果；在标记物不影响免疫反应“决定簇”的前提下，被标记的抗原或抗体仍能发生抗原抗体反应由于抗原与抗体(在生物药物分析中抗原相当于被测药物)结合时具有专一性和可饱和性，则可以利用被测药物(未标记抗原)与标记药物(标记抗原)之间竞争性地与抗体结合，建立药物浓度与响应值(RIA中为发射强度，FIA中为荧光强度)之间地函数关系，对生物样品地药物进行定量分析。20、主要分离模式有：毛细管区带电泳胶束电动毛细管色谱毛细管凝胶电泳毛细管等电聚焦毛细管等速电泳毛细管电色谱-