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1、关于血糖的测定及关于血糖的测定及激素对血糖浓度的激素对血糖浓度的影响影响第1页，讲稿共13张，创作于星期三一一 实验目的实验目的l掌握掌握GOD-POD法测定血糖的原理及方法。法测定血糖的原理及方法。l 观察胰岛素，肾上腺素对血糖浓度的影响。观察胰岛素，肾上腺素对血糖浓度的影响。l了解动物实验的基本知识和兔耳缘静脉取血了解动物实验的基本知识和兔耳缘静脉取血的方法。的方法。第2页，讲稿共13张，创作于星期三二二 原理原理(2)激素对血糖浓度的影响激素对血糖浓度的影响 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧萄糖酸，并产生过氧化氢，
2、过氧化氢被过氧化物酶（化物酶（POD）催化释放初生态氧，氧又对）催化释放初生态氧，氧又对与色原性氧受体与色原性氧受体4氨基安替比林偶联的酚氧氨基安替比林偶联的酚氧化，并与化，并与4氨基安替比林结合生成红色醌类氨基安替比林结合生成红色醌类化合物。化合物。第3页，讲稿共13张，创作于星期三二二 原理原理(2)显色原理显色原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢被过氧化物酶（化物酶（POD）催化释放初生态氧，氧又对）催化释放初生态氧，氧又对与色原性氧受体与色原性氧受体4氨基安替比林偶联的酚氧氨基安
3、替比林偶联的酚氧化，并与化，并与4氨基安替比林结合生成红色醌类氨基安替比林结合生成红色醌类化合物。化合物。第4页，讲稿共13张，创作于星期三 葡萄糖葡萄糖O2+H2O GOD 葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2 4氨基安替比林酚氨基安替比林酚H2O2 POD 红色醌类红色醌类化合物化合物 +4H2O 葡萄糖越多，生成的醌类物质就越多，颜葡萄糖越多，生成的醌类物质就越多，颜色就越深，通过所讲过的比色法，求出它的葡色就越深，通过所讲过的比色法，求出它的葡萄糖含量，即血糖浓度。（标准管法）萄糖含量，即血糖浓度。（标准管法）第5页，讲稿共13张，创作于星期三三三 操作操作1准备抗凝试管：首先放入试管一小勺抗凝剂
4、准备抗凝试管：首先放入试管一小勺抗凝剂（草酸钠）。（草酸钠）。2分组。称重：分组。称重：Kg，共有四只兔子，两只注射，共有四只兔子，两只注射胰岛素，两只注射肾上腺素。兔子抓取方法：胰岛素，两只注射肾上腺素。兔子抓取方法：一手抓取颈部皮肤，另一只手托臀部，把它放一手抓取颈部皮肤，另一只手托臀部，把它放在天平上称重。在天平上称重。第6页，讲稿共13张，创作于星期三 操作操作3.注射前取血注射前取血:一般多以心脏取血的方式进行。一般多以心脏取血的方式进行。第7页，讲稿共13张，创作于星期三 操作操作4注射激素注射激素:抓住兔子，肚皮朝上，在腹部的皮下注射，注意要抓住兔子，肚皮朝上，在腹部的皮下注射，
5、注意要抓紧兔耳以免被咬住，方法是掂起皮肤，刺入皮下有落空感，抓紧兔耳以免被咬住，方法是掂起皮肤，刺入皮下有落空感，然后缓慢注入激素。首先注射胰岛素然后缓慢注入激素。首先注射胰岛素0.75 mg/kg（注意记录（注意记录时间）然后注入肾上腺素时间）然后注入肾上腺素0.5 mg/kg，并记录时间。，并记录时间。5制备无蛋白血虑液制备无蛋白血虑液:这是注射前的血液，在胰岛素等待一这是注射前的血液，在胰岛素等待一个小时，肾上腺素等待半个小时期间制备注射前无蛋白血个小时，肾上腺素等待半个小时期间制备注射前无蛋白血虑液。方法：蛋白沉淀剂虑液。方法：蛋白沉淀剂4ml全血全血0.2ml混匀，室温放置混匀，室温
6、放置7分钟后，在漏斗上过滤，这时标记为注射前无蛋白血滤液。分钟后，在漏斗上过滤，这时标记为注射前无蛋白血滤液。第8页，讲稿共13张，创作于星期三 操作操作6注射后再次取血注射后再次取血7再制备无蛋白血虑液再制备无蛋白血虑液:标记为注射后标记为注射后8比色：最后我们用标准管法来测定血糖浓度，比色：最后我们用标准管法来测定血糖浓度，按表操作按表操作：第9页，讲稿共13张，创作于星期三 混匀，置混匀，置37水浴水浴15分钟调波长为分钟调波长为505nm，以空，以空白管调零，分别读取白管调零，分别读取A测测A标标,根据标准管法求测定管血根据标准管法求测定管血糖浓度。糖浓度。加入物（ml）测定管（注射前
7、）测定管（注射后）标准管 空白管去蛋白血滤液 0.5 0.5 处理后的葡萄糖 0.5标准应用液 蛋白沉淀剂 0.5酶酚混合试剂 3 3 3 3第10页，讲稿共13张，创作于星期三四四 结果与计算结果与计算lC测（测（mmol/l）=（A测测/A标）标）5 mmol/L (5为葡萄糖标准应用液浓度值为葡萄糖标准应用液浓度值)l通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况。化情况。第11页，讲稿共13张，创作于星期三五五 分析分析 (1)对家兔而言血糖正常值：对家兔而言血糖正常值：2.85.2 mmol/L，验证是否在此范围。验证是否在此范围。(2)从实验结果来验证胰岛素降低血糖以及肾上从实验结果来验证胰岛素降低血糖以及肾上腺素升高血糖的作用。腺素升高血糖的作用。第12页，讲稿共13张，创作于星期三感感谢谢大大家家观观看看第13页，讲稿共13张，创作于星期三