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1、血液标本的临床检验第1页，本讲稿共18页血液及骨髓标本血液及骨髓标本的的细菌学检验细菌学检验第2页，本讲稿共18页一、标本的采集一、标本的采集v1 1采血指征采血指征：发热发热(38)(38)或低温或低温(36)(36)寒战，白细胞增多，皮肤黏寒战，白细胞增多，皮肤黏膜出血、昏迷、多器官衰竭，血压降低，膜出血、昏迷、多器官衰竭，血压降低，C C反应蛋白升高反应蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少，血小板减及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症少等，或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血液培养应采集血液培养。第3页，本讲稿共
2、18页v2 2采血时机采血时机：在患者发热期间越早越好，最好在抗在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，以发热初期或高峰时为宜菌治疗前，以发热初期或高峰时为宜。第4页，本讲稿共18页v3 3采血次数及间隔采血次数及间隔：对怀疑菌血症的成年病人，推荐同时：对怀疑菌血症的成年病人，推荐同时在不同部位采集在不同部位采集2-32-3套（包括一套需氧瓶、一套厌氧瓶或套（包括一套需氧瓶、一套厌氧瓶或2 2套需氧瓶）但套需氧瓶）但2424小时内一般不超过小时内一般不超过3 3次。以后次。以后2 25 5天不必天不必采血。但心内膜炎、真菌血症和导管相关性败血症应多次采血。但心内膜炎、真菌血症和导管相关性败血
3、症应多次采集。婴幼儿病人，推荐在不同部位采集采集。婴幼儿病人，推荐在不同部位采集2 2套，可不做厌套，可不做厌氧培养。氧培养。第5页，本讲稿共18页v4 4采血量采血量以培养基的以培养基的1/101/10为宜。成人每穿刺点应采血为宜。成人每穿刺点应采血5 510ml10ml。儿童采血量适当减少，婴儿抽血量。儿童采血量适当减少，婴儿抽血量1 12ml2ml。v5 5采血方法：采血方法：a.a.皮肤消毒和无菌操作；皮肤消毒和无菌操作；b.b.从肘静脉采血；对于亚急性心内膜炎等病人，应从肘静脉采血；对于亚急性心内膜炎等病人，应从肘动脉或股动脉采血更适宜；从肘动脉或股动脉采血更适宜；c.c.不推荐血入
4、瓶前换针头；不推荐血入瓶前换针头；第6页，本讲稿共18页v6 6。骨髓标本：。骨髓标本：用骨髓穿刺针从髂骨采集用骨髓穿刺针从髂骨采集v7.7.脑脊液标本脑脊液标本 1.1.严格无菌操作，采集后置于无菌试管中，严格无菌操作，采集后置于无菌试管中，15 min15 min内保温送到实验室，内保温送到实验室，绝不可冷藏绝不可冷藏。2.2.脑脊液标本留取最小量：细菌：脑脊液标本留取最小量：细菌：1ml1ml（但抗（但抗酸杆菌酸杆菌2ml2ml），真菌：），真菌：2ml2ml第7页，本讲稿共18页8.8.标本拒收标准：标本拒收标准：v 血培养瓶破裂或有明显污染血培养瓶破裂或有明显污染v 培养瓶标识与化验
5、申请单不符培养瓶标识与化验申请单不符v 用过期的培养瓶采集标本、采血量不足用过期的培养瓶采集标本、采血量不足v 对于不合格标本，及时通知采集人员重新留取标本对于不合格标本，及时通知采集人员重新留取标本第8页，本讲稿共18页二、标本的接种二、标本的接种v1 1、血液标本采集后，立即注入适当的液体增菌培养基血液标本采集后，立即注入适当的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使充分混合，以防止凝固。内，迅速轻摇，使充分混合，以防止凝固。v2 2、一般细菌用普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤，营养要求较高、一般细菌用普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤，营养要求较高的细菌用肝浸液或胰胨肉汤等。的细菌用肝浸液或胰胨肉汤等。v3 3、如
6、果病人曾服用磺胺类药物，应在每、如果病人曾服用磺胺类药物，应在每100 ml 100 ml 培养基内培养基内加对氨苯甲酸加对氨苯甲酸5 mg 5 mg。如果病人已用青霉素治疗，应在培。如果病人已用青霉素治疗，应在培养基中加入青霉素酶养基中加入青霉素酶100 U100 U50 ml 50 ml（青霉素酶不耐热，（青霉素酶不耐热，应在临用时加入）。若病人已用其他抗生素治疗时，可应在临用时加入）。若病人已用其他抗生素治疗时，可用硫酸镁肉汤增菌。用硫酸镁肉汤增菌。v4 4、接种时应严格注意无菌操作，避免污染杂菌、接种时应严格注意无菌操作，避免污染杂菌第9页，本讲稿共18页三、细菌的培养三、细菌的培养1
7、 1、标本的自动化培养、标本的自动化培养v 血培养瓶置于全自动血培养仪中，阳性仪器报警血培养瓶置于全自动血培养仪中，阳性仪器报警 。v涂片革兰染色，镜检，结果想临床医师报告。涂片革兰染色，镜检，结果想临床医师报告。v同时转钟血平板、麦康凯或加做巧克力平板，并进行同时转钟血平板、麦康凯或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验。直接药敏试验。v挑取菌落涂片镜检，分别选用挑取菌落涂片镜检，分别选用GPIGPI或或GNIGNI上机进行细菌鉴上机进行细菌鉴定和药敏试验。定和药敏试验。第10页，本讲稿共18页2 2、标本的手工培养、标本的手工培养u 标本置标本置35 1 35 1 温箱内孵育，每天取出一次观察
8、有无细温箱内孵育，每天取出一次观察有无细菌生长，（注意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、菌生长，（注意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液变色、指示剂变色等现象）。血液变色、指示剂变色等现象）。u疑有细菌生长时，挑取培养物涂片行革兰染色镜检。及时疑有细菌生长时，挑取培养物涂片行革兰染色镜检。及时转种血平板或其他培养基进行药敏试验或分离培养。根据转种血平板或其他培养基进行药敏试验或分离培养。根据菌落特征及菌体染色镜检形态，可得出初步印象，并需继菌落特征及菌体染色镜检形态，可得出初步印象，并需继续培养，按各种属细菌加以鉴定。报告：续培养，按各种属细菌加以鉴定。报告：“有有X X X X
9、X X 菌生菌生长长 第11页，本讲稿共18页u如不见细菌生长，应继续培养至第如不见细菌生长，应继续培养至第7 7 天，取出后接种于血天，取出后接种于血平板，经培养仍无细菌生长时，可报告为：平板，经培养仍无细菌生长时，可报告为：“经经7 7 天培天培养无细菌生长。养无细菌生长。”对于亚急性心内膜炎病人标本，应对于亚急性心内膜炎病人标本，应培养一个月，才能作出结论。培养一个月，才能作出结论。3.3.特殊菌的培养特殊菌的培养u 布鲁菌的培养：将血液标本接种于肝浸液布鲁菌的培养：将血液标本接种于肝浸液2 2 支，分别置于支，分别置于1010二二氧化碳及普通环境中氧化碳及普通环境中351 351 培养
10、，每培养，每2 2天观察一次，若有菌生长，天观察一次，若有菌生长，作涂片染色镜检，并移种于作涂片染色镜检，并移种于2 2 份肝浸液平板或血平板，分别置于份肝浸液平板或血平板，分别置于1010二氧化碳及普通环境下培养。用菌落再作布氏杆菌血清凝集试二氧化碳及普通环境下培养。用菌落再作布氏杆菌血清凝集试验，如为阳性，可报告为：验，如为阳性，可报告为：“培养出布氏杆菌培养出布氏杆菌”。必要时，进一步。必要时，进一步鉴定及分型。若培养鉴定及分型。若培养3030天后仍无细菌生长者，则可报告：天后仍无细菌生长者，则可报告：“经经X X 周培周培养无细菌生长。养无细菌生长。”第12页，本讲稿共18页四、检验程
11、序四、检验程序第13页，本讲稿共18页五、结果报告五、结果报告1、阳性结果报告分为三级。、阳性结果报告分为三级。v一级报告：阳性报警，涂片镜检结果（电话）通知临床，同一级报告：阳性报警，涂片镜检结果（电话）通知临床，同时记录报告日期、时间、内容及接受报告人的姓名。血培养时记录报告日期、时间、内容及接受报告人的姓名。血培养阳性应列为危急。阳性应列为危急。v二级报告：报告直接药敏结果。根据涂片染色选择二级报告：报告直接药敏结果。根据涂片染色选择MH MH 或加血或加血MHMH平板，取培养液平板，取培养液0.2ml0.2ml涂布平板，根据镜下特征涂布平板，根据镜下特征选择药敏纸片，选择药敏纸片，6
12、67 7个小时读取初步药敏结果。个小时读取初步药敏结果。u三级报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价和建议。如三级报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价和建议。如与初步报告不符，及时与临床沟通，并在书面最终报告注明与初步报告不符，及时与临床沟通，并在书面最终报告注明变更内容变更内容第14页，本讲稿共18页2 2、阴性结果的报告、阴性结果的报告v血培养血培养7272小时，未见细菌生长，应通知临床医生，以小时，未见细菌生长，应通知临床医生，以便作相应处理，但培养瓶要继续培养至第便作相应处理，但培养瓶要继续培养至第5 5日，方可发日，方可发出阴性报告。出阴性报告。v如发现有菌生长，可补发报告。对发出
13、报告进行销号，如发现有菌生长，可补发报告。对发出报告进行销号，并做好菌名或无菌及报告日期登记并做好菌名或无菌及报告日期登记3 3、结果上报、结果上报 传染病（伤寒沙门菌）报医务科传染病（伤寒沙门菌）报医务科 传染病菌种保存，交疾病控制中心复核传染病菌种保存，交疾病控制中心复核第15页，本讲稿共18页六、注意事项六、注意事项1.1.抽血后无需更换针头即可注入血液瓶中抽血后无需更换针头即可注入血液瓶中2.2.抽血前应贴好标签，标签不能覆盖条形码抽血前应贴好标签，标签不能覆盖条形码3.3.若不能立即送实验室，应置室温或若不能立即送实验室，应置室温或3535培养箱，绝不可放冰箱培养箱，绝不可放冰箱4.
14、4.有自动鉴定仪的实验室应有自动鉴定仪的实验室应2424小时值班，以便及时处理阳性小时值班，以便及时处理阳性报警标本。报警标本。5.5.如不同部位采集的标本结果不一致，或均阳性为凝固如不同部位采集的标本结果不一致，或均阳性为凝固酶阴性葡萄球菌，应与临床沟通。酶阴性葡萄球菌，应与临床沟通。第16页，本讲稿共18页七、临床意义七、临床意义引起败血症的多为耐药性金黄色葡萄球菌、某些革兰阴引起败血症的多为耐药性金黄色葡萄球菌、某些革兰阴性杆菌及部分球菌。性杆菌及部分球菌。v疖、痈、脓肿和化脓性骨髓炎继发的败血症主要由金黄色疖、痈、脓肿和化脓性骨髓炎继发的败血症主要由金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌引起；葡
15、萄球菌和溶血性链球菌引起；v尿道、胆道、胃肠道和粘膜损伤引起的败血症以大肠埃希菌尿道、胆道、胃肠道和粘膜损伤引起的败血症以大肠埃希菌最常见；最常见；v烧伤后铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌多见；烧伤后铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌多见；v伤寒和服伤寒于发病伤寒和服伤寒于发病1-21-2周作血液培养，检出阿绿可达周作血液培养，检出阿绿可达80%-90%80%-90%第17页，本讲稿共18页八、危急值报告八、危急值报告 仪器报警（肉眼观察）阳性标本的直接涂仪器报警（肉眼观察）阳性标本的直接涂片、革兰染色，确定细菌种类，应立即向临片、革兰染色，确定细菌种类，应立即向临床报告细菌涂片结果。床报告细菌涂片结果。第18页，本讲稿共18页