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1、关于细菌分离培养现在学习的是第1页，共30页细菌的分离纯化技术细菌的分离纯化技术分离纯化：分离纯化：使微生物共生群体分离开，得到纯培养物的过程使微生物共生群体分离开，得到纯培养物的过程称微生物的称微生物的纯分离技术纯分离技术。得到的纯培养物称纯。得到的纯培养物称纯种。种。纯种：纯种：指一种或一株微生物指一种或一株微生物培养物培养物中所有的细胞中所有的细胞只来源同一个细胞的后代。只来源同一个细胞的后代。分离纯化技术是细菌学实验中最基本的技术之一分离纯化技术是细菌学实验中最基本的技术之一 临床送检样品或混杂的样品临床送检样品或混杂的样品 分离受杂菌污染的菌种分离受杂菌污染的菌种细菌纯培养物细菌纯培
2、养物现在学习的是第2页，共30页试验内容：试验内容：1.需氧菌的分离移植和增菌需氧菌的分离移植和增菌平板划线分离平板划线分离营养（普通）斜面接种营养（普通）斜面接种营养（普通）肉汤增菌营养（普通）肉汤增菌 2.厌氧菌的分离培养方法厌氧菌的分离培养方法（本次试验不做）生物学方法、化学方法、物理学方法生物学方法、化学方法、物理学方法现在学习的是第3页，共30页实验要求：实验要求：l掌握：掌握：l掌握细菌分离培养的基本要领和方法掌握细菌分离培养的基本要领和方法l掌握无菌操作程序掌握无菌操作程序l掌握细菌在培养基上生长特点掌握细菌在培养基上生长特点l认识：认识：l认识菌落形态认识菌落形态现在学习的是第
3、4页，共30页 无菌操作工具无菌操作工具现在学习的是第5页，共30页接接种种工工具具现在学习的是第6页，共30页分离纯化法：分离纯化法：（细菌分离纯化）（细菌分离纯化）1 1、平板划线法、平板划线法 2 2、稀释涂布平板法、稀释涂布平板法3 3、稀释混合（倾注）平板法、稀释混合（倾注）平板法4 4、显微操作器单细胞挑取法、显微操作器单细胞挑取法5 5、棋盘格划线法、棋盘格划线法现在学习的是第7页，共30页1.平板划线：将蘸有混合细菌的接种环在将蘸有混合细菌的接种环在平板表面平板表面多方向多方向连连续划线续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，浓，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，浓度变稀，经
4、培养得到由度变稀，经培养得到由单个细胞单个细胞繁殖而成的繁殖而成的菌落菌落，从而达到纯化。从而达到纯化。现在学习的是第8页，共30页1.平板划线：平板划线的原则和目的：平板划线的原则和目的：现在学习的是第9页，共30页 图1 平板画线法 A、B、C分别为1、2、3次画线ABC现在学习的是第10页，共30页注意手势1.培养皿与酒 精灯的距离2.左手打开培 养皿的动作3.右手握接种 棒的姿势4.右手划线的 运作姿势现在学习的是第11页，共30页分区划线：分区划线：多用于粪便等含菌量较多的标本。每划每划一个区域，将接种环烧灼一次烧灼一次，待冷冷却后却后再划下一个区域。每一区域的划线应接触上一区域接种
5、线的23次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落。现在学习的是第12页，共30页连续划线（曲线划线）：连续划线（曲线划线）：分离含菌量较少的培养物分离含菌量较少的培养物右手持接种环，通过火焰灭菌，冷却后，挑取标本或培养物少许现在学习的是第13页，共30页1.平板划线：现在学习的是第14页，共30页1432现在学习的是第15页，共30页细菌在固体培养基细菌在固体培养基中的生长情况：中的生长情况：单个菌落（S型）菌苔菌落（R型）现在学习的是第16页，共30页 细菌的培养特征：细菌的培养特征：不同种类的细菌在固体、半固体和液体培养不同种类的细菌在固体、半固体和液体培养基中可表现出各自特有的培养特征。可以作
6、基中可表现出各自特有的培养特征。可以作为细菌鉴别的特征之一。为细菌鉴别的特征之一。现在学习的是第17页，共30页 细菌在固体培养基中生长表现：细菌在固体培养基中生长表现：1 1、大小、大小 （mmmm表示。表示。1mm1mm以内露滴状；以内露滴状；1-2mm1-2mm小菌落。小菌落。2-4mm2-4mm中等大菌落；中等大菌落；4-6mm4-6mm以上称大菌落或巨大菌落以上称大菌落或巨大菌落）2 2、形状、形状 （圆形、不规则形）（圆形、不规则形）3 3、边缘、边缘 （整齐、锯齿状）（整齐、锯齿状）4 4、表面性状、表面性状（光滑、粗糙）（光滑、粗糙）5 5、隆起度、隆起度（扁平、隆起、中凸）（
7、扁平、隆起、中凸）6 6、颜色及透明度、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明）（黄色、灰白、光泽、透明）7 7、硬度、硬度（干燥、湿润、粘液）（干燥、湿润、粘液）8 8、溶血、溶血（在血培养基上的表现）（在血培养基上的表现）现在学习的是第18页，共30页2.斜面移植法：斜面移植法：培养，保存菌种及其它。培养，保存菌种及其它。现在学习的是第19页，共30页手执塑料杆处手执塑料杆处手执试管底露出斜面试管口离火焰1cm小指夹棉塞现在学习的是第20页，共30页现在学习的是第21页，共30页培养后生长的斜面菌种培养后生长的斜面菌种现在学习的是第22页，共30页液体培养基接种法：液体培养基接种法：用于增菌
8、及纯培养细菌的生长特点观察，如表面生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。现在学习的是第23页，共30页细菌在液体培养基中生长的细菌在液体培养基中生长的三种不同现象三种不同现象混浊：混浊：细菌均匀弥漫扩散，出现不同程度混浊。细菌均匀弥漫扩散，出现不同程度混浊。沉淀：沉淀：细菌由下沉。肉眼可见沉淀物（颗粒絮状）细菌由下沉。肉眼可见沉淀物（颗粒絮状）菌膜：菌膜：需氧菌易在液面生长，形成可见的菌膜，菌需氧菌易在液面生长，形成可见的菌膜，菌环。环。现在学习的是第24页，共30页现在学习的是第25页，共30页操作顺序：操作顺序：接种环灭菌接种环灭菌 勾取细菌勾取细菌 取棉塞取棉塞 接接种种 塞棉塞塞棉塞 接种环
9、灭菌接种环灭菌 标记标记 培养。培养。现在学习的是第26页，共30页思考题：思考题：1、划线分离时为什么每次都要讲接种环上多余的、划线分离时为什么每次都要讲接种环上多余的菌体烧掉？划线时为何不能重叠？菌体烧掉？划线时为何不能重叠？2、在恒温箱培养微生物时为何培养皿均需倒置？、在恒温箱培养微生物时为何培养皿均需倒置？3、如何进行菌落形状的检查？检查时应注意观察、如何进行菌落形状的检查？检查时应注意观察菌落的哪些性状？菌落的哪些性状？4、分离培养的目的是什么？经一次分离的菌种是、分离培养的目的是什么？经一次分离的菌种是否皆为纯种？何为纯种？否皆为纯种？何为纯种？现在学习的是第27页，共30页现在学习的是第28页，共30页涂布平板法：涂布平板法：现在学习的是第29页，共30页感谢大家观看现在学习的是第30页，共30页