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1、关于动物细胞培养和核移植技术PPT第一张，PPT共二十四页，创作于2022年6月动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞核移植、动物细胞融合、动物细胞融合、单克隆抗体单克隆抗体动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的是其他动物细胞工程技术的基础。基础。提问：提问：v植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养植物组织培养,植物体细胞杂交植物体细胞杂交第二张，PPT共二十四页，创作于2022年6月一、动物细胞培养一、动物细胞培养原理：原理：1、动物细胞培养过程、动物细胞培养过程
2、细胞增殖（有丝分裂）221 动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术第三张，PPT共二十四页，创作于2022年6月 从动物机体中取出相关组织，将它们从动物机体中取出相关组织，将它们分散成分散成单个细胞单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。胞生长和增殖。一、动物细胞培养一、动物细胞培养1 1、动物细胞培养的概念、动物细胞培养的概念第四张，PPT共二十四页，创作于2022年6月动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官（剪碎）（剪碎）细胞悬浮液细胞悬浮液无限增殖（细胞发生突变）无限增殖（细胞发生突变）单个细胞单个细胞培养
3、瓶中培养培养瓶中培养培养液培养液稀释制备稀释制备原原代代培培养养传传代代培培养养胰蛋白酶或胰蛋白酶或胶原蛋白酶胶原蛋白酶出现出现贴壁生长贴壁生长，接触抑制接触抑制约约1010代以内细胞（正常的二倍体核型）代以内细胞（正常的二倍体核型）约约10-5010-50代细胞（部分细胞核型改变）代细胞（部分细胞核型改变）胰蛋白酶胰蛋白酶第五张，PPT共二十四页，创作于2022年6月细胞细胞悬浮液悬浮液细胞贴细胞贴细胞贴细胞贴满瓶壁满瓶壁满瓶壁满瓶壁50505050代代代代细胞细胞细胞细胞原代原代原代原代培养培养培养培养传代传代传代传代培养培养培养培养原代培养原代培养:将动物组织经胰蛋白酶等处理后的初次培养
4、。将动物组织经胰蛋白酶等处理后的初次培养。传代培养传代培养:对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。培养。第六张，PPT共二十四页，创作于2022年6月动动动动物物物物组组组组织织织织单单单单个个个个细细细细胞胞胞胞细细细细胞胞胞胞悬悬悬悬液液液液贴贴贴贴壁壁壁壁生生生生长长长长分分分分瓶瓶瓶瓶培培培培养养养养10代代细细胞胞50代代细细胞胞不不死死细细胞胞原代培养原代培养原代培养原代培养传代培养传代培养传代培养传代培养胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋或胶原蛋或胶原蛋或胶原蛋白酶白酶白酶白酶剪碎剪碎剪碎剪碎加培养液加培养液加培养
5、液加培养液接触抑制接触抑制接触抑制接触抑制少数癌变少数癌变少数癌变少数癌变少数少数少数少数动物细胞培养技术流程动物细胞培养技术流程失去接触失去接触失去接触失去接触抑制现象抑制现象抑制现象抑制现象细胞核型细胞核型不变不变第七张，PPT共二十四页，创作于2022年6月 当贴壁细胞生长到表面相当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂互接触时，细胞就会停止分裂增殖增殖细胞出现接触抑制细胞出现接触抑制。哪些细胞失去了接触抑制？哪些细胞失去了接触抑制？传代培养时，少数超过传代培养时，少数超过50代的细胞，由于遗传物质发生代的细胞，由于遗传物质发生改变，可无限增殖，并失去了改变，可无限增殖，并失去了
6、接触抑制接触抑制肿瘤细胞肿瘤细胞。接触抑制接触抑制第八张，PPT共二十四页，创作于2022年6月动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶1010代细胞代细胞5050代细胞代细胞细胞株细胞株无限传代（不死无限传代（不死性）性）细胞系细胞系遗传物质遗传物质改变改变遗传物质未遗传物质未改变改变第九张，PPT共二十四页，创作于2022年6月例例1 1、正常细胞在分裂时，只要和相邻细胞接触，、正常细胞在分裂时，只要和相邻细胞接触，就停止活动，不再分裂。这一现象称为就停止活动，不再分裂。这一现象称为“接触抑接触抑制制”。对这一事实的有关推测，正确的有
7、。对这一事实的有关推测，正确的有 （）A A动物体细胞培养过程中，在遗传物质发生变化以动物体细胞培养过程中，在遗传物质发生变化以后，只能形成单层细胞。后，只能形成单层细胞。B B癌细胞在体外培养时，不可能成为隆起的多层癌细胞在体外培养时，不可能成为隆起的多层细胞。细胞。C C癌细胞不受癌细胞不受“接触抑制接触抑制”，这可能与它的细胞表，这可能与它的细胞表面发生变化有关。面发生变化有关。D D单细胞生物分裂产生的子细胞，彼此间也存在单细胞生物分裂产生的子细胞，彼此间也存在“接触抑制接触抑制”。C第十张，PPT共二十四页，创作于2022年6月多细胞生物的细胞膜上存在着多细胞生物的细胞膜上存在着糖蛋
8、白糖蛋白，细，细胞之间的胞之间的信息识别功能信息识别功能使细胞间存在使细胞间存在“接触接触抑制抑制”。单细胞生物分裂产生的子细胞，能。单细胞生物分裂产生的子细胞，能独立进行生命活动，不存在独立进行生命活动，不存在“接触抑制接触抑制”。第十一张，PPT共二十四页，创作于2022年6月4、动物细胞培养条件：、动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境（添加一定量的（添加一定量的抗生素抗生素，定期更换培养液），定期更换培养液）2、营养、营养（葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清动物血清等。等。）3、温度和、温度和PH 36.5+（-）0.5度,7.2-
9、7.44、气体环境：、气体环境：O2和和CO2（95%空气和空气和5%CO2）O O2 2是细胞代是细胞代谢所必需的，谢所必需的，COCO2 2的主要作用是维持培养液的的主要作用是维持培养液的pHpH。保证细胞顺利的生保证细胞顺利的生长增殖长增殖维持培养液的维持培养液的PH第十二张，PPT共二十四页，创作于2022年6月 4 4、应用、应用、生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）。隆抗体）。、作为基因工程中的受体细胞。作为基因工程中的受体细胞。、培养正常细胞或各种病变的细胞，用于生培养正常细胞或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。理、病理
10、、药理等方面的研究。、培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。断某种物质的毒性。检测有毒物质毒性大小，检测有毒物质毒性大小，原理是原理是动物细胞经该物质处理后，根据变异率动物细胞经该物质处理后，根据变异率判断（畸变细胞所占的比例越大，说明该物质毒判断（畸变细胞所占的比例越大，说明该物质毒性越大）。性越大）。第十三张，PPT共二十四页，创作于2022年6月思考：思考：2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基
11、有何独特之处？、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基、液体培养基 2、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分
12、散了做成细胞悬浮液利于培养成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体物个体第十四张，PPT共二十四页，创作于2022年6月小结：植物组织培养和动物细小结：植物组织培养和动物细胞培养的比较胞培养的比较比比较项目目植物植物组织培养培养动物物细胞培养胞培养原理原理细胞的全能性胞的全能性细胞增殖胞增殖培养基性培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成分培养基特有成分蔗糖蔗糖植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 动物血清物血清培养培养结果果植物体植物体细胞株、胞株、细胞系胞系
13、培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得得细胞或胞或细胞胞分泌蛋白分泌蛋白第十五张，PPT共二十四页，创作于2022年6月二二.动物细胞核移植技术和克隆动物动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的去掉细胞核的卵母细胞卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物克隆动物）。）。分分类类胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，细胞分化程度低，恢复全能性容易；恢复全
14、能性容易；细胞分化程度高，细胞分化程度高，恢复全能性不容易恢复全能性不容易1.1.动物细胞核移植概念：动物细胞核移植概念：（难度高难度高）第十六张，PPT共二十四页，创作于2022年6月卵母细胞卵母细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程融合后的卵母细胞融合后的卵母细胞第十七张，PPT共二十四页，创作于2022年6月电激处理使供电激处理使供电激处理使供电激处理使供体核进入受体体核进入受体体核进入受体体核进入受体卵母细胞构建卵母
15、细胞构建卵母细胞构建卵母细胞构建重组胚胎重组胚胎重组胚胎重组胚胎卵母细胞采集、培养卵母细胞采集、培养卵母细胞采集、培养卵母细胞采集、培养MM中中中中期期期期卵母细胞卵母细胞卵母细胞卵母细胞供体牛供体牛供体牛供体牛供体细胞注入供体细胞注入供体细胞注入供体细胞注入去核卵母细胞去核卵母细胞去核卵母细胞去核卵母细胞代孕母牛代孕母牛代孕母牛代孕母牛克隆牛克隆牛克隆牛克隆牛体细胞培养体细胞培养体细胞培养体细胞培养去核卵母细胞去核卵母细胞去核卵母细胞去核卵母细胞去核去核去核去核胚胎胚胎胚胎胚胎移植移植移植移植2.2.体细胞核移植过程体细胞核移植过程（体细胞克隆动物）（体细胞克隆动物）原理：动物细胞核具有全能
16、性原理：动物细胞核具有全能性显微显微操作操作第十八张，PPT共二十四页，创作于2022年6月3.3.体细胞核移植技术的应用前景：体细胞核移植技术的应用前景：1.1.加速家畜遗传改良的进加速家畜遗传改良的进程程2.2.保护濒危物种保护濒危物种3.3.生产医用蛋白质及组生产医用蛋白质及组织器官的移植织器官的移植4.4.了解胚胎发育和衰老了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病发展过程和治疗疾病第十九张，PPT共二十四页，创作于2022年6月4 4、体细胞核移植技术存在的问题、体细胞核移植技术存在的问题 P173（1 1）成功率非常低）成功率非常低（2 2）克隆动
17、物以表现早衰、生理缺陷等健康问题）克隆动物以表现早衰、生理缺陷等健康问题 成功率低，绝大多数克隆动物存在健康问题并表成功率低，绝大多数克隆动物存在健康问题并表现出遗传和生理缺陷：如体型过大，异常肥胖，发育现出遗传和生理缺陷：如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。困难，脏器缺陷，免疫失调等。第二十张，PPT共二十四页，创作于2022年6月在动物细胞培养的有关叙述中正确的是（）A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等C.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理D
18、第二十一张，PPT共二十四页，创作于2022年6月治疗性克隆有希望最终解决供体器官的短缺和器治疗性克隆有希望最终解决供体器官的短缺和器官移植出现的排异反应。下图表示治疗性克隆的官移植出现的排异反应。下图表示治疗性克隆的过程，下列说法正确的是过程，下列说法正确的是第二十二张，PPT共二十四页，创作于2022年6月A上述过程利用了动物体细胞融合技术上述过程利用了动物体细胞融合技术 B上述过程实现了动物细胞的全能性上述过程实现了动物细胞的全能性C胚胎干细胞的不断增殖和分化潜能保证胚胎干细胞的不断增殖和分化潜能保证过程的进行过程的进行D、过程不进行过程不进行DNA复制和蛋白质合成复制和蛋白质合成AC第二十三张，PPT共二十四页，创作于2022年6月感感谢谢大大家家观观看看第二十四张，PPT共二十四页，创作于2022年6月10/16/2022