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1、关于细菌鉴定图现在学习的是第1页，共23页 一一.诊断对象和诊断目的诊断对象和诊断目的病原菌的变迁病原菌的变迁：感染性疾病病原菌的种类不断发生变迁，过去威胁人类的传染病感染性疾病病原菌的种类不断发生变迁，过去威胁人类的传染病如鼠疫、霍乱、白喉等己明显减少。新的病原菌不断出现，原有的如鼠疫、霍乱、白喉等己明显减少。新的病原菌不断出现，原有的病原菌因变异、耐药等又重新流行。目前，医院临床实验室遇到的病原菌因变异、耐药等又重新流行。目前，医院临床实验室遇到的主要是条件致病菌，它们在机体抵抗力下降、菌群失调或天然屏障主要是条件致病菌，它们在机体抵抗力下降、菌群失调或天然屏障防御功能被破坏时引起感染。防
2、御功能被破坏时引起感染。现在学习的是第2页，共23页正常菌群与病原菌的致病性正常菌群与病原菌的致病性 对于存在正常菌群的部位，应区别标本中是致病菌还是常居菌对于存在正常菌群的部位，应区别标本中是致病菌还是常居菌群的污染，如痰标本。群的污染，如痰标本。正常菌群与病原菌的致病性差异是相对的，既不要轻易认为从病人标本正常菌群与病原菌的致病性差异是相对的，既不要轻易认为从病人标本中分离出的非致病菌是污染菌，也不要轻易认为所发现的细菌就是该感染的中分离出的非致病菌是污染菌，也不要轻易认为所发现的细菌就是该感染的病原菌，根据临床症状和标本来源有助于病原菌的正确诊断。病原菌，根据临床症状和标本来源有助于病原
3、菌的正确诊断。机体的某些部位是无菌的，如检到细菌即可视为病原菌，如血液、机体的某些部位是无菌的，如检到细菌即可视为病原菌，如血液、脑脊液、骨髓等。脑脊液、骨髓等。现在学习的是第3页，共23页临床分离病原菌的鉴定水平临床分离病原菌的鉴定水平一种细菌鉴定到哪一水平，取决于诊断的目的一种细菌鉴定到哪一水平，取决于诊断的目的1.以疾病的病原学诊断为目的以疾病的病原学诊断为目的 一般情况下只需鉴定到细菌的种一般情况下只需鉴定到细菌的种2.为提供治疗方案为目的为提供治疗方案为目的 可以进行临床标本的直接药敏试验可以进行临床标本的直接药敏试验 还可根据分离出病原菌种类直接提供选择抗生素范围和种类还可根据分离
4、出病原菌种类直接提供选择抗生素范围和种类不少细菌对某种药物有天然耐药性，由于细菌耐药性的产生和变迁，临不少细菌对某种药物有天然耐药性，由于细菌耐药性的产生和变迁，临床上对分离的病原菌都要作进一步的药敏试验，以期提供更可靠的治疗床上对分离的病原菌都要作进一步的药敏试验，以期提供更可靠的治疗方案。方案。3.以作流行病学研究为目的以作流行病学研究为目的 必须对病原菌鉴定到型必须对病原菌鉴定到型(血清型或基血清型或基因型因型)的水平。只有这样才能明确传染源的所在。的水平。只有这样才能明确传染源的所在。4.了解细菌与感染的关系为目的了解细菌与感染的关系为目的 一种类型的感染可以由不同种细菌引起，一一种类
5、型的感染可以由不同种细菌引起，一种细菌也可以引起多种类型的感染。现己知以前那些曾经被认为不致病的细种细菌也可以引起多种类型的感染。现己知以前那些曾经被认为不致病的细菌在某些情况下会引起人体的感染。要了解这些细菌的致病菌性，必须进行菌在某些情况下会引起人体的感染。要了解这些细菌的致病菌性，必须进行细致的鉴定。细致的鉴定。现在学习的是第4页，共23页 二二.诊断试验选择诊断试验选择鉴定一个细菌，尽可能用一个菌落做全部鉴定试验。鉴定一个细菌，尽可能用一个菌落做全部鉴定试验。如果一个菌落不够应考虑采用纯培养，即挑取单个菌落接种于斜面培养基，如果一个菌落不够应考虑采用纯培养，即挑取单个菌落接种于斜面培养
6、基，经过培养即可获得大量纯培养物。经过培养即可获得大量纯培养物。对一株细菌准确鉴定应综合多种特性进行分析。但临床实验室每天要处理大对一株细菌准确鉴定应综合多种特性进行分析。但临床实验室每天要处理大量标本，且由于经济原因不可能做很多试验，进行全面分析鉴定，因而需要量标本，且由于经济原因不可能做很多试验，进行全面分析鉴定，因而需要选择一些合理的试验项目用于常规检测。选择一些合理的试验项目用于常规检测。挑选试验应以既能完成病原学鉴定又使试验项目尽可能少而快速为原则。挑选试验应以既能完成病原学鉴定又使试验项目尽可能少而快速为原则。现在学习的是第5页，共23页1.选择有鉴定价值的试验选择有鉴定价值的试验
7、 要对两种细菌进行鉴别，须选择一项两种菌呈现截要对两种细菌进行鉴别，须选择一项两种菌呈现截然不同结果的试验，即一种菌呈现阳性然不同结果的试验，即一种菌呈现阳性(阳性反应菌株阳性率须大于阳性反应菌株阳性率须大于90%)，另，另一菌为阴性一菌为阴性(阴性反应的菌株阳性率应小于阴性反应的菌株阳性率应小于10%)，这项试验才有鉴定价值，这项试验才有鉴定价值，否则就没有鉴定价值。否则就没有鉴定价值。2.选择简易、快速、方便的试验选择简易、快速、方便的试验 鉴定一种细菌可能有多种特异的方法鉴定一种细菌可能有多种特异的方法,没没必要逐一进行试验，只选其中一或两种达到目的即可，多选无意义。必要逐一进行试验，只
8、选其中一或两种达到目的即可，多选无意义。选选择操作简便，快速的方法。择操作简便，快速的方法。选用复合培养基，一次操作可同时看几个生选用复合培养基，一次操作可同时看几个生化反应，如此可简化操作，节约人力物力。化反应，如此可简化操作，节约人力物力。3.综合考虑试验的敏感性和特异性综合考虑试验的敏感性和特异性 敏感性敏感性=所有阳性结果数所有阳性结果数/所有感染病人数所有感染病人数 特异性特异性=阴性结果总数阴性结果总数/未感染病人总数未感染病人总数 试验的敏感性和特异性是相互联系的，试验的敏感性增加，会使特异试验的敏感性和特异性是相互联系的，试验的敏感性增加，会使特异性下降，反之亦然。性下降，反之
9、亦然。现在学习的是第6页，共23页 三三.常用诊断流程常用诊断流程完成一个细菌鉴定要做多项试验，将结果与己知细菌特性进行比较，完成一个细菌鉴定要做多项试验，将结果与己知细菌特性进行比较，才能最后确定。才能最后确定。在选择试验项目以及分析试验结果时应遵循一个合理且思路清晰完整的在选择试验项目以及分析试验结果时应遵循一个合理且思路清晰完整的思维模式，避免不必要的重复，少走弯路。思维模式，避免不必要的重复，少走弯路。在临床细菌鉴定中常借用一些简便的流程和方法。在临床细菌鉴定中常借用一些简便的流程和方法。现在学习的是第7页，共23页1.双歧索引法双歧索引法 细菌的鉴定中经常选用的方法。主要针对那些相互
10、区别细菌的鉴定中经常选用的方法。主要针对那些相互区别比较容易，有较特殊特征的细菌。双歧索引是表明鉴定比较容易，有较特殊特征的细菌。双歧索引是表明鉴定思路的一种流程，使用起来非常方便。思路的一种流程，使用起来非常方便。现在学习的是第8页，共23页 临床常见菌的初步分群双岐索引鉴定临床常见菌的初步分群双岐索引鉴定 分离菌分离菌 革兰染色革兰染色 +-球菌球菌 杆菌杆菌 球菌球菌 杆菌杆菌 触酶触酶 动力动力 DNA酶酶 发酵发酵 +-+-+-+-微微 链链 李李 棒棒 卡卡 奈奈 氧化酶氧化酶 非非 球球 球球 斯斯 状状 他他 瑟瑟 +-发发 菌菌 菌菌 特特 菌菌 莫莫 菌菌 弧弧 肠肠 酵酵
11、 科科 科科 菌菌 菌菌 拉拉 属属 菌菌 菌菌 菌菌 属属 等等 菌菌 科科 科科 现在学习的是第9页，共23页 革兰阳性球菌双岐索引鉴定革兰阳性球菌双岐索引鉴定现在学习的是第10页，共23页 葡萄球菌属双岐索引鉴定葡萄球菌属双岐索引鉴定现在学习的是第11页，共23页 链球菌属的双岐索引鉴定链球菌属的双岐索引鉴定现在学习的是第12页，共23页革兰阴性球菌的双岐索引鉴定革兰阴性球菌的双岐索引鉴定 革兰阴性球菌革兰阴性球菌 氧化酶氧化酶+DNA酶酶 +布兰汉菌属布兰汉菌属 营养琼脂上生长营养琼脂上生长 +其他奈瑟菌其他奈瑟菌 麦芽糖麦芽糖 +脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 现在学
12、习的是第13页，共23页革兰阴性杆菌初步分群的鉴定流程：革兰阴性杆菌初步分群的鉴定流程：革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌 +葡萄糖发酵葡萄糖发酵 氧化酶氧化酶 非发酵菌非发酵菌 +弧菌科弧菌科 肠杆菌科肠杆菌科现在学习的是第14页，共23页2.表解法表解法将各种细菌及其多种特性列成矩阵表格，使相互的区别点十分明显，将各种细菌及其多种特性列成矩阵表格，使相互的区别点十分明显，便于分析比较。此法对于相互区别比较复杂的细菌，如肠杆菌科的便于分析比较。此法对于相互区别比较复杂的细菌，如肠杆菌科的初步分属。初步分属。肠杆菌科初步分属肠杆菌科初步分属试验试验 埃希菌属埃希菌属 沙门菌属沙门菌属 克雷伯菌属变形杆菌
13、属克雷伯菌属变形杆菌属靛基质靛基质枸椽酸盐枸椽酸盐硫化氢硫化氢葡萄糖酸盐葡萄糖酸盐苯丙氨酸苯丙氨酸现在学习的是第15页，共23页3.数字编码鉴定法数字编码鉴定法编码是将某一细菌的全部生化反应结果转化成数字，经查编码是将某一细菌的全部生化反应结果转化成数字，经查阅检索手册又可将该数字转化成细菌名称阅检索手册又可将该数字转化成细菌名称编码的原则是：鉴定细菌的各种微量生化反应管组成系列试剂，编码的原则是：鉴定细菌的各种微量生化反应管组成系列试剂，将生化项目排序并依次进行分组，每组中的每个试验都有其一个将生化项目排序并依次进行分组，每组中的每个试验都有其一个数值代码。试验阳性时结果用其数值代码表示，试
14、验阴性时结果数值代码。试验阳性时结果用其数值代码表示，试验阴性时结果用用0表示，将每组中各试验结果加起来得一总值，这样按顺序各表示，将每组中各试验结果加起来得一总值，这样按顺序各组总值组成的数码组合，即为检索编码。查编码手册，该编码所组总值组成的数码组合，即为检索编码。查编码手册，该编码所对应的细菌名称即为鉴定结果。如肠杆菌科细菌生化编码鉴定：对应的细菌名称即为鉴定结果。如肠杆菌科细菌生化编码鉴定：现在学习的是第16页，共23页肠杆菌科细菌生化编码鉴定表 组别试验项目组别试验项目 代码结果结果代码总值代码结果结果代码总值 硫化氢硫化氢 1 苯丙氨酸苯丙氨酸 葡糖酸盐葡糖酸盐 靛基质靛基质 甲基
15、红甲基红 枸橼酸盐枸橼酸盐 尿素尿素 动力动力 产气产气 赖氨酸赖氨酸 鸟氨酸鸟氨酸 棉子糖棉子糖 山梨醇山梨醇 侧金花醇侧金花醇 木胶糖木胶糖 现在学习的是第17页，共23页数字编码结果判定数字编码结果判定 根据试验结果判定数码组合根据试验结果判定数码组合为，查编码手册，即可找到对应的细为，查编码手册，即可找到对应的细菌。菌。数字编码鉴定己有商品成套供应，由于操作简单，数字编码鉴定己有商品成套供应，由于操作简单，鉴定方法易于掌握，被临床实验室广泛采用鉴定方法易于掌握，被临床实验室广泛采用这种数码分析与电脑分析软件配套，形成了半自动这种数码分析与电脑分析软件配套，形成了半自动或全自动细菌分析系
16、统。或全自动细菌分析系统。现在学习的是第18页，共23页四.临床标本的采集与处理对感染性疾病进行病原检查和鉴定，须通过采集病人的标本，经系列实验，才能获得明确的病原学诊断。标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的标本可导致假阴性，假阳性结果的出现，因此在标本采集，送检，保存等各个环节都要规范操作，严格控制，是确保实验结果准确可靠的前提。现在学习的是第19页，共23页标本采集的一般原则早期采集采集时间最好是病程早期，急性期或症状典早期采集采集时间最好是病程早期，急性期或症状典型时，而且必须在使用抗生素或其它抗菌药物之前采集。型时，而且必须在使用抗生素或其它抗菌药物之前采集。无菌采集采集的标本
17、应无外源性污染无菌采集采集的标本应无外源性污染根据目的菌的特性用不同的方法采集厌氧菌，需氧菌或兼根据目的菌的特性用不同的方法采集厌氧菌，需氧菌或兼性厌氧菌，以及型菌采用的方法不同性厌氧菌，以及型菌采用的方法不同采集适量标本采集量不应过少，而且要有代表性，采集适量标本采集量不应过少，而且要有代表性，同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本同时有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本安全采集采集标本时不仅要防止皮肤和粘膜正常菌群对安全采集采集标本时不仅要防止皮肤和粘膜正常菌群对标本的污染，同时也要注意安全，防止传播和自身感染标本的污染，同时也要注意安全，防止传播和自身感染现在学习的是第20
18、页，共23页标本的处理一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌等应保温并立即一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌等应保温并立即送检而其他所有的标本采集后最好在小时内送到实送检而其他所有的标本采集后最好在小时内送到实验室若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存验室若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过小时小时病人标本中可能含在大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必病人标本中可能含在大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必须注意安全防护标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包须注意安全防护标本切勿污染容器的瓶口和外
19、壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出对于烈性传染病标本运装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送接用抽取标本的注射器运送现在学习的是第21页，共23页 革兰阳性球菌革兰阳性球菌 触酶触酶链球菌科链球菌科 +葡萄糖发酵葡萄糖发酵微球菌微球菌 +玻片凝固酶玻片凝固酶金葡金葡试管凝固酶试管凝固酶 金金 葡葡+新生霉素新生霉素 表葡表葡腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌 SR现在学习的是第22页，共23页感谢大家观看现在学习的是第23页，共23页