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1、第二讲免疫器官的观察与免疫第二讲免疫器官的观察与免疫细胞的分离细胞的分离第1页，共30页，编辑于2022年，星期二第第 二二 讲讲免疫器官的观察与免疫器官的观察与免疫细胞的分离免疫细胞的分离第2页，共30页，编辑于2022年，星期二实验目的实验目的掌握小白鼠的捉拿与处死方法掌握小白鼠的捉拿与处死方法掌握免疫细胞分离的方法及其效果的判断掌握免疫细胞分离的方法及其效果的判断熟悉血细胞计数板的构造及使用方法熟悉血细胞计数板的构造及使用方法第3页，共30页，编辑于2022年，星期二免疫器官的观察免疫器官的观察 第4页，共30页，编辑于2022年，星期二免疫细胞种类免疫细胞种类第5页，共30页，编辑于2
2、022年，星期二免疫细胞分离技术免疫细胞分离技术密度梯度离心法密度梯度离心法免疫吸附分离法免疫吸附分离法荧光激活细胞分选仪分离法荧光激活细胞分选仪分离法磁珠分离法磁珠分离法抗原肽抗原肽-MHC分子四聚体技术分子四聚体技术花环沉降法花环沉降法第6页，共30页，编辑于2022年，星期二外周血单核细胞的分离外周血单核细胞的分离离心前离心前离心后离心后稀释抗凝血稀释抗凝血淋巴细胞分离液淋巴细胞分离液血浆血浆单个核细胞单个核细胞粒细胞粒细胞红细胞红细胞密度梯度离心法密度梯度离心法第7页，共30页，编辑于2022年，星期二淋巴细胞及其亚群的分离淋巴细胞及其亚群的分离第8页，共30页，编辑于2022年，星期
3、二抗原肽抗原肽-MHC 分子四聚体技术分子四聚体技术T第9页，共30页，编辑于2022年，星期二小白鼠的抓取和固定小白鼠的抓取和固定 通常用右手提起小鼠尾巴将其放在通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，翻转后将小鼠置于左双耳及颈部皮肤，翻转后将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。尾部，即可将小鼠完全固定。第10页，共30页，编辑于2022年，星期二小白鼠的抓取和固定小白鼠的抓取和固定第
4、11页，共30页，编辑于2022年，星期二小白鼠的抓取和固定小白鼠的抓取和固定第12页，共30页，编辑于2022年，星期二小白鼠的处死方法小白鼠的处死方法颈椎脱臼法：用拇指和食指用力往下按住颈椎脱臼法：用拇指和食指用力往下按住鼠头，另一只手抓住鼠尾，用力稍向后上鼠头，另一只手抓住鼠尾，用力稍向后上方一拉，使之颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓方一拉，使之颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓断离，动物立即死亡。断离，动物立即死亡。第13页，共30页，编辑于2022年，星期二小白鼠的处死法（颈椎脱臼法）小白鼠的处死法（颈椎脱臼法）第14页，共30页，编辑于2022年，星期二倒倒 T 字字开腹开腹 第15页，共30页，编
5、辑于2022年，星期二小白鼠脾脏小白鼠脾脏 第16页，共30页，编辑于2022年，星期二小白鼠脾脏小白鼠脾脏第17页，共30页，编辑于2022年，星期二小白鼠脾脏小白鼠脾脏 第18页，共30页，编辑于2022年，星期二小白鼠胸腺小白鼠胸腺第19页，共30页，编辑于2022年，星期二小白鼠胸腺小白鼠胸腺第20页，共30页，编辑于2022年，星期二【实验器材实验器材】小白鼠小白鼠手术器械，解剖台手术器械，解剖台,血细胞计数板血细胞计数板,显显微镜微镜0.2的台盼蓝染液的台盼蓝染液第21页，共30页，编辑于2022年，星期二【实验步骤实验步骤】1.1.颈椎脱臼法处死小白鼠，取其脾脏颈椎脱臼法处死小白
6、鼠，取其脾脏2.2.将脾脏放入适量（约将脾脏放入适量（约15ml15ml）生理盐水）生理盐水中，除去筋膜中，除去筋膜3.3.取绿豆大小的脾脏，用玻片研磨制成取绿豆大小的脾脏，用玻片研磨制成10ml10ml细胞悬液细胞悬液4.4.取取mlml细胞悬液于试管中，加入滴细胞悬液于试管中，加入滴台盼蓝染液台盼蓝染液5.5.混匀后静置混匀后静置3 3分钟，低倍镜观察分钟，低倍镜观察第22页，共30页，编辑于2022年，星期二【台盼兰拒染法原理台盼兰拒染法原理】通透性着色颜色体积 死细胞 高 易蓝大 活细胞 低 难无色小活细胞活细胞 死细胞死细胞第23页，共30页，编辑于2022年，星期二注意事项脾脏去净
7、筋膜，弃边缘，取其中间部分脾脏去净筋膜，弃边缘，取其中间部分研磨时不可用力过大，时间不宜过长研磨时不可用力过大，时间不宜过长染色时间不宜过长或过短染色时间不宜过长或过短血细胞计数板的使用方法（血细胞计数板的使用方法（1010倍镜、暗视野）倍镜、暗视野）第24页，共30页，编辑于2022年，星期二血细胞记数板血细胞记数板 细胞计数池细胞计数池第25页，共30页，编辑于2022年，星期二血细胞计数池的构造血细胞计数池的构造白细胞计数区：白细胞计数区：红细胞计数区：红细胞计数区：无效计数区无效计数区第26页，共30页，编辑于2022年，星期二【计数原则计数原则】1 1、2 2、“”形随机计数形随机计数S S计左不计右，计上不计下计左不计右，计上不计下 第27页，共30页，编辑于2022年，星期二【实验结果实验结果】第28页，共30页，编辑于2022年，星期二实验操作录像实验操作录像第29页，共30页，编辑于2022年，星期二实验报告实验报告实验原理实验原理实验方法实验方法实验结果及分析实验结果及分析第30页，共30页，编辑于2022年，星期二