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1、实验六次溴酸钠法测定海水中的氨氮第1页，本讲稿共21页海水中的营养元素：海水中的营养元素：氧、碳、氧、碳、氮氮、磷、硅等主要元素，还有铁、磷、硅等主要元素，还有铁、锰、铜、钼等微量元素锰、铜、钼等微量元素第2页，本讲稿共21页第3页，本讲稿共21页第4页，本讲稿共21页第5页，本讲稿共21页第6页，本讲稿共21页第7页，本讲稿共21页第8页，本讲稿共21页氮化合物在海洋中的存在形态：氮化合物在海洋中的存在形态：1.NH4+(NH3)、NO2-、NO3-三种无机化合氮三种无机化合氮2.溶解有机氮化合物溶解有机氮化合物3.不溶于海水的颗粒氮不溶于海水的颗粒氮其中无机氮化合物是海洋植物最重要的营养物
2、其中无机氮化合物是海洋植物最重要的营养物质质第9页，本讲稿共21页3.吸光光度法吸光光度法原理原理：在一定的实验条件下，物质对光的吸收与：在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。物质的浓度成正比。显色剂：显色剂：波长的选择：波长的选择：第10页，本讲稿共21页孔雀绿的吸收光谱孔雀绿的吸收光谱第11页，本讲稿共21页7.2.1 7.2.1 吸光分析的几种方法吸光分析的几种方法吸光分析的几种方法吸光分析的几种方法目视比色法目视比色法标准系列标准系列未知样品未知样品特点特点利用自然光利用自然光比较吸收光的互补色光比较吸收光的互补色光准确度低（半定量）准确度低（半定量）不可分辨多组分不可
3、分辨多组分方法简便，灵敏度低方法简便，灵敏度低第12页，本讲稿共21页光电比色法光电比色法分光光度法（紫外分光光度法（紫外-可见分光光度法）可见分光光度法）UV-VISUltraviolet Visual Spectroscopy0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示第13页，本讲稿共21页实验原理：实验原理：在在碱性碱性条件下，条件下，以次溴酸钠以次溴酸钠为氧化剂，将海为氧化剂，将海水中的水中的氨氨氧化为氧化为亚硝酸盐亚硝酸盐，亚硝酸盐在一定，亚硝酸盐在一定的的pH值下与值下与磺胺磺胺及及盐酸萘乙二胺盐酸萘乙二胺作用形成作用形成深深红色红色偶氮染料，于偶氮染料，于54
4、3毫微米毫微米波长处进行光度波长处进行光度测定。测定。使用液使用液注意：氧化剂储备液注意：氧化剂储备液第14页，本讲稿共21页实验步骤：工作曲线的制作实验步骤：工作曲线的制作1 分别移取分别移取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0毫升毫升NH4Cl标准使用标准使用液于液于6个比色管，用人工海水稀释至刻度线（个比色管，用人工海水稀释至刻度线（溶液浓度分别为溶液浓度分别为0、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00微克氨微克氨/升）升）3 用移液管依次加入用移液管依次加入5毫升氧化剂（以次溴酸钠）使用液，混毫升氧化剂（以次溴酸钠）使用液，混匀放置匀放置30分钟分钟2 量取量取2份水
5、样于份水样于50毫升比色管中，管上做标签，与毫升比色管中，管上做标签，与1一起做下面步一起做下面步骤骤第15页，本讲稿共21页5 用移液管依次加入用移液管依次加入5毫升磺胺毫升磺胺溶液，混匀放置溶液，混匀放置5分钟分钟6 用移液管依次加入用移液管依次加入1毫升盐酸萘乙二胺毫升盐酸萘乙二胺液，混匀放置液，混匀放置10分钟分钟7 在分光光度计上在分光光度计上543毫微米波长处测量毫微米波长处测量1的吸光值的吸光值A，未加，未加NH4Cl溶液的吸光值为空白吸光值溶液的吸光值为空白吸光值Ab,样品的吸光值样品的吸光值AW,NO2-N 的吸光值的吸光值A NO2-N 4 量取量取2份水样于份水样于50毫
6、升比色管中，管上做标签，与前面的毫升比色管中，管上做标签，与前面的一起做下面步骤，来测定海水中的一起做下面步骤，来测定海水中的NO2-N 第16页，本讲稿共21页NH4+浓度浓度A-Ab第17页，本讲稿共21页7 以以1的的NH4-N浓度和浓度和A-Ab为横纵坐标作图，得到工作曲线为横纵坐标作图，得到工作曲线8 水样的水样的NH4-N吸光值为：吸光值为：A(NH4-N)=AW-Ab-A NO2-N 9 根据根据A(NH4-N)在工作曲线上查出水样氨在工作曲线上查出水样氨-氮的浓度氮的浓度第18页，本讲稿共21页721型分光光度计的使用方法型分光光度计的使用方法1 用调波长的旋钮调波长至用调波长
7、的旋钮调波长至543毫微米毫微米2 将上面的盖子打开，用中间的调零旋钮调透光值将上面的盖子打开，用中间的调零旋钮调透光值至零至零3 将里面盛比色皿的盒子拿出来将里面盛比色皿的盒子拿出来4 用手拿比色皿的侧面（避免用手接触光面），用蒸馏用手拿比色皿的侧面（避免用手接触光面），用蒸馏水里外冲洗两次水里外冲洗两次第19页，本讲稿共21页5 最里面的比色皿盛蒸馏水（最里面的比色皿盛蒸馏水（80%满），剩下的三个满），剩下的三个由颜色浅到深的顺序盛样品，在盛之前要用样品润洗由颜色浅到深的顺序盛样品，在盛之前要用样品润洗相对应的比色皿相对应的比色皿2次，然后盛入对应的样品（次，然后盛入对应的样品（80%满
8、）满）。6 先用滤纸擦比色皿外面一遍，然后用擦镜纸擦干净先用滤纸擦比色皿外面一遍，然后用擦镜纸擦干净（特别是光面），按顺序放入盛比色皿的盒子中（放（特别是光面），按顺序放入盛比色皿的盒子中（放正），用盒子上的铁皮固定好正），用盒子上的铁皮固定好第20页，本讲稿共21页7 将盒子放入分光光度计内，注意和下面固定孔将盒子放入分光光度计内，注意和下面固定孔对好，对好，盖住分光光度计的盖子盖住分光光度计的盖子8 在蒸馏水位置，旋转在蒸馏水位置，旋转100%旋钮调透光值至旋钮调透光值至100%，然后测样（向里一个一个推），读吸光值。然后测样（向里一个一个推），读吸光值。9 测完后将比色皿内的废液倒出，用蒸馏水内外冲洗测完后将比色皿内的废液倒出，用蒸馏水内外冲洗两次，桌上铺一张滤纸，将比色皿倒放上面晾干。两次，桌上铺一张滤纸，将比色皿倒放上面晾干。第21页，本讲稿共21页