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1、实验二中微量铁的测定第1页，本讲稿共15页目的目的掌握使用分光光度计掌握使用分光光度计.掌握标准曲线法进行定量分析掌握标准曲线法进行定量分析掌握分光光度法测定药物或水中铁含量的操作方法掌握分光光度法测定药物或水中铁含量的操作方法及原理及原理.第2页，本讲稿共15页 原理铁是药物和水中常见的一种杂质铁是药物和水中常见的一种杂质,含量大时易产生含量大时易产生特殊气味特殊气味,因此对药物和饮水中的铁要进行检查和因此对药物和饮水中的铁要进行检查和测定测定.选择显色剂的基本原则选择显色剂的基本原则亚铁离子与邻二氮菲生成稳定的亚铁离子与邻二氮菲生成稳定的橙红色配合物橙红色配合物.Fe2+第3页，本讲稿共1
2、5页应用此反应可测定铁应用此反应可测定铁,当铁以当铁以Fe3+离子形式离子形式存在于溶液中时存在于溶液中时,可预先用还原剂可预先用还原剂(盐酸羟胺盐酸羟胺或对苯二酚等或对苯二酚等)将其还原为将其还原为Fe2+离子离子.及显色条件的选择及显色条件的选择 显色时显色时,溶液溶液PH值应为值应为29.若酸度过高若酸度过高(PH2）显色缓慢而色浅）显色缓慢而色浅;若酸度过低若酸度过低,二二价铁离子易水解价铁离子易水解.最大吸收波长为最大吸收波长为508nm,=11100.第4页，本讲稿共15页仪器与试剂(1)722型分光光度计型分光光度计型分光光度计型分光光度计(2)容量瓶容量瓶(10ml，7个个);
3、);(3)(3)吸量管吸量管吸量管吸量管(2,1ml)(2,1ml)(4)洗耳球洗耳球(5)擦镜纸擦镜纸(6)标准铁溶液标准铁溶液(20g/ml)(20g/ml)(7)(7)邻二氮菲邻二氮菲邻二氮菲邻二氮菲0.1%水溶液水溶液水溶液水溶液(8)盐酸羟胺盐酸羟胺1%水溶液水溶液(用时配制用时配制用时配制用时配制)(9)HCA-NaAc(9)HCA-NaAc缓冲溶液缓冲溶液缓冲溶液缓冲溶液(10)FeCl3待测液待测液待测液待测液第5页，本讲稿共15页四四.操作步骤操作步骤1.标准曲线的制作标准曲线的制作 以标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸以标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制成光度
4、为纵坐标，绘制成A-C曲线即为标准曲线即为标准曲线。曲线。第6页，本讲稿共15页 具体步骤：具体步骤：在在6只只10ml容量瓶中，用吸量管分别加入容量瓶中，用吸量管分别加入0.0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0ml 铁标准溶液铁标准溶液(硫酸铁铵每硫酸铁铵每ml含含Fe3+20g),分别加入分别加入 0.2ml盐酸羟胺盐酸羟胺,0.4ml邻二氮菲邻二氮菲,1.0ml HAc-NaAc缓冲溶液缓冲溶液,用水稀释至刻度后摇用水稀释至刻度后摇匀匀,放置放置5min.用用1cm比色皿比色皿,以以0.0ml铁标铁标液为试剂空白液为试剂空白,在所选波长在所选波长(508nm)下下,测测量各溶液的吸
5、光度量各溶液的吸光度.以铁含量为横坐标以铁含量为横坐标,吸光吸光度度A为纵坐标为纵坐标,绘制标准曲线绘制标准曲线.第7页，本讲稿共15页2.FeCl3样测定以以以以FeClFeClFeClFeCl3 3 3 3为样品为样品为样品为样品,准确吸取样准确吸取样准确吸取样准确吸取样1.00ml(1.00ml(1.00ml(1.00ml(或适量或适量或适量或适量),),),),置置置置10ml10ml10ml10ml容量瓶中容量瓶中容量瓶中容量瓶中.按上述按上述按上述按上述制备标准曲线的方法配制溶液制备标准曲线的方法配制溶液制备标准曲线的方法配制溶液制备标准曲线的方法配制溶液并测定吸光度并测定吸光度并
6、测定吸光度并测定吸光度,根据测得的吸光度求出根据测得的吸光度求出根据测得的吸光度求出根据测得的吸光度求出FeClFeClFeClFeCl3 3 3 3样中总铁量样中总铁量样中总铁量样中总铁量.据据据据FeClFeCl3 3样测得吸光度查出铁含量样测得吸光度查出铁含量样测得吸光度查出铁含量样测得吸光度查出铁含量.（1 1）在相同条件下测定样品溶液的吸光度，即可从标准曲线）在相同条件下测定样品溶液的吸光度，即可从标准曲线）在相同条件下测定样品溶液的吸光度，即可从标准曲线）在相同条件下测定样品溶液的吸光度，即可从标准曲线查出样品溶液中被除测组分的浓度，查出样品溶液中被除测组分的浓度，查出样品溶液中被
7、除测组分的浓度，查出样品溶液中被除测组分的浓度，（2 2）将一系列标准溶液的浓度与相应的吸光度，进行线性回归，）将一系列标准溶液的浓度与相应的吸光度，进行线性回归，）将一系列标准溶液的浓度与相应的吸光度，进行线性回归，）将一系列标准溶液的浓度与相应的吸光度，进行线性回归，然后将样品溶液的吸光度引入回归方程，计算样品溶液然后将样品溶液的吸光度引入回归方程，计算样品溶液然后将样品溶液的吸光度引入回归方程，计算样品溶液然后将样品溶液的吸光度引入回归方程，计算样品溶液中被测组分的浓度。中被测组分的浓度。中被测组分的浓度。中被测组分的浓度。由于线性回归法制备的标准曲线，比手绘法更客观，由于线性回归法制备
8、的标准曲线，比手绘法更客观，由于线性回归法制备的标准曲线，比手绘法更客观，由于线性回归法制备的标准曲线，比手绘法更客观，所以目前文献报到多采用此法。所以目前文献报到多采用此法。所以目前文献报到多采用此法。所以目前文献报到多采用此法。第8页，本讲稿共15页 标准曲线制备实例精密称取对照品1.110mg用甲醇溶解并定容至10ml，用移液管精密移取，用移液管精密移取0.4ml,0.4ml,0.8ml，1.2ml1.2ml，1.6ml1.6ml，2.0ml，2.4ml2.4ml分别定容于分别定容于10ml容量瓶，以此为对照溶液，在268nm268nm下测其吸收度，测定结果见表Table2第9页，本讲稿
9、共15页 Table 2 Linear Relationship of Standard MaterialTable 2 Linear Relationship of Standard Material NO.NO.contents of standard Acontents of standard A material(mg/l)1 4.4400 0.092 2 8.8800 0.187 3 13.320 0.277 4 17.760 0.365 5 22.200 0.458 6 26.640 0.553第10页，本讲稿共15页对对照品的吸收度和浓度进行线性回归，得回归方程：A=0.0206
10、3C+0.0014 =0.99993 (A:吸收度，C:浓度)标准品在4.44026.640mg/L范围内A与C呈良好线性关系。以对照品溶液的浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，见Fig3。第11页，本讲稿共15页以对照品浓度对吸收度作图，得直线，见Fig3Fig3 Fig5 normal curve of standard material第12页，本讲稿共15页思考题显色反应操作中,加入的各标准溶液与样品液的含酸量不同,对显色有无影响?据制备标准曲线测得的数据,判断本次实验得浓度与吸光度间的线性好不好,分析其原因.第13页，本讲稿共15页注意事项待测溶液装量应超过比色皿2/3，但也不能装得太满。实验过程中，注意不要将溶液撒入机器内部，如果发生上述情况，请及时清理干净。比色皿用后，请洗净后，用95%乙醇浸泡，长期不用，请擦干后，收好.第14页，本讲稿共15页附：722型分光光度计使用方法开机后需预热2020分钟。分钟。波长设定需从短波向长波方向调整。调零需在透射比模式下将比色皿架置于调零档。调满度时将空白样品置于光路，按调满度时将空白样品置于光路，按100%T（OA）键。按方式键可实现透射比，吸光度方式转换。按方式键可实现透射比，吸光度方式转换。波长改变后千万不能忘了再调到零和调满度。波长改变后千万不能忘了再调到零和调满度。第15页，本讲稿共15页