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1、关于细菌的染色技术及大小的测定第一页，讲稿共十五页哦第一部分第一部分 细菌的染色技术细菌的染色技术目的要求目的要求染色剂和染色的原理染色剂和染色的原理实验材料实验材料实验程序实验程序第二页，讲稿共十五页哦目的要求目的要求掌握微生物的染色原理掌握微生物的染色原理掌握染色的基本操作技术掌握染色的基本操作技术掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法第三页，讲稿共十五页哦染色剂和染色原理染色剂和染色原理微生物染色的基本原理：细菌机体无色透明，与背景反差小，可将细微生物染色的基本原理：细菌机体无色透明，与背景反差小，可将细菌染色，增加其反差；细菌在通常培养状态下总带负电荷
2、，故可用带菌染色，增加其反差；细菌在通常培养状态下总带负电荷，故可用带正电荷的碱性染料染色。正电荷的碱性染料染色。染色剂染色剂 染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型：染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型：1.酸性染料：酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。2.碱性染料：碱性染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。3.中性（复合）染料：中性（复合）染料：如伊红、美兰等，如伊红、美兰等，Wright
3、染料和染料和Gimsa染料等染料等（常用于细胞核染色）。（常用于细胞核染色）。4.单纯染料：单纯染料：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类的染料。的染料。第四页，讲稿共十五页哦染色剂和染色原理染色剂和染色原理微生物染色常用染料如下表：微生物染色常用染料如下表：第五页，讲稿共十五页哦实验材料实验材料显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯。接种环、载玻片、酒精灯。石炭酸复红染液、草酸铵结晶紫染液、革氏石炭酸复红染液、
4、草酸铵结晶紫染液、革氏碘液、碘液、95乙醇、蕃红染液乙醇、蕃红染液菌种：枯草杆菌、大肠杆菌菌种：枯草杆菌、大肠杆菌第六页，讲稿共十五页哦实验程序实验程序 （细菌染色的方法和步骤）（细菌染色的方法和步骤）细菌染色的方法细菌染色的方法:1.简单染色法：简单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大小、形状和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。小、形状和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。2.复染色法：复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染
5、色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。染色技术的一般过程染色技术的一般过程 涂片干燥固定染色媒染脱色复染水涂片干燥固定染色媒染脱色复染水洗干燥镜检洗干燥镜检第七页，讲稿共十五页哦实验程序实验程序 （简单染色的方法和步骤）（简单染色的方法和步骤）简单染色法简单染色法(一般染色法一般染色法)1.涂片涂片2.干燥：干燥：自然晾干或酒精灯高自然晾干或酒精灯高处微微加热。处微微加热。3.固定固定4.染色：染色：在整个涂面上滴加染在整个涂面上滴加染色液，染色色液
6、，染色min。5.水洗：水洗：倾去染液，用自来水细倾去染液，用自来水细流冲洗至流下的水中无染料颜色为流冲洗至流下的水中无染料颜色为止。止。6.吸干吸干7.镜检镜检第八页，讲稿共十五页哦实验程序实验程序 （革兰氏染色的方法和步骤）（革兰氏染色的方法和步骤）革兰氏（革兰氏（Gram）染色法）染色法 1.涂片、干燥、固定涂片、干燥、固定 2.初染：初染：在做好的涂面上滴加草酸铵在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液染结晶紫染液染1min，倾去染液，流，倾去染液，流水冲洗至无紫色。水冲洗至无紫色。3.媒染：媒染：加革氏碘液媒染加革氏碘液媒染1min，水洗。，水洗。4.脱色：脱色：除去残水后，滴加除去残水后
7、，滴加95%酒精酒精进行脱色约进行脱色约30s45s，接着立即用，接着立即用流水冲洗。流水冲洗。5.复染：复染：滴加番红染色液染滴加番红染色液染1min，水，水洗后用吸水纸吸干。洗后用吸水纸吸干。6.镜检：镜检：观观察染色结果并绘图。察染色结果并绘图。第九页，讲稿共十五页哦第二部分第二部分 细菌大小的测定细菌大小的测定目的要求目的要求学习使用目测微尺和物测微尺在显微镜学习使用目测微尺和物测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。下测定微生物大小的方法。第十页，讲稿共十五页哦测定的工具：测定的工具：目测微尺目测微尺和和物测物测微尺微尺目测微尺目测微尺是一圆形玻片，其中央刻是一圆形玻片，其中央刻有有5
8、mm长、等分为长、等分为50格的标尺，每格格的标尺，每格的长度随使用目镜和物镜的放大倍数的长度随使用目镜和物镜的放大倍数及镜筒长度而定。及镜筒长度而定。使用前用物镜测微使用前用物镜测微尺标定尺标定，用时放在目镜内。，用时放在目镜内。物测微尺物测微尺是一厚玻片，中央有一圆是一厚玻片，中央有一圆形盖玻片，中央刻有形盖玻片，中央刻有1mm长的标尺，长的标尺，等分为等分为100格，每格为格，每格为10m用以标定用以标定目测微尺在不同放大倍数下每格的目测微尺在不同放大倍数下每格的实际长度。实际长度。第十一页，讲稿共十五页哦目测微尺的标定：目测微尺的标定：将目测微尺装入目镜的隔板上，刻度朝下；把将目测微尺
9、装入目镜的隔板上，刻度朝下；把物测微尺放在载物台上，刻度朝上。物测微尺放在载物台上，刻度朝上。用低倍镜找到物测微尺的刻度，移动物测微尺用低倍镜找到物测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺使两者的和目测微尺使两者的第一条刻度线重合第一条刻度线重合，顺着，顺着刻度找出刻度找出第二条第二条完全重合完全重合完全重合完全重合的刻度线的刻度线。计算两刻度间目测微尺的格数和物测计算两刻度间目测微尺的格数和物测 微尺的格数。微尺的格数。由于物测微尺的刻度每格长由于物测微尺的刻度每格长10m，得，得第十二页，讲稿共十五页哦菌体大小的测定菌体大小的测定取下物测微尺，将细菌染色标本置取下物测微尺，将细菌染色标本置于载物台上，然后在油镜下用目镜于载物台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。测微尺测量菌体的长和宽。注意：注意：校正目测微尺必须针对特定的显微镜校正目测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情度等）进行，而且只能在这特定的情况下才可重复使用。况下才可重复使用。第十三页，讲稿共十五页哦实实 验验 三三结结 束束第十四页，讲稿共十五页哦感谢大家观看第十五页，讲稿共十五页哦