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1、关于高中生物第五章第二节多聚酶链式反应扩增NDA片段1新人教版选修1现在学习的是第1页，共30页分子生物学研究中最强大的实验技术之一分子生物学研究中最强大的实验技术之一分子生物学研究中最强大的实验技术之一分子生物学研究中最强大的实验技术之一其本质是在体外模拟胞内其本质是在体外模拟胞内其本质是在体外模拟胞内其本质是在体外模拟胞内DNADNADNADNA分子复制的过程分子复制的过程分子复制的过程分子复制的过程美美美美国国国国科科科科学学学学家家家家穆穆穆穆利利利利斯斯斯斯(K K K K.B B B B.M M M Mu u u ul l l ll l l li i i is s s s)发发发发
2、明明明明了了了了P P P PC C C CR R R R技技技技术术术术,1 1 1 19 9 9 99 9 9 93 3 3 3年年年年诺诺诺诺贝贝贝贝尔尔尔尔奖奖奖奖 基础知识基础知识现在学习的是第2页，共30页.DNA.DNA.DNA.DNA分子的结构分子的结构分子的结构分子的结构C C C C C C、H H H H、O O O O、N N N N、P P P P1.1.1.1.元素组成：元素组成：元素组成：元素组成：元素组成：元素组成：脱氧核苷酸脱氧核苷酸脱氧核苷酸脱氧核苷酸脱氧核苷酸脱氧核苷酸2.2.2.2.2.2.基本单位基本单位基本单位基本单位基本单位基本单位:脱氧脱氧脱氧脱
3、氧核苷酸核苷酸核苷酸核苷酸脱氧核苷脱氧核苷脱氧核苷脱氧核苷磷酸磷酸磷酸磷酸脱氧核糖脱氧核糖脱氧核糖脱氧核糖含氮碱基含氮碱基含氮碱基含氮碱基嘌呤嘌呤嘌呤嘌呤嘧啶嘧啶嘧啶嘧啶腺嘌呤（腺嘌呤（腺嘌呤（腺嘌呤（A A A A）鸟嘌呤（鸟嘌呤（鸟嘌呤（鸟嘌呤（G G G G）胞嘧啶（胞嘧啶（胞嘧啶（胞嘧啶（C C C C）胸腺嘧啶（胸腺嘧啶（胸腺嘧啶（胸腺嘧啶（T T T T）现在学习的是第3页，共30页通常将通常将通常将通常将DNADNADNADNA的的的的羟基羟基羟基羟基“OH”OH”OH”OH”末端称为末端称为末端称为末端称为3333端，端，端，端，而磷酸基团的末端称为而磷酸基团的末端称为而磷酸基
4、团的末端称为而磷酸基团的末端称为5555端端端端3.3.3.3.3.3.多脱氧核苷酸链得形成多脱氧核苷酸链得形成多脱氧核苷酸链得形成多脱氧核苷酸链得形成多脱氧核苷酸链得形成多脱氧核苷酸链得形成多脱氧核苷酸链结构简图多脱氧核苷酸链结构简图多脱氧核苷酸链结构简图多脱氧核苷酸链结构简图磷酸二酯键磷酸二酯键现在学习的是第4页，共30页4.DNA4.DNA4.DNA4.DNA4.DNA4.DNA分子的双螺旋结构分子的双螺旋结构分子的双螺旋结构分子的双螺旋结构分子的双螺旋结构分子的双螺旋结构DNADNADNADNA分子是由分子是由分子是由分子是由 的（即一条链为的（即一条链为33335555，另一条链为，
5、另一条链为55553 3）脱氧核苷酸长链盘旋而成）脱氧核苷酸长链盘旋而成）脱氧核苷酸长链盘旋而成）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则的规则的规则的规则 结构。结构。与与与与 交替连结，排列在外侧，构交替连结，排列在外侧，构交替连结，排列在外侧，构交替连结，排列在外侧，构成基本骨架；成基本骨架；成基本骨架；成基本骨架；排列在链的内侧。排列在链的内侧。排列在链的内侧。排列在链的内侧。两条链上的碱基通过两条链上的碱基通过两条链上的碱基通过两条链上的碱基通过 连结起来，形成碱基对。连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与 配对，配对，配对，配对，
6、一定同胞嘧啶配对。一定同胞嘧啶配对。双螺旋双螺旋两条反向平行两条反向平行脱氧核糖脱氧核糖磷酸磷酸碱基碱基氢键氢键胸腺嘧啶胸腺嘧啶鸟嘌呤鸟嘌呤现在学习的是第5页，共30页.DNA.DNA.DNA.DNA的复制的复制的复制的复制2.2.2.2.时期时期时期时期时期时期有丝分裂间期或减数第一次分裂前的间期。有丝分裂间期或减数第一次分裂前的间期。有丝分裂间期或减数第一次分裂前的间期。有丝分裂间期或减数第一次分裂前的间期。3.3.3.3.场所场所场所场所场所场所细胞核（主要）、线粒体、叶绿体。细胞核（主要）、线粒体、叶绿体。细胞核（主要）、线粒体、叶绿体。细胞核（主要）、线粒体、叶绿体。1.1.1.1.
7、概念概念概念概念概念概念由一个由一个由一个由一个DNADNADNADNA形成两个完全相同的形成两个完全相同的形成两个完全相同的形成两个完全相同的DNADNADNADNA的过程。的过程。的过程。的过程。4.4.4.4.基本条件基本条件基本条件基本条件酶酶酶酶:解旋酶、解旋酶、解旋酶、解旋酶、DNADNADNADNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶能量能量能量能量:ATPATPATPATP原料原料原料原料:四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸模板模板模板模板:DNADNADNADNA的两条链的两条链的两条链的两条链现在学习的是第6页，共30页.边解旋边复制边解旋边复制边解旋边复制边解旋
8、边复制(过程）过程）过程）过程）5.5.5.5.复制特点复制特点复制特点复制特点复制特点复制特点.半保留复制（结果）半保留复制（结果）半保留复制（结果）半保留复制（结果）6.6.6.6.遵循原则：遵循原则：遵循原则：遵循原则：遵循原则：遵循原则：碱基互补配对原则碱基互补配对原则碱基互补配对原则碱基互补配对原则7.7.7.7.精确复制的原因精确复制的原因精确复制的原因精确复制的原因8.8.8.8.8.8.复制的意义复制的意义复制的意义复制的意义复制的意义复制的意义DNADNADNADNA分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代，从而保持了遗传分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代，从而保持了遗传分
9、子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代，从而保持了遗传分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代，从而保持了遗传信息的连续性信息的连续性信息的连续性信息的连续性规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行现在学习的是第7页，共30页小结：胞内小结：胞内小结：胞内小结：胞内DNADNADNADNA复制的基本知识复制的基本知识复制的基本知识
10、复制的基本知识使使DNA聚合酶能够从引物的聚合酶能够从引物的3端开始连接脱氧核苷酸端开始连接脱氧核苷酸引物引物引物引物提供能量提供能量ATPATPATPATP催化合成催化合成DNA子链子链 DNADNADNADNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶合成子链的原料合成子链的原料 4 4 4 4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸提供提供DNA复制的模板复制的模板 DNADNADNADNA母链母链母链母链打开打开DNA双链双链 解旋酶解旋酶解旋酶解旋酶在在DNADNA复制中的作用复制中的作用参与的成分参与的成分现在学习的是第8页，共30页.PCR(.PCR(.PCR(.PCR(多聚酶链式反应）多
11、聚酶链式反应）多聚酶链式反应）多聚酶链式反应）2.Taq DNA2.Taq DNA2.Taq DNA2.Taq DNA聚合酶特性聚合酶特性聚合酶特性聚合酶特性聚合酶特性聚合酶特性 高温的高温的高温的高温的Taq DNATaq DNATaq DNATaq DNA聚合酶解决了高温导致聚合酶解决了高温导致聚合酶解决了高温导致聚合酶解决了高温导致DNADNADNADNA聚合酶失聚合酶失聚合酶失聚合酶失活的问题，促成了活的问题，促成了活的问题，促成了活的问题，促成了PCRPCRPCRPCR技术的自动化技术的自动化技术的自动化技术的自动化 不能从头合成不能从头合成不能从头合成不能从头合成DNADNADNA
12、DNA，只能从，只能从，只能从，只能从DNADNADNADNA母链的的母链的的母链的的母链的的3333端开始延端开始延端开始延端开始延伸伸伸伸DNADNADNADNA链链链链，或者，或者，或者，或者总是从子链的总是从子链的总是从子链的总是从子链的5555端向端向端向端向3333端延伸端延伸端延伸端延伸因此，因此，因此，因此，DNADNADNADNA复制复制复制复制需要引物。需要引物。需要引物。需要引物。1.1.1.1.1.1.定义：定义：定义：定义：是一种体外迅速扩增是一种体外迅速扩增DNADNA片段的技术。能片段的技术。能以极少量的以极少量的DNADNA为模板，在几小时内复制为模板，在几小时
13、内复制出上百万份的出上百万份的DNADNA拷贝。拷贝。现在学习的是第9页，共30页现在学习的是第10页，共30页3.PCR3.PCR3.PCR3.PCR3.PCR3.PCR原理原理原理原理原理原理在在在在80808080100C100C100C100C的温度范围内，的温度范围内，DNADNA的双螺旋结构将解体，双的双螺旋结构将解体，双的双螺旋结构将解体，双的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。链分开，这个过程称为变性。链分开，这个过程称为变性。链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条当温度缓慢降低后，两条彼此分离的彼此分离的DNADNADNADNA链又会重新结链又会重新结链又
14、会重新结链又会重新结合成双链。合成双链。合成双链。合成双链。PCRPCR利用了利用了利用了利用了DNADNADNADNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的解聚与结合，现在使用的PCRPCR仪实质上也是一台能够自动调控仪实质上也是一台能够自动调控仪实质上也是一台能够自动调控仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。温度的仪器。温度的仪器。温度的仪器。现在学习的是第11页，共30页4.4.4.4.4.4.需要为需要为需要为需要为PCRPCRPCRPCR反应提供的物质反应提供的物质反应提供的物质反应提供的物质反应提供的物质反应提供的物质缓
15、冲液、缓冲液、缓冲液、DNADNADNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的苷酸，耐热的苷酸，耐热的DNADNADNA聚合酶，同时通过控制温度使聚合酶，同时通过控制温度使聚合酶，同时通过控制温度使DNADNADNA复制在体外反复进复制在体外反复进复制在体外反复进行。行。行。PCRPCRPCR技术是技术是技术是808080年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产
16、率高、快速、敏感、产率高、快速、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出。简便、重复性好、易自动化等突出。简便、重复性好、易自动化等突出。5.PCR5.PCR5.PCR5.PCR5.PCR5.PCR技术的特点：技术的特点：技术的特点：技术的特点：现在学习的是第12页，共30页6.6.6.6.细胞内和细胞外细胞内和细胞外细胞内和细胞外细胞内和细胞外细胞内和细胞外细胞内和细胞外DNADNADNADNADNADNA复制环境的区别复制环境的区别复制环境的区别复制环境的区别体内体内DNADNA的复制的复制PCRPCR模板(母链)细胞内源细胞内源外源加入外源加入引物引物合成酶引物合成酶外源加入外
17、源加入原料:dNTP细胞内源细胞内源外源加入外源加入聚合酶细胞内源细胞内源外源加入外源加入反应环境细胞内的环境细胞内的环境缓冲液缓冲液现在学习的是第13页，共30页PCRPCRPCR过程需要的引物不是过程需要的引物不是过程需要的引物不是过程需要的引物不是过程需要的引物不是过程需要的引物不是RNARNA，而是人工合成的，而是人工合成的，而是人工合成的，而是人工合成的DNADNADNA单链，其长度通常为单链，其长度通常为单链，其长度通常为单链，其长度通常为单链，其长度通常为单链，其长度通常为2020303030个脱氧核苷酸个脱氧核苷酸个脱氧核苷酸个脱氧核苷酸个脱氧核苷酸个脱氧核苷酸7.7.7.7.
18、7.7.细胞内复制和细胞内复制和细胞内复制和细胞内复制和PCRPCRPCRPCR不同点不同点不同点不同点不同点不同点PCRPCRPCR过程中过程中过程中过程中DNADNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的温度的控制来实现的温度的控制来实现的温度的控制来实现的8.PCR8.PCR8.PCR8.PCR的重要应用：的重要应用：的重要应用：的重要应用：的重要应用：的重要应用：广泛应用于遗传病的诊断、刑侦广泛应用于遗传病的诊断、刑侦广泛应用于遗传病的诊断、刑侦广泛应用于遗传病的诊断、刑
19、侦广泛应用于遗传病的诊断、刑侦广泛应用于遗传病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和破案、古生物学、基因克隆和破案、古生物学、基因克隆和破案、古生物学、基因克隆和破案、古生物学、基因克隆和破案、古生物学、基因克隆和DNADNA序列测定等。序列测定等。序列测定等。序列测定等。现在学习的是第14页，共30页1 1、PCRPCR仪仪.设备及用具设备及用具设备及用具设备及用具实质上一台能够实质上一台能够实质上一台能够实质上一台能够自动调控温度自动调控温度自动调控温度自动调控温度的仪器。的仪器。的仪器。的仪器。实验操作实验操作现在学习的是第15页，共30页2 2、微量离心管、微量离心管一种薄壁塑料管，总
20、容积为一种薄壁塑料管，总容积为一种薄壁塑料管，总容积为一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml3 3 3、微量移液器、微量移液器用于定量转移用于定量转移用于定量转移用于定量转移PCRPCRPCRPCR配方中的液体，其上的一次性配方中的液体，其上的一次性配方中的液体，其上的一次性配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次。吸液枪头用一次更换一次。吸液枪头用一次更换一次。吸液枪头用一次更换一次。现在学习的是第16页，共30页1.1.1.准备准备2.2.2.移液移液移液.实验操作步骤实验操作步骤实验操作步骤实验操作步骤按照按照按照按照PCRPCRPCRPCR反应体系的配
21、方将所需用的试剂摆放在实反应体系的配方将所需用的试剂摆放在实反应体系的配方将所需用的试剂摆放在实反应体系的配方将所需用的试剂摆放在实验桌上。验桌上。验桌上。验桌上。用微量移液器按照用微量移液器按照用微量移液器按照用微量移液器按照PCRPCRPCRPCR反应体系配方往微量离心管里面加反应体系配方往微量离心管里面加反应体系配方往微量离心管里面加反应体系配方往微量离心管里面加入各种试剂。入各种试剂。入各种试剂。入各种试剂。混合后盖严微量离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁。混合后盖严微量离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁。混合后盖严微量离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁。混合后盖严微量离心管口的盖子，
22、用手指轻轻弹击管壁。3.3.3.混合混合混合过程：将微量离心管放在离心机上过程：将微量离心管放在离心机上过程：将微量离心管放在离心机上过程：将微量离心管放在离心机上,离心约离心约离心约离心约10s10s10s10s。4.4.离心离心离心离心目的：使反应液体集中在离心管底部，提高反应离心目的：使反应液体集中在离心管底部，提高反应离心目的：使反应液体集中在离心管底部，提高反应离心目的：使反应液体集中在离心管底部，提高反应效果。效果。效果。效果。现在学习的是第17页，共30页将离心管放入将离心管放入将离心管放入将离心管放入PCRPCRPCRPCR仪上，设置好仪上，设置好仪上，设置好仪上，设置好PCR
23、PCRPCRPCR仪的循环程序。仪的循环程序。仪的循环程序。仪的循环程序。5.5.5.反应反应反应循环数循环数循环数循环数变性变性变性变性复性复性复性复性延伸延伸延伸延伸第一次第一次第一次第一次94949494，10min10min10min10min30303030次次次次94949494，30s30s30s30s55555555，30s30s30s30s72727272，1min1min1min1min最后一次最后一次最后一次最后一次94949494，1min1min1min1min55555555，30s30s30s30s72727272，1min1min1min1minPCRPCRPC
24、RPCR一般经历一般经历一般经历一般经历三十多次三十多次三十多次三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤循环，每次循环可以分为三个基本步骤循环，每次循环可以分为三个基本步骤循环，每次循环可以分为三个基本步骤变性、复性和延伸变性、复性和延伸变性、复性和延伸变性、复性和延伸.现在学习的是第18页，共30页.变性（模板变性（模板变性（模板变性（模板DNADNADNADNA解旋）解旋）解旋）解旋）模板模板模板模板DNADNADNADNA经加热至经加热至经加热至经加热至909090900 0 0 0C C C C以上。一定时间后，使模板以上。一定时间后，使模板以上。一定时间后，使模板以上。一定时间后，
25、使模板DNADNADNADNA双链或经双链或经双链或经双链或经PCRPCRPCRPCR扩扩扩扩增形成的双链增形成的双链增形成的双链增形成的双链DNADNADNADNA解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮解离，使成为单链，以便于它与引物结合，为下轮反应作准备。反应作准备。反应作准备。反应作准备。.复性（退火）复性（退火）复性（退火）复性（退火）模板模板模板模板DNADNADNADNA经加热变性成单链后，温度降到经加热变性成单链后，温度降到经加热变性成单链后，温度降到经加热变性成单链后，温度降到500C
26、500C500C500C左右，引物与模板左右，引物与模板左右，引物与模板左右，引物与模板DNADNADNADNA单链的互补序列配对结合。单链的互补序列配对结合。单链的互补序列配对结合。单链的互补序列配对结合。.延伸延伸延伸延伸延伸延伸DNADNADNADNA模板引物结合物在模板引物结合物在模板引物结合物在模板引物结合物在TaqDNATaqDNATaqDNATaqDNA聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，聚合酶的作用下以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条以母链为模板，按碱基互补配对的原
27、则与半保留复制的原理，合成一条以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条以母链为模板，按碱基互补配对的原则与半保留复制的原理，合成一条新的新的新的新的DNADNADNADNA链。链。链。链。现在学习的是第19页，共30页模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链PCR PCR PCR PCR 循环第一步：高温变性循环第一步：高温变性循环第一步：高温变性循环第一步：高温变性现在学习的是第20页，共30页模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链引物引物引物引物引物引物 引物引物引物引物引物引物 55553333555
28、555553333555533333333PCR PCR PCR PCR 循环第二步循环第二步循环第二步循环第二步 ：引物与靶序列退火：引物与靶序列退火：引物与靶序列退火：引物与靶序列退火现在学习的是第21页，共30页模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链引物引物引物引物引物引物引物引物引物引物引物引物55553 3 3 3555555553333555533333333Taq DNATaq DNATaq DNATaq DNATaq DNATaq DNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶PCR PCR PCR PCR 循环第三步循环第三步循环第三步循环第三步
29、 ：引物延伸：引物延伸：引物延伸：引物延伸现在学习的是第22页，共30页模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链模板链第第第第1 1 1 1个个个个PCRPCRPCRPCR循环完成后循环完成后循环完成后循环完成后 ：得到两个靶序列：得到两个靶序列：得到两个靶序列：得到两个靶序列现在学习的是第23页，共30页PCRPCRPCRPCR技术技术高度灵敏，高度灵敏，高度灵敏，高度灵敏，为了避免外源为了避免外源DNADNADNADNA等因素的污染而造成干等因素的污染而造成干等因素的污染而造成干等因素的污染而造成干扰实验，扰实验，扰实验，扰实验，PCRPCRPCRPCR操作时要注
30、意做到：操作时要注意做到：6.6.6.注意事项注意事项隔离操作区，所用微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用隔离操作区，所用微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用隔离操作区，所用微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用隔离操作区，所用微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用必须进行高压灭菌；必须进行高压灭菌；必须进行高压灭菌；必须进行高压灭菌；分装试剂，简化操作程序，使用一次性枪头分装试剂，简化操作程序，使用一次性枪头分装试剂，简化操作程序，使用一次性枪头分装试剂，简化操作程序，使用一次性枪头现在学习的是第24页，共30页.理论上理论上理论上理论上DNADNADNADNA扩增数目的
31、计算扩增数目的计算扩增数目的计算扩增数目的计算课题成果评价课题成果评价1.1.1.一条一条DNADNADNA，复制，复制n n n次，次，次，DNADNADNA为为2 2 2n nn2.a2.a2.a条条DNADNADNA，复制，复制，复制n n n次，次，DNADNA为为为aa2 2 2nn.实验中实验中实验中实验中DNADNADNADNA含量的测定含量的测定含量的测定含量的测定1.1.原理原理原理可以通过计算可以通过计算DNADNADNADNA含量来评价扩增的效果，含量来评价扩增的效果，含量来评价扩增的效果，含量来评价扩增的效果，DNADNADNADNA在在260nm260nm的紫外线波段
32、有一强烈的吸收峰，峰值的大的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与小与小与小与DNADNADNADNA的含量有关。的含量有关。的含量有关。的含量有关。现在学习的是第25页，共30页对照调零对照调零以蒸馏水作为空白对照，在波长以蒸馏水作为空白对照，在波长以蒸馏水作为空白对照，在波长以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm260nm260nm260nm处，将紫外分光处，将紫外分光处，将紫外分光处，将紫外分光光度计的读数调节至零。光度计的读数调节至零。光度计的读数调节至零。光度计的读数调节至零。取取取取DNADNADNADN
33、A稀释液稀释液稀释液稀释液100uL100uL100uL100uL至比色杯中，测定至比色杯中，测定至比色杯中，测定至比色杯中，测定260nm260nm260nm260nm处的光吸收值处的光吸收值处的光吸收值处的光吸收值计算计算DNADNADNADNA含量含量含量含量(g g g g)50(260nm50(260nm50(260nm50(260nm的读数的读数的读数的读数)稀释稀释稀释稀释倍数倍数倍数倍数50505050：1 1 1 1 g g g g/ml/ml/ml/ml的的的的DNADNADNADNA在厚度为在厚度为在厚度为在厚度为1cm1cm1cm1cm比色杯中的吸光值为比色杯中的吸光值
34、为比色杯中的吸光值为比色杯中的吸光值为0.020.020.020.022.2.过程过程稀释稀释2uLPCR2uLPCR2uLPCR2uLPCR反应液，加入反应液，加入反应液，加入反应液，加入98uL98uL98uL98uL蒸馏水，即将样品进行蒸馏水，即将样品进行蒸馏水，即将样品进行蒸馏水，即将样品进行50505050倍稀释倍稀释倍稀释倍稀释.现在学习的是第26页，共30页光光吸吸收收波长波长nmnm2602602402402202202802800.10.10.20.2现在学习的是第27页，共30页比色杯比色杯现在学习的是第28页，共30页课题延伸课题延伸PCRPCR技术是技术是8080年代中期发展起来的体外核酸扩增年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。技术。它具有特异、敏感、产率高、它具有特异、敏感、产率高、快速、快速、简便、重复性好、易自动化等突出特点简便、重复性好、易自动化等突出特点现在学习的是第29页，共30页感谢大家观看现在学习的是第30页，共30页