《微生物实验室的质量保证讲稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物实验室的质量保证讲稿.ppt（43页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、微生物实验室的质量保证第一页，讲稿共四十三页哦 微生物实验室的质量控制微生物实验室的质量控制 实验室的规范化管理实验室的规范化管理 制定严格的管理度制定严格的管理度 制定规范化操作程序制定规范化操作程序 影响微生物试验结果的重要因素包括：影响微生物试验结果的重要因素包括：培养基的质量和规范化操作培养基的质量和规范化操作 菌种的保藏及实验结果的正确判断等。菌种的保藏及实验结果的正确判断等。第二页，讲稿共四十三页哦 微生物实验室的质量控制微生物实验室的质量控制环境保证培养基保证无菌性检查检查适用性检查有效的方法方法验证SOP操作有效的结果可靠的结论结果判断第三页，讲稿共四十三页哦 培养基的配制及质
2、量控制培养基的配制及质量控制 第四页，讲稿共四十三页哦 培养基的配制培养基的配制 培养基可按处方制备也可使用按处方生产的符合规定的商品培养基可按处方制备也可使用按处方生产的符合规定的商品 化成品培养基，脱水培养基除附有处方和使用说明外还应注明化成品培养基，脱水培养基除附有处方和使用说明外还应注明 有有 效期、贮存条件、适用性试验的质控菌株和用途。效期、贮存条件、适用性试验的质控菌株和用途。配制时应按使用说明上的要求操作，受潮结块不能使用，确配制时应按使用说明上的要求操作，受潮结块不能使用，确 保培养基的质量符合要求。保培养基的质量符合要求。第五页，讲稿共四十三页哦 培养基的配制培养基的配制 使
3、用容器使用容器 -配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或搪瓷器皿。配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或搪瓷器皿。-使用的器皿应使用的器皿应 用蒸馏水或纯化水完全冲洗。用蒸馏水或纯化水完全冲洗。-配制培养基最常用的溶剂是纯化水，特殊情况下需要用去离子水配制培养基最常用的溶剂是纯化水，特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水和蒸馏水.第六页，讲稿共四十三页哦 培养基的配制培养基的配制 对配制培养基的过程作详细的记录对配制培养基的过程作详细的记录 记录内容记录内容 配制日期、培养基名称、成分、配制数量、配制日期、培养基名称、成分、配制数量、质量监控结果等进行全面详细记录。质量监控结果等进行全面详细记录。第七页，讲
4、稿共四十三页哦 培养基的制备方法培养基的制备方法 称量称量 按照产品说明书的规定称量，各称量物的重量应记录。按照产品说明书的规定称量，各称量物的重量应记录。对培养基的组分应准确称量，并要求有一定的精确度。对培养基的组分应准确称量，并要求有一定的精确度。第八页，讲稿共四十三页哦 培养基的制备方法培养基的制备方法 配制配制 将准确称量的各组分或脱水培养基加入溶剂中，完全将准确称量的各组分或脱水培养基加入溶剂中，完全 溶解，如需要可适当加热。溶解，如需要可适当加热。所有的培养基对热都或多或少的敏感，因此当培养基需要所有的培养基对热都或多或少的敏感，因此当培养基需要 加热溶解时，应注意不要加热过度，否
5、则会使培养基颜色变加热溶解时，应注意不要加热过度，否则会使培养基颜色变 深。深。配制培养基所用的器具应能方便控制加热和不断搅拌。配制培养基所用的器具应能方便控制加热和不断搅拌。当培养基需要添加其它组分时，添加后也应将其充分混匀。当培养基需要添加其它组分时，添加后也应将其充分混匀。第九页，讲稿共四十三页哦 培养基的制备方法培养基的制备方法 分装分装 配制的培养基根据试验需要分装试管、倾注平皿、配制的培养基根据试验需要分装试管、倾注平皿、制备斜面。制备斜面。经灭菌的培养基分装，应在无菌环境下操作，避免污染。经灭菌的培养基分装，应在无菌环境下操作，避免污染。第十页，讲稿共四十三页哦 培养基的制备方法
6、培养基的制备方法 对热敏感的培养基分装容器对热敏感的培养基分装容器 应预先进行灭菌，以保证应预先进行灭菌，以保证培养基的无菌性。培养基的无菌性。第十一页，讲稿共四十三页哦 培养基的制备方法培养基的制备方法 矫正矫正pH 配制培养基必须矫正配制培养基必须矫正pH，干燥培养基也必须对，干燥培养基也必须对pH进行验证，进行验证，高压灭菌前的高压灭菌前的pH应比最终应比最终pH值高值高0.2左右。左右。矫正矫正pH后的培养基应加热、过滤，使培养基澄清。后的培养基应加热、过滤，使培养基澄清。第十二页，讲稿共四十三页哦 培养基的灭菌培养基的灭菌 灭灭菌方法及菌方法及条条件不件不当当可直接可直接影响影响培培
7、养养基基质应质应通過通過无菌无菌 性性试验试验和促生和促生长试验进行验证长试验进行验证.验证验证方法同方法同中國中國药典药典2010年版年版附附录灭录灭菌法。菌法。第十三页，讲稿共四十三页哦 培养基的灭菌培养基的灭菌 培养基的灭菌应按照生产商提供或使用者验证的培养基的灭菌应按照生产商提供或使用者验证的 参数进行。商品化的成品培养基必须附有所用灭菌方参数进行。商品化的成品培养基必须附有所用灭菌方 法的资料。法的资料。第十四页，讲稿共四十三页哦 培养基的灭菌培养基的灭菌 不同不同种类种类培培养养基基应采应采用不同的用不同的灭灭菌方法，菌方法，配制配制好的培好的培养养基基灭菌一般多用流通蒸汽灭菌和滤
8、膜过滤除菌。灭菌一般多用流通蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌。流通蒸汽灭菌流通蒸汽灭菌 是最常用的最有效的灭菌法，是最常用的最有效的灭菌法，121，15min(121，30min)或或116，40min可杀死所有的可杀死所有的细菌芽孢。细菌芽孢。第十五页，讲稿共四十三页哦 培养基的灭菌培养基的灭菌 滤膜过滤除菌滤膜过滤除菌 如配制的培养基含有不耐热成分可采用滤膜过滤除菌和血清如配制的培养基含有不耐热成分可采用滤膜过滤除菌和血清凝固器除菌。凝固器除菌。-滤膜过滤除菌采用孔径滤膜过滤除菌采用孔径0.22um的滤膜过滤器的滤膜过滤器.-滤膜材质依过滤物品的性质及目的而定。滤膜材质依过滤物品的性质及目的而定。不
9、得对被滤过成分有吸附作用，不得有物质释放不得对被滤过成分有吸附作用，不得有物质释放 和纤维和纤维 的脱落，也不得使用含有石棉的滤器。的脱落，也不得使用含有石棉的滤器。-滤器和滤膜在使用前应进行验证，并进行灭菌。滤器和滤膜在使用前应进行验证，并进行灭菌。血清凝固器血清凝固器80100、30min，连续三天，间歇灭菌，连续三天，间歇灭菌。第十六页，讲稿共四十三页哦 培养基的贮藏培养基的贮藏 -商品化培养基应根据使用说明书上的要求进行储存。商品化培养基应根据使用说明书上的要求进行储存。-培养基标签上应标有批号，生产日期、有效期及培培养基标签上应标有批号，生产日期、有效期及培 养基的有关特性。养基的有
10、关特性。-所采用的保藏和运输条件应使培养基最低限度失去所采用的保藏和运输条件应使培养基最低限度失去 水分并提供机械保护。水分并提供机械保护。第十七页，讲稿共四十三页哦 培养基的贮藏培养基的贮藏 脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下贮存，脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下贮存，如低温、干燥和避光，所有的容器应密闭，尤其是盛如低温、干燥和避光，所有的容器应密闭，尤其是盛 有脱水培养基的容器有脱水培养基的容器.第十八页，讲稿共四十三页哦 培养基的贮藏培养基的贮藏 配制好的培养基应配制好的培养基应验证的条件下贮藏验证的条件下贮藏 -保存在保存在225避光的环境。避光的环境。-若保存于非密闭容
11、器中若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用一般在三周内使用，-若保存于密闭容器中若保存于密闭容器中，一般在一年内使用一般在一年内使用。第十九页，讲稿共四十三页哦 培养基的贮藏培养基的贮藏 -琼脂培养基不得在琼脂培养基不得在0或或0以下存放，防止冷冻破以下存放，防止冷冻破 坏凝胶特性。坏凝胶特性。-琼脂平板最好现配现用，如置冰箱保存，一般不超琼脂平板最好现配现用，如置冰箱保存，一般不超 过一周，且应密闭包装，若延长保存，保存期需经过一周，且应密闭包装，若延长保存，保存期需经 验证确定。验证确定。-培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在高压灭菌器培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在高压灭菌器 中，避免影
12、响培养基的质量。中，避免影响培养基的质量。第二十页，讲稿共四十三页哦 培养基的贮藏培养基的贮藏 -固体培养基灭菌后的再融化应在加热的水浴中或采固体培养基灭菌后的再融化应在加热的水浴中或采 用流通蒸汽进行，只允许一次，融化的培养基应放在用流通蒸汽进行，只允许一次，融化的培养基应放在4550的水的水浴中，不得超过浴中，不得超过8小时。小时。-使用过的培养基（包括失效的培养基）应按照国家使用过的培养基（包括失效的培养基）应按照国家 污染废物处理相关规定进行。污染废物处理相关规定进行。第二十一页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 所有配制好的培养基均应进行验证，验证方法参照所有配制好
13、的培养基均应进行验证，验证方法参照 中国药典中国药典2010年版年版附录无菌检查或微生物限度检附录无菌检查或微生物限度检 查项下有关规定进行。查项下有关规定进行。第二十二页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 实验室配制的培养基监控项目实验室配制的培养基监控项目 外观、性状、外观、性状、pH、促生长试验、定期的稳定性检查、促生长试验、定期的稳定性检查 以及培养基有效期的确定。以及培养基有效期的确定。第二十三页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 验证时间验证时间 -由同一批脱水培养基配制培养基时，若采用已验证的配制由同一批脱水培养基配制培养基时，若采用已验证的配
14、制和灭菌程序，那么可不进行批批促生长试验。和灭菌程序，那么可不进行批批促生长试验。-如果培养基制备的方法未经验证，那么，配制的每一批培养基必如果培养基制备的方法未经验证，那么，配制的每一批培养基必须进行促生长试验。须进行促生长试验。试验方法试验方法 -根据培养基的用途参照根据培养基的用途参照中国药典中国药典2010年版年版附录附录 无菌检查或微生物限度检查项下有关规定进行。无菌检查或微生物限度检查项下有关规定进行。第二十四页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 培养基的有效期培养基的有效期 是指已通过促生长试验的培养基在整个是指已通过促生长试验的培养基在整个 有效期内均需符合这
15、些相应的标准。有效期内均需符合这些相应的标准。每批培养基储存的时间将取决于一定存放条件（包括容器每批培养基储存的时间将取决于一定存放条件（包括容器 和密封性）的培养基组成成分的稳定性。和密封性）的培养基组成成分的稳定性。第二十五页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 试验结果处理试验结果处理 -当批培养基不符合促生长试验，应寻找造成不合格的原因。当批培养基不符合促生长试验，应寻找造成不合格的原因。-这个调查包括采取适当的行动以防止问题的重复出现。这个调查包括采取适当的行动以防止问题的重复出现。-如果未找到原因或还没有解决有关培养基的促生长问题，如果未找到原因或还没有解决有关培养
16、基的促生长问题，任何不符合要求的批次均不能使用。任何不符合要求的批次均不能使用。第二十六页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 鉴定微生物的诊断试剂鉴定微生物的诊断试剂 如如 革兰染色、氧化酶试验试剂等。质量控制试验与培养基质量控制试革兰染色、氧化酶试验试剂等。质量控制试验与培养基质量控制试验相似。验相似。试剂用于未知样品鉴定试剂用于未知样品鉴定 -选择正确的标准质控菌选择正确的标准质控菌 -按使用说明上的要求进行质控试验。按使用说明上的要求进行质控试验。第二十七页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 用于环境监控的培养基应特别小心防护。尤其是用用于环境监控的培
17、养基应特别小心防护。尤其是用 于关键区域监控的培养基最好是终端灭菌，如果不能于关键区域监控的培养基最好是终端灭菌，如果不能 采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行100%的预培养。的预培养。防止将外来的污染带到环境中及避免出现假阳性结果。防止将外来的污染带到环境中及避免出现假阳性结果。第二十八页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 测定测定PH值值 每批培养基灭菌后均应测定每批培养基灭菌后均应测定PH值值；在冷却至室温；在冷却至室温 （25）进行测定。）进行测定。除非经验证表明培养基的除非经验证表明培养基的PH允许的变化范围很宽，允许的
18、变化范围很宽，否则，培养基的否则，培养基的PH的范围不得超过规定的的范围不得超过规定的0.2。第二十九页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 一般性状一般性状 -制成平板或分装于试管的培养基应检查；容器和盖制成平板或分装于试管的培养基应检查；容器和盖 子的破裂，装量。子的破裂，装量。-固体培养基因水分流失而造成表面产生裂缝或涟漪。固体培养基因水分流失而造成表面产生裂缝或涟漪。-其他其他 如溶血，可能冷藏温度下形成的结晶，大量的如溶血，可能冷藏温度下形成的结晶，大量的 汽泡，微生物污染，氧化还原指示剂的状况，批数汽泡，微生物污染，氧化还原指示剂的状况，批数 量和有效期的检查和记录
19、，培养基的无菌检查等。量和有效期的检查和记录，培养基的无菌检查等。第三十页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 -液体培养基应观察培养基的颜色，是否有沉淀，液体培养基应观察培养基的颜色，是否有沉淀，微生物污染，氧化还原指示剂的状况，批数量微生物污染，氧化还原指示剂的状况，批数量 和有效期的检查和记录等。和有效期的检查和记录等。第三十一页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制 培养基的促生长和抑制性能试验培养基的促生长和抑制性能试验 无菌检查用培养基无菌检查用培养基 使用前应进行适用性试验使用前应进行适用性试验 适用性试验适用性试验 无菌性试验无菌性试验 灵敏度检查灵敏度检查第三十
20、二页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 培养基的灵敏度检查培养基的灵敏度检查 菌种菌种 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26 003 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 CMCC(B)10 104 枯草芽胞杆菌枯草芽胞杆菌 CMCC(B)63 501 生孢梭菌生孢梭菌 CMCC(B)64 941 白色念珠菌白色念珠菌 CMCC(F)98 001 黑曲霉黑曲霉 CMCC(F)98 003 第三十三页，讲稿共四十三页哦 灵敏度检查培养基接种量灵敏度检查培养基接种量试验菌试验菌 培养温度培养温度 培养基培养基 培养时间培养时间 接种管数接种管数 装装 量量 ()(天天)（支）支）
21、（支）支）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 3035 硫乙醇酸盐流体硫乙醇酸盐流体 3 2 12 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 3 2 12 生孢梭菌生孢梭菌 3 2 12白色念珠菌白色念珠菌 2328 改良马丁改良马丁 5 2 9黑曲霉黑曲霉 3 9 每种菌液接种量含菌小于每种菌液接种量含菌小于100cfu 同时做同时做1支空白对照支空白对照 培养基的质量控制培养基的质量控制第三十四页，讲稿共四十三页哦 培养基的质量控制培养基的质量控制 结果判定结果判定 空白对照管应无菌生长。空白对照管应无菌生长。-若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度 检查符
22、合规定。检查符合规定。-若加菌的培养基管不生长或生长不好，判培养基的灵若加菌的培养基管不生长或生长不好，判培养基的灵 敏度检查不符合规定，不能用于无菌试验，并寻找造敏度检查不符合规定，不能用于无菌试验，并寻找造 成不合格的原因。成不合格的原因。培养基的适用性检查可在供试品的无菌检查前或与供培养基的适用性检查可在供试品的无菌检查前或与供 试品的无菌检查同时进行。试品的无菌检查同时进行。第三十五页，讲稿共四十三页哦 微生物限度检查微生物限度检查(计数培养基计数培养基)培养基的适用性检查培养基的适用性检查 微生物限度检查微生物限度检查(计数培养基计数培养基)使用前应进行适用性试验，适用性试使用前应进
23、行适用性试验，适用性试验包括验包括促生长、抑制及指示能力检查。促生长、抑制及指示能力检查。第三十六页，讲稿共四十三页哦培养基的适用性检查菌种大肠埃希菌 CMCC（B）26003金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 白色念珠球菌 CMCC（B）98001黑曲霉 CMCC（F）98003第三十七页，讲稿共四十三页哦 培养基的适用性检查培养基的适用性检查 检查方法 菌种 培养基 加入菌数 培养温度 培养时间 （cfu）（）（h）大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 营养琼脂 50100 3035 48 枯草芽孢杆菌 黑曲霉 玫瑰红钠琼脂 50100 2328 72 白
24、色念珠球菌 白色念珠球菌 酵母浸出粉胨 50100 2328 72 葡萄糖琼脂 第三十八页，讲稿共四十三页哦 培养基的适用性检查培养基的适用性检查 -菌悬液制备后在室温下放置应在菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使用。小时内使用。-保存在保存在28可以在可以在24小时内使用。小时内使用。-黑黑曲曲霉霉孢孢子子悬悬液液可可保保存存在在 28，在在验验证证过过 的的贮贮存存期期内使用。内使用。第三十九页，讲稿共四十三页哦 结果判定结果判定 被被检检培培养养基基上上的的菌菌落落平平均均数数不不得得小小于于对对照照培培养养基基菌菌落落平平均均数数的的70%，且且菌菌落落形形态态、大大小小应应与与对对
25、照照培培养养基基上上的的菌菌落落一一致致。判该培养基的适用性检查符合规定。判该培养基的适用性检查符合规定。第四十页，讲稿共四十三页哦 控制菌检查用培养基的适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查控制菌检查 培养基 特性 试验菌株大肠埃希菌大肠埃希菌 胆盐乳糖胆盐乳糖 促生长能力促生长能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 抑制能力抑制能力 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 MUG 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 曙红亚甲蓝曙红亚甲蓝 或麦康凯或麦康凯 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 大肠埃希菌大肠埃希菌大肠菌群大肠菌群 乳糖胆
26、盐乳糖胆盐 促生长能力促生长能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 抑制能力抑制能力 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 乳糖发酵乳糖发酵 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 曙红亚甲蓝曙红亚甲蓝 或麦康凯或麦康凯 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 大肠大肠埃希菌埃希菌 第四十一页，讲稿共四十三页哦 培养基的适用性检查培养基的适用性检查沙门菌沙门菌 营养肉汤营养肉汤 促生长能力促生长能力 乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌 四硫磺酸钠亮绿四硫磺酸钠亮绿 促生长能力促生长能力 乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌 抑制能力抑制能力 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 胆盐硫乳琼脂或沙门、胆盐硫
27、乳琼脂或沙门、志贺氏属琼脂培养基志贺氏属琼脂培养基 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌 曙红亚甲蓝琼脂曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂或麦康凯琼脂 培养基培养基 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌 三糖铁琼脂三糖铁琼脂 培养基培养基 指示能力指示能力 乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌铜绿假单铜绿假单 胆盐乳糖胆盐乳糖 促生长能力促生长能力 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌胞菌胞菌 抑制能力抑制能力 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 溴化十六烷基三溴化十六烷基三 促生长能力促生长能力 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 甲铵琼脂甲铵琼脂 抑制能力
28、抑制能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 绿脓菌素测定绿脓菌素测定 用培养基用培养基 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌第四十二页，讲稿共四十三页哦 培养基的适用性检查培养基的适用性检查金黄色葡金黄色葡 亚碲酸盐肉汤亚碲酸盐肉汤 促生长能力促生长能力 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 萄球菌萄球菌 抑制能力抑制能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 卵黄氯化钠琼脂促生长能力卵黄氯化钠琼脂促生长能力+指示能力指示能力 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 或甘露醇盐琼脂或甘露醇盐琼脂 抑制能力抑制能力 大肠埃希菌大肠埃希菌梭菌梭菌 梭菌增菌培养基梭菌增菌培养基 促生长能力促生长能力 生孢梭菌生孢梭菌 哥伦比亚琼脂哥伦比亚琼脂 促生长能力促生长能力 生孢梭菌生孢梭菌 白色念白色念 沙氏葡萄糖肉汤沙氏葡萄糖肉汤 促生长能力促生长能力 白色念珠菌白色念珠菌珠菌珠菌 沙氏葡萄糖琼脂沙氏葡萄糖琼脂 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 白色念珠菌白色念珠菌 念珠菌显色培养基念珠菌显色培养基 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 白色念珠菌白色念珠菌 吐温吐温80玉米琼脂玉米琼脂 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 白色念珠菌白色念珠菌第四十三页，讲稿共四十三页哦