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1、第七营养代谢病检测技术第1页，此课件共67页哦本章本章本章本章目的目的目的目的：本章要求了解营养代谢病检测技术的基本知识。本章要求了解营养代谢病检测技术的基本知识。本章要求了解营养代谢病检测技术的基本知识。本章要求了解营养代谢病检测技术的基本知识。本章本章本章本章重点重点重点重点：、血糖、蛋白质和脂肪代谢及微量元素测定。、血糖、蛋白质和脂肪代谢及微量元素测定。、血糖、蛋白质和脂肪代谢及微量元素测定。、血糖、蛋白质和脂肪代谢及微量元素测定。、消化吸收代谢过程、消化吸收代谢过程、消化吸收代谢过程、消化吸收代谢过程本章本章本章本章难点难点难点难点：维生素测定。维生素测定。维生素测定。维生素测定。第2
2、页，此课件共67页哦第一节蛋白质检测第一节蛋白质检测第一节蛋白质检测第一节蛋白质检测第二节血糖检测第二节血糖检测第二节血糖检测第二节血糖检测第三节脂肪代谢的检测第三节脂肪代谢的检测第三节脂肪代谢的检测第三节脂肪代谢的检测第四节微量元素检测第四节微量元素检测第五节维生素营养的检测第五节维生素营养的检测主要内容主要内容第3页，此课件共67页哦一、血清总蛋白测定一、血清总蛋白测定二、血清白蛋白测定二、血清白蛋白测定三、血清蛋白电泳三、血清蛋白电泳四、血红蛋白测定四、血红蛋白测定五、肌红蛋白测定五、肌红蛋白测定五、肌红蛋白测定五、肌红蛋白测定第一节蛋白质检测第一节蛋白质检测（Ketosis in da
3、iry cowsKetosis in dairy cows）第4页，此课件共67页哦一、血清总蛋白测定一、血清总蛋白测定uu原理原理原理原理：碱性溶液中蛋白质分子的肽键与铜离子作用，形成紫红色的碱性溶液中蛋白质分子的肽键与铜离子作用，形成紫红色的碱性溶液中蛋白质分子的肽键与铜离子作用，形成紫红色的碱性溶液中蛋白质分子的肽键与铜离子作用，形成紫红色的复合物。这与两个尿素分子缩合生成缩二脲，在碱性条件下与复合物。这与两个尿素分子缩合生成缩二脲，在碱性条件下与复合物。这与两个尿素分子缩合生成缩二脲，在碱性条件下与复合物。这与两个尿素分子缩合生成缩二脲，在碱性条件下与铜离子作用形成紫红色反应相似，故称
4、为铜离子作用形成紫红色反应相似，故称为铜离子作用形成紫红色反应相似，故称为铜离子作用形成紫红色反应相似，故称为双缩脲反应双缩脲反应双缩脲反应双缩脲反应。第5页，此课件共67页哦一、血清总蛋白测定一、血清总蛋白测定uu试剂试剂试剂试剂：6mol/L6mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液：溶解：溶解：溶解：溶解120g120g氢氧化钠于去离子水中，稀释至氢氧化钠于去离子水中，稀释至氢氧化钠于去离子水中，稀释至氢氧化钠于去离子水中，稀释至500ml500ml，置聚乙烯瓶内盖紧保存。，置聚乙烯瓶内盖紧保存。，置聚乙烯瓶内盖紧保存。，置聚乙烯瓶内盖紧保存。双缩脲试剂双缩脲试剂双缩脲
5、试剂双缩脲试剂：称：称：称：称3 g3 g CuSO CuSO4 45H5H2 2OO和和和和9g9g酒石酸钾钠酒石酸钾钠酒石酸钾钠酒石酸钾钠（KNaCKNaC4 4HH4 4OO4 44H4H2 2OO），先分别溶于蒸馏水，加入碘化钾），先分别溶于蒸馏水，加入碘化钾），先分别溶于蒸馏水，加入碘化钾），先分别溶于蒸馏水，加入碘化钾5g5g，待，待，待，待完全溶解后混合，加入完全溶解后混合，加入完全溶解后混合，加入完全溶解后混合，加入6mol/L6mol/L氢氧化钠氢氧化钠氢氧化钠氢氧化钠100ml100ml，最后以蒸馏水加至，最后以蒸馏水加至，最后以蒸馏水加至，最后以蒸馏水加至1L1L置聚乙烯
6、瓶内盖紧贮存。置聚乙烯瓶内盖紧贮存。置聚乙烯瓶内盖紧贮存。置聚乙烯瓶内盖紧贮存。蛋白标准液蛋白标准液蛋白标准液蛋白标准液：收集混合血清，用凯氏定氮法测定蛋白质含量，：收集混合血清，用凯氏定氮法测定蛋白质含量，：收集混合血清，用凯氏定氮法测定蛋白质含量，：收集混合血清，用凯氏定氮法测定蛋白质含量，亦可用定值参考血清或标准蛋白作标准。亦可用定值参考血清或标准蛋白作标准。亦可用定值参考血清或标准蛋白作标准。亦可用定值参考血清或标准蛋白作标准。第6页，此课件共67页哦一、血清总蛋白测定一、血清总蛋白测定uu操作操作操作操作：取三支试管按下表加入式样，混匀取三支试管按下表加入式样，混匀取三支试管按下表加
7、入式样，混匀取三支试管按下表加入式样，混匀 37 37摄氏度水浴放置十分钟，摄氏度水浴放置十分钟，摄氏度水浴放置十分钟，摄氏度水浴放置十分钟，以空白管调零，以空白管调零，以空白管调零，以空白管调零，540nm540nm波长测定吸光度波长测定吸光度波长测定吸光度波长测定吸光度。项目项目项目项目 测定管测定管测定管测定管 标准管标准管标准管标准管 空白管空白管空白管空白管 血清血清血清血清/ml 1.00 /ml 1.00 蛋白质标准液蛋白质标准液蛋白质标准液蛋白质标准液/ml /ml 1.00 1.00 理生盐水理生盐水理生盐水理生盐水/ml /ml 1.00 1.00 双缩脲试剂双缩脲试剂双缩
8、脲试剂双缩脲试剂/ml 5.00 5.00 5.00 /ml 5.00 5.00 5.00 第7页，此课件共67页哦二、血清白蛋白测定二、血清白蛋白测定uu原理原理原理原理：在：在：在：在pH=4.2pH=4.2环境中，带正电荷的白蛋白（环境中，带正电荷的白蛋白（环境中，带正电荷的白蛋白（环境中，带正电荷的白蛋白（pI=4.9pI=4.9）可以与阴离）可以与阴离）可以与阴离）可以与阴离子染料溴甲酚绿（子染料溴甲酚绿（子染料溴甲酚绿（子染料溴甲酚绿（BCGBCG）结合，溶液由黄变蓝，）结合，溶液由黄变蓝，）结合，溶液由黄变蓝，）结合，溶液由黄变蓝，在波长在波长在波长在波长630nm630nm具具
9、具具有最大光吸收，并与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白有最大光吸收，并与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白有最大光吸收，并与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白有最大光吸收，并与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清中白蛋白含量。标准比较，可求得血清中白蛋白含量。标准比较，可求得血清中白蛋白含量。标准比较，可求得血清中白蛋白含量。第8页，此课件共67页哦二、血清白蛋白测定二、血清白蛋白测定uu试剂试剂试剂试剂：uu溴甲酚绿（溴甲酚绿（溴甲酚绿（溴甲酚绿（BCGBCG）试剂）试剂）试剂）试剂：于：于：于：于1L1L容量瓶中盛蒸镏水约容量瓶中盛蒸镏水约容量瓶中盛蒸镏水约容量
10、瓶中盛蒸镏水约400ml400ml，加，加，加，加琥珀酸缓冲贮存液琥珀酸缓冲贮存液琥珀酸缓冲贮存液琥珀酸缓冲贮存液100ml100ml，用吸管准确吸取，用吸管准确吸取，用吸管准确吸取，用吸管准确吸取BCGBCG贮存液贮存液贮存液贮存液8ml8ml加加加加入，并将内壁沾的染料冲洗入液体中，加叠氮钠存液入，并将内壁沾的染料冲洗入液体中，加叠氮钠存液入，并将内壁沾的染料冲洗入液体中，加叠氮钠存液入，并将内壁沾的染料冲洗入液体中，加叠氮钠存液2.5 ml2.5 ml，聚氧化乙烯月桂醚贮存液聚氧化乙烯月桂醚贮存液聚氧化乙烯月桂醚贮存液聚氧化乙烯月桂醚贮存液2.5ml2.5ml，最后用蒸馏水稀释至刻度，配
11、，最后用蒸馏水稀释至刻度，配，最后用蒸馏水稀释至刻度，配，最后用蒸馏水稀释至刻度，配好的好的好的好的BCGBCG试剂试剂试剂试剂pHpH应为应为应为应为4.15 0.054.15 0.05。uu白蛋白标准液白蛋白标准液白蛋白标准液白蛋白标准液：40g/L40g/L，也可用定值参考血清。均需置冰箱保存。，也可用定值参考血清。均需置冰箱保存。，也可用定值参考血清。均需置冰箱保存。，也可用定值参考血清。均需置冰箱保存。第9页，此课件共67页哦二、血清白蛋白测定二、血清白蛋白测定uu操作操作操作操作：测定管（测定管（测定管（测定管（U U）标准管（标准管（标准管（标准管（S S）空白管（空白管（空白管
12、（空白管（B B）待检血清待检血清待检血清待检血清 0.02 -0.02 -白蛋白标准液白蛋白标准液白蛋白标准液白蛋白标准液 -0.02 -0.02 -蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水 -0.02-0.02BCGBCG试剂试剂试剂试剂 4.0 4.0 4.04.0 4.0 4.0 混匀，立即以波长混匀，立即以波长混匀，立即以波长混匀，立即以波长630nm630nm空白管调零，读取各管吸光度。空白管调零，读取各管吸光度。空白管调零，读取各管吸光度。空白管调零，读取各管吸光度。血清白蛋白（血清白蛋白（血清白蛋白（血清白蛋白（g/Lg/L）=(Odu/Ods)=(Odu/Ods)标准白蛋白浓度（标准白蛋白浓
13、度（标准白蛋白浓度（标准白蛋白浓度（g/Lg/L）同时测定血清总蛋白浓度，减去血清白蛋白浓度，可得血清球同时测定血清总蛋白浓度，减去血清白蛋白浓度，可得血清球同时测定血清总蛋白浓度，减去血清白蛋白浓度，可得血清球同时测定血清总蛋白浓度，减去血清白蛋白浓度，可得血清球蛋白浓度，并可计算血清白蛋白蛋白浓度，并可计算血清白蛋白蛋白浓度，并可计算血清白蛋白蛋白浓度，并可计算血清白蛋白/球蛋白比值。球蛋白比值。球蛋白比值。球蛋白比值。第10页，此课件共67页哦三、血清蛋白电泳三、血清蛋白电泳uu 电泳：带电的胶粒或大分子在外加电场中，向带相反电荷的电极作电泳：带电的胶粒或大分子在外加电场中，向带相反电荷
14、的电极作电泳：带电的胶粒或大分子在外加电场中，向带相反电荷的电极作电泳：带电的胶粒或大分子在外加电场中，向带相反电荷的电极作定向移动的现象称为电泳。定向移动的现象称为电泳。定向移动的现象称为电泳。定向移动的现象称为电泳。应用应用应用应用1.1.分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等2.2.分析某种物质的纯度及分子量分析某种物质的纯度及分子量分析某种物质的纯度及分子量分析某种物质的纯度及分子量第11页，此课件共67页哦电泳的基本原理电泳的基本原理uu 电场中推动带电质点运动的力（电场中推动带
15、电质点运动的力（电场中推动带电质点运动的力（电场中推动带电质点运动的力（F F）等于质点所带净电荷量（）等于质点所带净电荷量（）等于质点所带净电荷量（）等于质点所带净电荷量（QQ）与电场强度（）与电场强度（）与电场强度（）与电场强度（E E）的乘积。）的乘积。）的乘积。）的乘积。F FQE QE uu 质点前移受阻力（质点前移受阻力（质点前移受阻力（质点前移受阻力（F F）影响，球形质点服从）影响，球形质点服从）影响，球形质点服从）影响，球形质点服从StokeStoke定律，即：定律，即：定律，即：定律，即：FF6r6r（r r半径，半径，半径，半径，介质粘度，介质粘度，介质粘度，介质粘度，质
16、点移速）质点移速）质点移速）质点移速）uu质点在电场中稳定运动时：质点在电场中稳定运动时：质点在电场中稳定运动时：质点在电场中稳定运动时：F FFF即：即：即：即：QEQE6r6ruu 同电泳条件下不同物质因其分子大小（同电泳条件下不同物质因其分子大小（同电泳条件下不同物质因其分子大小（同电泳条件下不同物质因其分子大小（r r）和带电量（）和带电量（）和带电量（）和带电量（QQ）差异）差异）差异）差异而有不同泳动速度，因此，一定时间可分离。而有不同泳动速度，因此，一定时间可分离。而有不同泳动速度，因此，一定时间可分离。而有不同泳动速度，因此，一定时间可分离。uu 按其泳动速度从正极端起按其泳动
17、速度从正极端起按其泳动速度从正极端起按其泳动速度从正极端起即速度最快）依次为白蛋白、即速度最快）依次为白蛋白、即速度最快）依次为白蛋白、即速度最快）依次为白蛋白、-球蛋球蛋球蛋球蛋白、白、白、白、-球蛋白和球蛋白和球蛋白和球蛋白和-球蛋白等条带，有的动物球蛋白等条带，有的动物球蛋白等条带，有的动物球蛋白等条带，有的动物-球蛋白和球蛋白和球蛋白和球蛋白和-球蛋白可球蛋白可球蛋白可球蛋白可分为两个条带。分为两个条带。分为两个条带。分为两个条带。第12页，此课件共67页哦+白蛋白白蛋白(A)12uu血清蛋白的血清蛋白的血清蛋白的血清蛋白的pIpI大多在大多在大多在大多在7.57.5以下，在以下，在以
18、下，在以下，在pH8.6pH8.6的巴比妥缓冲液中以负离的巴比妥缓冲液中以负离的巴比妥缓冲液中以负离的巴比妥缓冲液中以负离子形式存在，并且蛋白质的分子量、立体构象、等电点以及形状子形式存在，并且蛋白质的分子量、立体构象、等电点以及形状子形式存在，并且蛋白质的分子量、立体构象、等电点以及形状子形式存在，并且蛋白质的分子量、立体构象、等电点以及形状也有差异，在电场中迁移速度不同，可以在醋酸纤维薄膜上分离也有差异，在电场中迁移速度不同，可以在醋酸纤维薄膜上分离也有差异，在电场中迁移速度不同，可以在醋酸纤维薄膜上分离也有差异，在电场中迁移速度不同，可以在醋酸纤维薄膜上分离成成成成A A、11、22、和
19、和和和 五条区带。五条区带。五条区带。五条区带。蛋白名称蛋白名称等电点等电点分子量分子量白蛋白白蛋白4.88690005.061：200002：300005.1290000-1500006.85-7.50156000-300000第13页，此课件共67页哦uu醋酸纤维素（二乙酸纤维素）薄膜具有匀一的泡沫状结醋酸纤维素（二乙酸纤维素）薄膜具有匀一的泡沫状结醋酸纤维素（二乙酸纤维素）薄膜具有匀一的泡沫状结醋酸纤维素（二乙酸纤维素）薄膜具有匀一的泡沫状结构，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的支构，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的支构，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的
20、支构，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的支持物，具有用样量少，分离清晰，无吸附作用。目前可用持物，具有用样量少，分离清晰，无吸附作用。目前可用持物，具有用样量少，分离清晰，无吸附作用。目前可用持物，具有用样量少，分离清晰，无吸附作用。目前可用于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方于血清蛋白、脂蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。面。面。面。uu醋酸纤维素薄膜经醋酸纤维素薄膜经醋酸纤维素薄膜经醋酸纤维素薄膜经1,41,4二氧六环、透明液或液体石蜡处理二氧六环、透明液或液体
21、石蜡处理二氧六环、透明液或液体石蜡处理二氧六环、透明液或液体石蜡处理即透明，因而可得背景为无色的电泳图谱。即透明，因而可得背景为无色的电泳图谱。即透明，因而可得背景为无色的电泳图谱。即透明，因而可得背景为无色的电泳图谱。醋酸纤维素薄膜的特性醋酸纤维素薄膜的特性醋酸纤维素薄膜的特性醋酸纤维素薄膜的特性第14页，此课件共67页哦实验操作及注意事项实验操作及注意事项uu膜的预处理：将薄膜切成膜的预处理：将薄膜切成膜的预处理：将薄膜切成膜的预处理：将薄膜切成2.58cm2.58cm，无光泽面向下，漂浮于巴比妥，无光泽面向下，漂浮于巴比妥，无光泽面向下，漂浮于巴比妥，无光泽面向下，漂浮于巴比妥缓冲液面上
22、，膜条自然浸湿下沉。取充分浸透的膜条，滤纸吸取多缓冲液面上，膜条自然浸湿下沉。取充分浸透的膜条，滤纸吸取多缓冲液面上，膜条自然浸湿下沉。取充分浸透的膜条，滤纸吸取多缓冲液面上，膜条自然浸湿下沉。取充分浸透的膜条，滤纸吸取多余的缓冲液，不要弄太干。余的缓冲液，不要弄太干。余的缓冲液，不要弄太干。余的缓冲液，不要弄太干。uu加样：光面用铅笔标注，无光泽面距一端加样：光面用铅笔标注，无光泽面距一端加样：光面用铅笔标注，无光泽面距一端加样：光面用铅笔标注，无光泽面距一端1.5cm1.5cm处用点样器蘸处用点样器蘸处用点样器蘸处用点样器蘸取新鲜血清点样（不能看见有液滴形成），待血清进入膜内，取新鲜血清点
23、样（不能看见有液滴形成），待血清进入膜内，取新鲜血清点样（不能看见有液滴形成），待血清进入膜内，取新鲜血清点样（不能看见有液滴形成），待血清进入膜内，移开点样器。移开点样器。移开点样器。移开点样器。uu电泳：放置于电泳槽架时，无光泽面向下，点样端置于负电泳：放置于电泳槽架时，无光泽面向下，点样端置于负电泳：放置于电泳槽架时，无光泽面向下，点样端置于负电泳：放置于电泳槽架时，无光泽面向下，点样端置于负极，膜与电极紧密接触，不能留有气泡，平衡极，膜与电极紧密接触，不能留有气泡，平衡极，膜与电极紧密接触，不能留有气泡，平衡极，膜与电极紧密接触，不能留有气泡，平衡5 5分钟，通电分钟，通电分钟，通电分
24、钟，通电1h1h。第15页，此课件共67页哦uu染色染色染色染色：通电完毕，镊子取出，浸于氨基黑的染色液中：通电完毕，镊子取出，浸于氨基黑的染色液中：通电完毕，镊子取出，浸于氨基黑的染色液中：通电完毕，镊子取出，浸于氨基黑的染色液中5 5分钟，分钟，分钟，分钟，立即放入盛有漂洗液的培养皿中，反复漂洗数次，直至背景漂净，立即放入盛有漂洗液的培养皿中，反复漂洗数次，直至背景漂净，立即放入盛有漂洗液的培养皿中，反复漂洗数次，直至背景漂净，立即放入盛有漂洗液的培养皿中，反复漂洗数次，直至背景漂净，滤纸吸干，不要太干。滤纸吸干，不要太干。滤纸吸干，不要太干。滤纸吸干，不要太干。uu定量定量定量定量：取取
25、取取6 6支试管，编号，分别用吸管吸取支试管，编号，分别用吸管吸取支试管，编号，分别用吸管吸取支试管，编号，分别用吸管吸取0.4N NaOH 4ml0.4N NaOH 4ml；剪下膜上各蛋白质带及另一空白部位剪一平均大小的薄膜条（空剪下膜上各蛋白质带及另一空白部位剪一平均大小的薄膜条（空剪下膜上各蛋白质带及另一空白部位剪一平均大小的薄膜条（空剪下膜上各蛋白质带及另一空白部位剪一平均大小的薄膜条（空白带的宽度以最窄的条带为准）。将各条分别浸于上述试管内（注白带的宽度以最窄的条带为准）。将各条分别浸于上述试管内（注白带的宽度以最窄的条带为准）。将各条分别浸于上述试管内（注白带的宽度以最窄的条带为准
26、）。将各条分别浸于上述试管内（注意管与蛋白带的顺序），用力摇动，使蓝色洗出，约半小时；意管与蛋白带的顺序），用力摇动，使蓝色洗出，约半小时；意管与蛋白带的顺序），用力摇动，使蓝色洗出，约半小时；意管与蛋白带的顺序），用力摇动，使蓝色洗出，约半小时；用分光光度计进行比色，波长用分光光度计进行比色，波长用分光光度计进行比色，波长用分光光度计进行比色，波长650nm650nm，以空白薄膜条洗出液为空白对，以空白薄膜条洗出液为空白对，以空白薄膜条洗出液为空白对，以空白薄膜条洗出液为空白对照，读取照，读取照，读取照，读取A A、11、22、球蛋白各管的光密度。球蛋白各管的光密度。球蛋白各管的光密度。球蛋
27、白各管的光密度。第16页，此课件共67页哦结果计算：结果计算：结果计算：结果计算：光密度总和光密度总和光密度总和光密度总和 T T A+A+1 1+2 2+白蛋白白蛋白白蛋白白蛋白A/T100%A/T100%1 1球蛋白球蛋白球蛋白球蛋白 1 1/T 100%/T 100%2 2球蛋白球蛋白球蛋白球蛋白 2 2/T 100%/T 100%球蛋白球蛋白球蛋白球蛋白 /T 100%/T 100%球蛋白球蛋白球蛋白球蛋白 /T 100%/T 100%第17页，此课件共67页哦【附注附注附注附注】uu电泳缓冲液要使两侧槽的液面保持水平，以免虹吸现象影响泳电泳缓冲液要使两侧槽的液面保持水平，以免虹吸现象
28、影响泳电泳缓冲液要使两侧槽的液面保持水平，以免虹吸现象影响泳电泳缓冲液要使两侧槽的液面保持水平，以免虹吸现象影响泳动速度。动速度。动速度。动速度。uu每次电泳时应更换电泳槽的正负极，以保持两侧缓冲液离子、每次电泳时应更换电泳槽的正负极，以保持两侧缓冲液离子、每次电泳时应更换电泳槽的正负极，以保持两侧缓冲液离子、每次电泳时应更换电泳槽的正负极，以保持两侧缓冲液离子、pHpH一一一一致。致。致。致。uu使用一段时间后电泳缓冲液应废弃换新。使用一段时间后电泳缓冲液应废弃换新。使用一段时间后电泳缓冲液应废弃换新。使用一段时间后电泳缓冲液应废弃换新。uu关闭电泳仪电源后才能从电泳槽上取醋纤膜，以免电击。
29、关闭电泳仪电源后才能从电泳槽上取醋纤膜，以免电击。关闭电泳仪电源后才能从电泳槽上取醋纤膜，以免电击。关闭电泳仪电源后才能从电泳槽上取醋纤膜，以免电击。第18页，此课件共67页哦 表表表表 动物血清蛋白质参考值动物血清蛋白质参考值动物血清蛋白质参考值动物血清蛋白质参考值 （g/Lg/L）动物动物动物动物 总蛋白总蛋白总蛋白总蛋白 白蛋白白蛋白白蛋白白蛋白 球蛋白球蛋白球蛋白球蛋白 白蛋白白蛋白白蛋白白蛋白/球蛋白球蛋白球蛋白球蛋白牛牛牛牛 676775 2575 2535 3035 3035 0.835 0.80.90.9马马马马 505079 2579 2535 2635 2640 0.640
30、 0.61.51.5猪猪猪猪 797989 1889 1833 5333 5364 0.464 0.40.50.5绵羊绵羊绵羊绵羊 606079 2479 2433 3533 3557 0.457 0.40.80.8山羊山羊山羊山羊 646470 2770 2739 2739 2741 0.641 0.61.31.3犬犬犬犬 535378 2378 2343 2743 2744 0.644 0.61.11.1猫猫猫猫 585878 1978 1938 2638 2651 0.551 0.51.21.2第19页，此课件共67页哦血清蛋白浓度增髙（髙蛋白血症）血清蛋白浓度增髙（髙蛋白血症）uuTP
31、TP增加增加增加增加：脱水引起，非绝对量升髙。红细胞压积容量（：脱水引起，非绝对量升髙。红细胞压积容量（：脱水引起，非绝对量升髙。红细胞压积容量（：脱水引起，非绝对量升髙。红细胞压积容量（PCV)PCV)增增增增髙，白蛋白蛋白比值（髙，白蛋白蛋白比值（髙，白蛋白蛋白比值（髙，白蛋白蛋白比值（A/GA/G）正常。）正常。）正常。）正常。uu白蛋白增髙白蛋白增髙白蛋白增髙白蛋白增髙：单纯白蛋白升髙很少。：单纯白蛋白升髙很少。：单纯白蛋白升髙很少。：单纯白蛋白升髙很少。uu球蛋白增加球蛋白增加球蛋白增加球蛋白增加：-球蛋白（肝球蛋白、球蛋白（肝球蛋白、球蛋白（肝球蛋白、球蛋白（肝球蛋白、2-2-巨球
32、蛋白、巨球蛋白、巨球蛋白、巨球蛋白、1-1-抗胰蛋白酶等）：抗胰蛋白酶等）：抗胰蛋白酶等）：抗胰蛋白酶等）：组组组组织损伤或炎症织损伤或炎症织损伤或炎症织损伤或炎症。-球蛋白（转铁蛋白、球蛋白（转铁蛋白、球蛋白（转铁蛋白、球蛋白（转铁蛋白、-脂蛋白、补体脂蛋白、补体脂蛋白、补体脂蛋白、补体-3-3及免疫球蛋白）：及免疫球蛋白）：及免疫球蛋白）：及免疫球蛋白）：活活活活动性肝脏疾病及圆线虫病动性肝脏疾病及圆线虫病动性肝脏疾病及圆线虫病动性肝脏疾病及圆线虫病。-球蛋白：球蛋白：球蛋白：球蛋白：慢性炎性、免疫性疾病，淋巴瘤、骨髓瘤、多克隆和慢性炎性、免疫性疾病，淋巴瘤、骨髓瘤、多克隆和慢性炎性、免疫
33、性疾病，淋巴瘤、骨髓瘤、多克隆和慢性炎性、免疫性疾病，淋巴瘤、骨髓瘤、多克隆和肝硬化肝硬化肝硬化肝硬化等，等，等，等，免疫接种免疫接种免疫接种免疫接种。第20页，此课件共67页哦血清蛋白浓度降低（低蛋白血症）血清蛋白浓度降低（低蛋白血症）uu血浆水份增加，如静注过多低渗溶液。血浆水份增加，如静注过多低渗溶液。血浆水份增加，如静注过多低渗溶液。血浆水份增加，如静注过多低渗溶液。uu白蛋白降低白蛋白降低白蛋白降低白蛋白降低：白蛋白：白蛋白：白蛋白：白蛋白/蛋白比值变小。蛋白比值变小。蛋白比值变小。蛋白比值变小。营养不良和消耗增加营养不良和消耗增加营养不良和消耗增加营养不良和消耗增加，饲料蛋白质长期
34、不足或慢性肠道，饲料蛋白质长期不足或慢性肠道，饲料蛋白质长期不足或慢性肠道，饲料蛋白质长期不足或慢性肠道疾病所引起吸收不良，或因长期患消耗性疾病。疾病所引起吸收不良，或因长期患消耗性疾病。疾病所引起吸收不良，或因长期患消耗性疾病。疾病所引起吸收不良，或因长期患消耗性疾病。合成障碍合成障碍合成障碍合成障碍：慢性肝脏疾病、肝脏功能严重损害。：慢性肝脏疾病、肝脏功能严重损害。：慢性肝脏疾病、肝脏功能严重损害。：慢性肝脏疾病、肝脏功能严重损害。蛋白质丢失蛋白质丢失蛋白质丢失蛋白质丢失：大出血，烧伤，肾病综合征。：大出血，烧伤，肾病综合征。：大出血，烧伤，肾病综合征。：大出血，烧伤，肾病综合征。妊娠期对
35、蛋白质需要增加。妊娠期对蛋白质需要增加。妊娠期对蛋白质需要增加。妊娠期对蛋白质需要增加。uu球蛋白降低球蛋白降低球蛋白降低球蛋白降低：喂初乳不足或未喂初乳；肾上腺皮质激素和其他免：喂初乳不足或未喂初乳；肾上腺皮质激素和其他免：喂初乳不足或未喂初乳；肾上腺皮质激素和其他免：喂初乳不足或未喂初乳；肾上腺皮质激素和其他免疫抑制剂；免疫缺陷性疾病。疫抑制剂；免疫缺陷性疾病。疫抑制剂；免疫缺陷性疾病。疫抑制剂；免疫缺陷性疾病。第21页，此课件共67页哦四、血红蛋白测定四、血红蛋白测定（沙利氏比色法）（沙利氏比色法）uu原理原理原理原理表面活性剂表面活性剂表面活性剂表面活性剂红细胞膜红细胞膜红细胞膜红细胞
36、膜血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白溶解溶解溶解溶解高铁血红蛋白高铁血红蛋白高铁血红蛋白高铁血红蛋白高铁氰化钾氧化高铁氰化钾氧化高铁氰化钾氧化高铁氰化钾氧化氰离子氰离子氰离子氰离子棕红色氰化高铁血红蛋白棕红色氰化高铁血红蛋白棕红色氰化高铁血红蛋白棕红色氰化高铁血红蛋白540nm540nm比色比色比色比色血红蛋白浓度血红蛋白浓度血红蛋白浓度血红蛋白浓度第22页，此课件共67页哦四、血红蛋白测定四、血红蛋白测定（沙利氏比色法）（沙利氏比色法）uu试剂试剂试剂试剂uu转化液：氰化钾转化液：氰化钾转化液：氰化钾转化液：氰化钾50mg50mg，高铁氰化钾，高铁氰化钾，高铁氰化钾，高铁氰化钾200mg200
37、mg，无水磷酸二氢钠，无水磷酸二氢钠，无水磷酸二氢钠，无水磷酸二氢钠114mg114mg，Triton X-100 1.0mlTriton X-100 1.0ml，蒸镏水，蒸镏水，蒸镏水，蒸镏水1000ml1000ml。溶解混勾后用滤纸过滤，。溶解混勾后用滤纸过滤，。溶解混勾后用滤纸过滤，。溶解混勾后用滤纸过滤，置棕色瓶中，保存于冷暗处，但勿使结冰，可保存数月。置棕色瓶中，保存于冷暗处，但勿使结冰，可保存数月。置棕色瓶中，保存于冷暗处，但勿使结冰，可保存数月。置棕色瓶中，保存于冷暗处，但勿使结冰，可保存数月。uu该液应透明、淡黄色，该液应透明、淡黄色，该液应透明、淡黄色，该液应透明、淡黄色，p
38、H7.0pH7.07.47.4，以蒸馏水作空白，在，以蒸馏水作空白，在，以蒸馏水作空白，在，以蒸馏水作空白，在540nm540nm处比处比处比处比色，吸光度应小于色，吸光度应小于色，吸光度应小于色，吸光度应小于0.0010.001。uu若浑浊、变绿则应废弃。若浑浊、变绿则应废弃。若浑浊、变绿则应废弃。若浑浊、变绿则应废弃。第23页，此课件共67页哦四、血红蛋白测定四、血红蛋白测定（沙利氏比色法）（沙利氏比色法）uu操作操作操作操作取血取血取血取血20l20l加加加加5ml5ml血红蛋白转化液，充分混匀，静置血红蛋白转化液，充分混匀，静置血红蛋白转化液，充分混匀，静置血红蛋白转化液，充分混匀，静
39、置5min5min。用波长用波长用波长用波长540nm540nm，光径，光径，光径，光径1cm1cm，转化液或水作空白，测吸光度，转化液或水作空白，测吸光度，转化液或水作空白，测吸光度，转化液或水作空白，测吸光度uu计算计算计算计算血红蛋白（血红蛋白（血红蛋白（血红蛋白（g/L)=g/L)=测定管吸光度测定管吸光度测定管吸光度测定管吸光度(64458 44000)251(64458 44000)251式中：式中：式中：式中：6445864458血红蛋白平均分子量，血红蛋白平均分子量，血红蛋白平均分子量，血红蛋白平均分子量，4400044000血红蛋白摩尔吸光度，血红蛋白摩尔吸光度，血红蛋白摩尔
40、吸光度，血红蛋白摩尔吸光度，251251为稀释倍数。为稀释倍数。为稀释倍数。为稀释倍数。因品种、年齢和环境血红蛋白有差异，参考值因品种、年齢和环境血红蛋白有差异，参考值因品种、年齢和环境血红蛋白有差异，参考值因品种、年齢和环境血红蛋白有差异，参考值90120g/L90120g/L第24页，此课件共67页哦四、血红蛋白测定四、血红蛋白测定（沙利氏比色法）（沙利氏比色法）uu附注附注附注附注血液用血液用血液用血液用EDTAEDTA二钠抗凝，不可用肝素钠抗凝。二钠抗凝，不可用肝素钠抗凝。二钠抗凝，不可用肝素钠抗凝。二钠抗凝，不可用肝素钠抗凝。氰化钾为剧毒化学品，在配置和保存过程中应注意安全。氰化钾为
41、剧毒化学品，在配置和保存过程中应注意安全。氰化钾为剧毒化学品，在配置和保存过程中应注意安全。氰化钾为剧毒化学品，在配置和保存过程中应注意安全。测定废液应加次氯酸钠测定废液应加次氯酸钠测定废液应加次氯酸钠测定废液应加次氯酸钠35ml/L)35ml/L)混匀敞开过夜，使氰离子氧化混匀敞开过夜，使氰离子氧化混匀敞开过夜，使氰离子氧化混匀敞开过夜，使氰离子氧化成成成成COCO2 2和和和和N N2 2挥发后，再排入下水道中。挥发后，再排入下水道中。挥发后，再排入下水道中。挥发后，再排入下水道中。第25页，此课件共67页哦四、血红蛋白测定四、血红蛋白测定（沙利氏比色法）（沙利氏比色法）uu临床意义临床意
42、义临床意义临床意义血红蛋白占红细胞血红蛋白占红细胞血红蛋白占红细胞血红蛋白占红细胞32%36%32%36%，或干重，或干重，或干重，或干重96%96%。在某些类型贫血时。在某些类型贫血时。在某些类型贫血时。在某些类型贫血时（如低色素贫血）红细胞与血红蛋白降低程度不一致，血红蛋（如低色素贫血）红细胞与血红蛋白降低程度不一致，血红蛋（如低色素贫血）红细胞与血红蛋白降低程度不一致，血红蛋（如低色素贫血）红细胞与血红蛋白降低程度不一致，血红蛋白降低比红细胞明显。同时测定红细胞数与血红蛋白，对诊断白降低比红细胞明显。同时测定红细胞数与血红蛋白，对诊断白降低比红细胞明显。同时测定红细胞数与血红蛋白，对诊断
43、白降低比红细胞明显。同时测定红细胞数与血红蛋白，对诊断有实际意义。有实际意义。有实际意义。有实际意义。血红蛋白增多血红蛋白增多血红蛋白增多血红蛋白增多：如血浆中水分丢失；红细胞增生活跃。：如血浆中水分丢失；红细胞增生活跃。：如血浆中水分丢失；红细胞增生活跃。：如血浆中水分丢失；红细胞增生活跃。血红蛋白减少血红蛋白减少血红蛋白减少血红蛋白减少：贫血性疾病；其中营养性贫血见于蛋白质缺：贫血性疾病；其中营养性贫血见于蛋白质缺：贫血性疾病；其中营养性贫血见于蛋白质缺：贫血性疾病；其中营养性贫血见于蛋白质缺乏，铜、铁、钴等微量元素缺乏，乏，铜、铁、钴等微量元素缺乏，乏，铜、铁、钴等微量元素缺乏，乏，铜、
44、铁、钴等微量元素缺乏，维生素维生素维生素维生素B B1 1、维生素、维生素、维生素、维生素B B2 2、维生、维生、维生、维生素素素素B B6 6、维生素、维生素、维生素、维生素B B1212、叶酸、烟酸缺乏等。、叶酸、烟酸缺乏等。、叶酸、烟酸缺乏等。、叶酸、烟酸缺乏等。第26页，此课件共67页哦五、肌红蛋白测定五、肌红蛋白测定uu 肌红蛋白（肌红蛋白（肌红蛋白（肌红蛋白（MbMb）：横紋肌色素成分，分子量：横紋肌色素成分，分子量：横紋肌色素成分，分子量：横紋肌色素成分，分子量170 kD170 kD。肌细。肌细。肌细。肌细胞内贮存和运输氧。肌肉组织损伤时胞内贮存和运输氧。肌肉组织损伤时胞内贮
45、存和运输氧。肌肉组织损伤时胞内贮存和运输氧。肌肉组织损伤时MbMb从肌细胞中释放入血，从肌细胞中释放入血，从肌细胞中释放入血，从肌细胞中释放入血，血清血清血清血清MbMb升高，大部分以游离状态存在，小部分与血清蛋白结合；升高，大部分以游离状态存在，小部分与血清蛋白结合；升高，大部分以游离状态存在，小部分与血清蛋白结合；升高，大部分以游离状态存在，小部分与血清蛋白结合；肌红蛋白血症和肌红蛋白尿肌红蛋白血症和肌红蛋白尿肌红蛋白血症和肌红蛋白尿肌红蛋白血症和肌红蛋白尿。uu测定方法测定方法测定方法测定方法：溶解度试验、比色法、放射免疫法、酶联免疫法、：溶解度试验、比色法、放射免疫法、酶联免疫法、：溶
46、解度试验、比色法、放射免疫法、酶联免疫法、：溶解度试验、比色法、放射免疫法、酶联免疫法、胶乳凝集试验、荧光免疫法、滴金免疫法等。胶乳凝集试验、荧光免疫法、滴金免疫法等。胶乳凝集试验、荧光免疫法、滴金免疫法等。胶乳凝集试验、荧光免疫法、滴金免疫法等。第27页，此课件共67页哦五、肌红蛋白测定五、肌红蛋白测定1 1、MbMb溶解度试验溶解度试验溶解度试验溶解度试验n n 原理原理原理原理uuMbMb分子含血红素基团，有氧化酶活性，用联苯胺或邻甲苯胺同过氧分子含血红素基团，有氧化酶活性，用联苯胺或邻甲苯胺同过氧分子含血红素基团，有氧化酶活性，用联苯胺或邻甲苯胺同过氧分子含血红素基团，有氧化酶活性，用
47、联苯胺或邻甲苯胺同过氧化氢反应呈色鉴定，化氢反应呈色鉴定，化氢反应呈色鉴定，化氢反应呈色鉴定，MbMb可溶解于可溶解于可溶解于可溶解于80%80%饱和度的硫酸胺溶液，而饱和度的硫酸胺溶液，而饱和度的硫酸胺溶液，而饱和度的硫酸胺溶液，而HbHb则则则则不能。不能。不能。不能。n n 试剂试剂试剂试剂uu1%1%邻甲苯胺甲醇溶液：难溶解但较稳定。邻甲苯胺甲醇溶液：难溶解但较稳定。邻甲苯胺甲醇溶液：难溶解但较稳定。邻甲苯胺甲醇溶液：难溶解但较稳定。uu过氧化氢醋酸溶液：冰醋酸过氧化氢醋酸溶液：冰醋酸过氧化氢醋酸溶液：冰醋酸过氧化氢醋酸溶液：冰醋酸1+3%1+3%过氧化氢过氧化氢过氧化氢过氧化氢2 2
48、。uu硫酸胺（化学纯）硫酸胺（化学纯）硫酸胺（化学纯）硫酸胺（化学纯）第28页，此课件共67页哦五、肌红蛋白测定五、肌红蛋白测定n n 操作操作操作操作uu先检尿液有无血红素存在，新鲜尿液先检尿液有无血红素存在，新鲜尿液先检尿液有无血红素存在，新鲜尿液先检尿液有无血红素存在，新鲜尿液4 4滴滴滴滴 +邻甲苯胺液邻甲苯胺液邻甲苯胺液邻甲苯胺液2 2滴，混滴，混滴，混滴，混合，合，合，合，+过氧化氢醋酸溶液过氧化氢醋酸溶液过氧化氢醋酸溶液过氧化氢醋酸溶液3 3滴，有滴，有滴，有滴，有蓝色或蓝绿色蓝色或蓝绿色蓝色或蓝绿色蓝色或蓝绿色。uu取过滤后透明尿液取过滤后透明尿液取过滤后透明尿液取过滤后透明尿
49、液5ml 5ml+硫酸胺硫酸胺硫酸胺硫酸胺2.8g2.8g，溶解混勾，静置，溶解混勾，静置，溶解混勾，静置，溶解混勾，静置5 min5 min，滤纸过滤。滤纸过滤。滤纸过滤。滤纸过滤。uu取滤液重复测试有无血红素色素存在，阳性表示含取滤液重复测试有无血红素色素存在，阳性表示含取滤液重复测试有无血红素色素存在，阳性表示含取滤液重复测试有无血红素色素存在，阳性表示含MbMb。阴性。阴性。阴性。阴性表示色素是表示色素是表示色素是表示色素是HbHb。第29页，此课件共67页哦五、肌红蛋白测定五、肌红蛋白测定2 2、反向胶乳凝集法、反向胶乳凝集法、反向胶乳凝集法、反向胶乳凝集法n n 原理原理原理原理u
50、uMbMb与用与用与用与用MbMb单克隆抗体致敏的羧化聚苯乙烯胶乳作用出现凝集者单克隆抗体致敏的羧化聚苯乙烯胶乳作用出现凝集者单克隆抗体致敏的羧化聚苯乙烯胶乳作用出现凝集者单克隆抗体致敏的羧化聚苯乙烯胶乳作用出现凝集者为为为为阳性阳性阳性阳性。n n 试剂试剂试剂试剂uu羧化聚苯乙烯粒子；羧化聚苯乙烯粒子；羧化聚苯乙烯粒子；羧化聚苯乙烯粒子；uupH 8.4pH 8.4，0.1mol/L0.1mol/L硼酸硼酸硼酸硼酸-甘氨酸缓冲液；甘氨酸缓冲液；甘氨酸缓冲液；甘氨酸缓冲液；uuMbMb单克隆抗体；单克隆抗体；单克隆抗体；单克隆抗体；uu牛血清白蛋白。牛血清白蛋白。牛血清白蛋白。牛血清白蛋白。