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1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。噬菌体载体-第三章噬菌体载体一、填空题1噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是-；二是-。2第一个报道的全测序的单链DNA噬菌体是X174，DNA长5386个碱基对，共一个基因，为一环状DNA分子，基因组的最大特点是-。3噬菌体的基因组DNA为kb，有多个基因。在体内，它有两种复制方式，扩增时(早期复制)按-复制，成熟包装(晚期复制)则是按-复制。它有一个复制起点，进行-向复制。噬菌体的DNA既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然成环。其原因主要是在噬菌体线性DNA分子的两端
2、各有一个个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的黏性末端部位就叫做位点。4根据噬菌体的包装能力，将野生型噬菌体的基因组DNA改造成插入型载体，该载体的最小分子大小约为kb，插入的外源片段最大不超过kb。5野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是和-。6黏粒(cosmid)是质粒噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS位点序列来自-，最大的克隆片段达到-kb。7有两类改造型的噬菌体载体，即插入型和取代型。从酶切点看，插入型为个，取代型为个。8野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1)-(2)(3)-。9M13单链噬菌体的复制分为三个阶段：(1)(2)-，(
3、3)。10噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是-，而来自噬菌体的主要结构是-。11M13单链噬菌体基因2和基因4之间的IG区有三个最重要的功能，即(1)(2)-(3)-。12野生型的M13有10个基因，分为三个功能集团，其中与复制有关的两个基因是：-和-。13以丸噬菌体载体和黏粒载体构建文库时，起始DNA的长度是不同的，前者为-kb，后者为kb。14噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组的-的范围内。二、判断题1取代型载体(replacementvector)是指同一种限制性内切核酸酶在DNA中具有两个切点。外源DNA通过取代这
4、两个切点问的片段被克隆。2.现在最常用的pUC载体是pUCl8，它的分子量小，具有多克隆位点和易于选择的分子标记，并且是松弛型复制。另外，这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链DNA。3噬菌粒(phagemid)pUCll8pUCll9载体是集质粒和丝状噬菌体有利特征于一身的载体，既能合成单链DNA,又能合成双链DNA。4噬菌体DNA和M13单链噬菌体DNA在成熟前的DNA复制都是用滚环模型。5M13噬菌体每个世代裂解宿主后，可释放100个子代噬菌体。6以黏粒为载体的重组体虽然在平板上生长的速度不同，但是转化子中插入片段的扩增量是相同的。三、选择题(单选或多选)1限制性内切核酸酶EcoRI在野生
5、型的丸噬菌体DNA中有5个切点、Hind有7个切点，BamHI也有5个切点。调整这些酶切位点的数量，主要通过()(a)体内突变(b)完全酶切后连接(c)部分酶切(d)先用甲基化酶修饰后再酶切2pBluescriptMl3载体在多克隆位点的两侧引入了T7和T3两个噬菌体的启动子，这样增加了该载体的功能，如：(a)可以对插入到多克隆位点的外源片段进行转录分析(b)利用这两个启动子的通用引物进行PCR扩增(c)利用通用引物进行序列分析(d)利用这两个启动子进行定点突变上述四种功能中哪一种是不正确的?()3下面关于细菌人工染色体(BAC)的特征描述，除了()外都是正确的。(a)通过电激法将大质粒转化大
6、肠杆菌比酵母的转化率提高了10100倍(b)BAC载体在细菌中以环型超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易(c)BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝(d)克隆到BAC载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列4以黏粒为载体转染受体菌后，平板上生长的菌落会大小不一、生长速度不一的现象，其原因是()(a)营养成分不足(b)重组后的质粒复制不稳定(c)重组后的黏粒整合到宿主染色体上(d)重组体中插入片段的大小不同5M13K07是一种辅助噬菌体DNA,可用它帮助噬菌粒制备单链DNA,这是因为()(a)M13K07能够进行滚环复制，得到大量的单链噬菌体DNA(b)M13K07能够提供成熟包装的蛋白(c
7、)M13K07提供了成熟包装所需的信号(d)M13K07的10个基因都是正常的6黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，()(a)它具有COS位点，因而可进行体外包装(b)它具有质粒DNA的复制特性(c)进入受体细胞后，可引起裂解反应(d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应7Mu噬菌体也是一种转座元件，这种转座元件()(a)可引起寄主的突变(b)可用于细胞内的基因工程(c)具有转座酶基因(d)以上说法都正确8.关于M13的IG区，下列说法中哪一项不妥当?()(a)具有正负链的复制起点(b)具有噬菌体DNA被包装的信号(c)具有150个碱基的AT富集区(d)具有八个回文序列，可形成五个发夹环9M
8、13噬菌体基因组编码10个基因，在它的成熟过程中起调节作用的蛋白是()(a)gp2蛋白(b)gp5蛋白(c)gp7蛋白(d)gp9蛋白四、简答题1在转导过程中，通常需要把受体菌和在供体中生长的噬菌体悬浮液分别铺在选择性培养基上，为什么?2如何将野生型的九噬菌体改造成为一个理想的载体?3用SalI切割从噬菌体J2分离的DNA时，得到8个片段，分别是：1.3、2.8、3.6、5.3、7.4、7.6、8.1和11.4kb。但是，用SalI切割从被感染的寄主细胞中分离到的J2噬菌体DNA时，只得到7个片段，分别是：1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9和11.4kb，根据这些结果，您得到哪些信
9、息?4在cI基因正常时为什么也会出现浑浊的噬菌斑?不正常则是清亮的噬菌斑?5噬菌体DNA被包装到噬菌体的头部，需要哪些基本条件?为什么?五、问答题1.为什么野生型的九噬菌体DNA不宜作为基因工程载体?2什么是蓝白斑筛选法?3.蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?4什么是cI筛选法?5噬菌体载体具有哪些优点与不足?6什么是M13的IG序列区?有何特点和功能?7将野生型的M13改造成基因工程载体，首先是进行酶切位点的改造，请问M13中的EcoRI最初是如何引入的?8.以置换型噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌体的就就一定是重组体?9M13系列载体具有那些优缺点？10黏粒载体具有哪些特点与不足?11辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?-