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1、关于真核基因转录调控现在学习的是第1页，共88页第一节第一节真核生物表达调控特点真核生物表达调控特点真核生物基因的表达调控系统远比真核生物基因的表达调控系统远比原核生物复杂原核生物复杂现在学习的是第2页，共88页真核生物和原核生物由于基本生活方式不真核生物和原核生物由于基本生活方式不同所决定基因表达调控上的巨大差别。同所决定基因表达调控上的巨大差别。原核生物原核生物的调控系统就是要在一个特定的的调控系统就是要在一个特定的环境中为细胞创造高速生长的条件，或使环境中为细胞创造高速生长的条件，或使细胞在受到损伤时，尽快得到修复，所以，细胞在受到损伤时，尽快得到修复，所以，原核生物基因表达的开关经常是
2、通过控制原核生物基因表达的开关经常是通过控制转录的起始来调节的。转录的起始来调节的。现在学习的是第3页，共88页真核生物真核生物（除酵母、藻类和原生动物等（除酵母、藻类和原生动物等单细胞类之外）主要由多细胞组成，每单细胞类之外）主要由多细胞组成，每个真核细胞所携带的基因数量及总基因个真核细胞所携带的基因数量及总基因组中蕴藏的遗传信息量都大大高于原核组中蕴藏的遗传信息量都大大高于原核生物。人类细胞单倍体基因组就包含有生物。人类细胞单倍体基因组就包含有3109bp总总DNA，约为大肠杆菌总，约为大肠杆菌总DNA的的1000倍，是噬菌体总倍，是噬菌体总DNA的的10万倍左右！万倍左右！现在学习的是第
3、4页，共88页真核基因表达调控的最显著特征是能在真核基因表达调控的最显著特征是能在特定时间、特定时间、特定的细胞中特定的细胞中激活特定的基因，从而实现激活特定的基因，从而实现预定预定的、的、有序的、不可逆转的分化、发育过程，并使生物的有序的、不可逆转的分化、发育过程，并使生物的组织和器官在一定的环境条件范围内保持正常功能。组织和器官在一定的环境条件范围内保持正常功能。现在学习的是第5页，共88页真核生物基因调控，根据其性质可分为两大类真核生物基因调控，根据其性质可分为两大类：第一类是第一类是瞬时调控瞬时调控或称可逆性调控，它或称可逆性调控，它相当于原核细胞对环境条件变化所做出相当于原核细胞对环
4、境条件变化所做出的反应，包括某种的反应，包括某种底物或激素水平升降底物或激素水平升降及及细胞周期不同阶段中酶活性和浓度细胞周期不同阶段中酶活性和浓度的的调节。调节。现在学习的是第6页，共88页第二类是第二类是发育调控发育调控或称不可逆调控，是或称不可逆调控，是真核基因调控的精髓真核基因调控的精髓部分，它决定了真部分，它决定了真核细胞生长、分化、发育的全部进程。核细胞生长、分化、发育的全部进程。现在学习的是第7页，共88页原核生物真核生物操纵元调控。操纵元调控。多样化调控，更为复杂。多样化调控，更为复杂。基因组小，大肠杆菌：总长基因组小，大肠杆菌：总长4.6106bp,编码编码4288个基因个基
5、因,每每个基因约个基因约1100bp。基基因因组组大大，人人类类基基因因组组全全长长3109 bp，编码，编码10万个基因，其余为重复序列。万个基因，其余为重复序列。基基因因分分布布在在同同一一染染色色体体上上，操操纵纵元控制。元控制。DNA与与组组蛋蛋白白结结合合成成染染色色质质，染染色色质质的的变变化化调调控控基基因因表表达达；基基因因分分布布在在不不同同的的染染色色体体上上，存存在在不不同同染染色色体体间间基基因因的的调调控控问问题。题。适应外界环境，操纵元调控表达。适应外界环境，操纵元调控表达。基基因因差差别别表表达达是是细细胞胞分分化化和和功功能能的的核核心。心。转录和翻译同时进行，
6、大部分为转录和翻译同时进行，大部分为转录水平调控。转录水平调控。转转录录和和翻翻译译在在时时间间和和空空间间上上均均不不同同，从从DNA到到蛋蛋白白质质的的各各层层次次上上都都有有调调控控，但多数为转录水平调控但多数为转录水平调控真核生物与原核生物的调控差异真核生物与原核生物的调控差异现在学习的是第8页，共88页一、真核基因表达调控的特点一、真核基因表达调控的特点(一一)真核基因表达调控的环节更多真核基因表达调控的环节更多基因表达是基因经过转录、翻译、产生有生物活基因表达是基因经过转录、翻译、产生有生物活性的蛋白质的整个过程。同原核生物一样，转录性的蛋白质的整个过程。同原核生物一样，转录依然是
7、真核生物基因表达调控的主要环节。依然是真核生物基因表达调控的主要环节。但真核基因转录发生在细胞核但真核基因转录发生在细胞核(线粒体基因的转线粒体基因的转录在线粒体内录在线粒体内)，翻译则多在胞浆，两个过程是，翻译则多在胞浆，两个过程是分开的，因此其调控增加了更多的环节和复杂性，分开的，因此其调控增加了更多的环节和复杂性，转录后的调控占有了更多的分量。转录后的调控占有了更多的分量。现在学习的是第9页，共88页现在学习的是第10页，共88页(二二)真核基因的转录与染色质的结构变化相真核基因的转录与染色质的结构变化相关关。真核基因组真核基因组DNA绝大部分都在细胞核内与绝大部分都在细胞核内与组蛋白组
8、蛋白等等结合成染色质。染色质的结构、染色质中结合成染色质。染色质的结构、染色质中DNA和组和组蛋白的结合状态都影响转录，有以下特点：蛋白的结合状态都影响转录，有以下特点：1.染色质结构影响基因转录染色质结构影响基因转录染色体结构复杂染色体结构复杂由由DNA、组蛋白、非组蛋白等大分子组、组蛋白、非组蛋白等大分子组成；成；DNA序列重复；基因不连续性，真核生物基因的不连续性序列重复；基因不连续性，真核生物基因的不连续性和转录后加工是真核基因有别于原核基因的重要特征。和转录后加工是真核基因有别于原核基因的重要特征。现在学习的是第11页，共88页2、存在许多基因家族、存在许多基因家族(genefami
9、ly)来源相同、结构相似、功能相关的基因来源相同、结构相似、功能相关的基因组成单一的组成单一的基因簇或称基因家族。基因簇或称基因家族。同一家族中的成员有时紧密地排列在一同一家族中的成员有时紧密地排列在一起，成为一个基因簇；更多的时候，它起，成为一个基因簇；更多的时候，它们却分散在同一染色体的不同部位，甚们却分散在同一染色体的不同部位，甚至位于不同的染色体上，具有各自不同至位于不同的染色体上，具有各自不同的表达调控模式。的表达调控模式。现在学习的是第12页，共88页3、组蛋白的作用：、组蛋白的作用：v组蛋白与组蛋白与DNA结合阻止结合阻止DNA上基因的转录，去除上基因的转录，去除组蛋白基因又能够
10、转录。组蛋白是碱性蛋白质，带组蛋白基因又能够转录。组蛋白是碱性蛋白质，带正电荷，可与正电荷，可与DNA链上带负电荷的磷酸基相结合，链上带负电荷的磷酸基相结合，从而遮蔽了从而遮蔽了DNA分子，妨碍了转录，可能扮演了非分子，妨碍了转录，可能扮演了非特异性阻遏蛋白的作用；特异性阻遏蛋白的作用；v染色质中的非组蛋白成分具有染色质中的非组蛋白成分具有组织细胞特异性组织细胞特异性，可能消除组蛋白的阻遏，起到特异性的去阻遏促可能消除组蛋白的阻遏，起到特异性的去阻遏促转录作用。转录作用。现在学习的是第13页，共88页v4.转录活跃的区域也常缺乏核小体的结构。转录活跃的区域也常缺乏核小体的结构。这表明核小体结构
11、影响基因转录。这表明核小体结构影响基因转录。5.转录活跃区域对核酸酶作用敏感度增加。转录活跃区域对核酸酶作用敏感度增加。活跃进行转录的染色质区域受活跃进行转录的染色质区域受DNase消化常出现消化常出现100200bp的的DNA片段，且长短不均一，说明其片段，且长短不均一，说明其DNA受组蛋白掩受组蛋白掩盖的结构有变化，出现了对盖的结构有变化，出现了对DNase高敏感点高敏感点(hypersensitivesite)。v这种高敏感点常出现在转录基因的这种高敏感点常出现在转录基因的5侧区、侧区、3末端或在基末端或在基因上，多在调控蛋白结合位点的附近，分析该区域核小因上，多在调控蛋白结合位点的附近
12、，分析该区域核小体的结构发生变化，可能有利于调控蛋白结合而促进转体的结构发生变化，可能有利于调控蛋白结合而促进转录。录。现在学习的是第14页，共88页6.DNA碱基修饰变化：碱基修饰变化：真核真核DNA中的中的胞嘧啶胞嘧啶约有约有5%被被甲基化为甲基化为5-甲基胞嘧啶甲基胞嘧啶(5methylcytidine,m5C)，而活跃转录的，而活跃转录的DNA段落中胞嘧啶甲段落中胞嘧啶甲基化程度常较低。这种甲基化最常发生在某些基因基化程度常较低。这种甲基化最常发生在某些基因5侧区的侧区的CG序列序列中中实验表明这段序列甲基化可使其后的基因不能转录，甲基实验表明这段序列甲基化可使其后的基因不能转录，甲基
13、化可能阻碍转录因子与化可能阻碍转录因子与DNA特定部位的结合从而影响转录。特定部位的结合从而影响转录。如果用基因打靶的方法除去主要的如果用基因打靶的方法除去主要的DNA甲基化酶，小鼠的胚胎甲基化酶，小鼠的胚胎就不能正常发育而死亡，可见就不能正常发育而死亡，可见DNA的甲基化对基因表达调控是的甲基化对基因表达调控是重要的。重要的。由此可见，染色质中的基因转录前先要有一个被激活的过由此可见，染色质中的基因转录前先要有一个被激活的过程，但目前对激活机制还缺乏认识。程，但目前对激活机制还缺乏认识。现在学习的是第15页，共88页(三三)真核基因表达以正性调控为主真核基因表达以正性调控为主真核真核RNA聚
14、合酶对启动子的亲和力很低，基本上不聚合酶对启动子的亲和力很低，基本上不依靠自身来起始转录，需要依赖多种激活蛋白的协依靠自身来起始转录，需要依赖多种激活蛋白的协同作用。同作用。真核基因调控中虽然也发现有负性调控元件，但其真核基因调控中虽然也发现有负性调控元件，但其存在并不普遍；存在并不普遍；现在学习的是第16页，共88页v真核基因转录表达的调控蛋白也有起阻遏和激活作真核基因转录表达的调控蛋白也有起阻遏和激活作用或兼有两种作用者，但总的是以用或兼有两种作用者，但总的是以激活蛋白激活蛋白的作用的作用为主。为主。v即多数真核基因在没有调控蛋白作用时是不转录即多数真核基因在没有调控蛋白作用时是不转录的，
15、需要表达时就要有激活的蛋白质来促进转录。的，需要表达时就要有激活的蛋白质来促进转录。因此，真核基因表达以正性调控为主导。因此，真核基因表达以正性调控为主导。现在学习的是第17页，共88页三、真核基因转录水平的调控三、真核基因转录水平的调控真核细胞的三种真核细胞的三种RNA聚合酶聚合酶(、和和)中，只有中，只有RNA聚合酶聚合酶能转录生成能转录生成mRNA，以下主要讨论，以下主要讨论RNA聚合酶聚合酶的转录调控。的转录调控。(一一)顺式作用元件顺式作用元件(cisactingelements)真核基因的顺式调控元件是基因周围能与特异转真核基因的顺式调控元件是基因周围能与特异转录因子结合而影响转录
16、的录因子结合而影响转录的DNA序列。其中主要是起序列。其中主要是起正性调控作用的顺式作用元件，包括启动子正性调控作用的顺式作用元件，包括启动子(promoter)、增强子、增强子(enhancer)；近年又发现起负性；近年又发现起负性调控作用的元件静止子调控作用的元件静止子(silencer)现在学习的是第18页，共88页1.启动子启动子与原核启动子的含义相同，是指与原核启动子的含义相同，是指RNA聚合酶结合并聚合酶结合并启动转录的启动转录的DNA序列。序列。但真核启动子间不像原核那样有明显共同一致的序但真核启动子间不像原核那样有明显共同一致的序列，而且单靠列，而且单靠RNA聚合酶难以结合聚合
17、酶难以结合DNA而起动转录，而起动转录，而是需要多种蛋白质因子的相互协调作用。而是需要多种蛋白质因子的相互协调作用。不同蛋白质因子又能与不同不同蛋白质因子又能与不同DNA序列相互作用；不序列相互作用；不同基因转录起始及其调控所需的蛋白因子也不完全相同基因转录起始及其调控所需的蛋白因子也不完全相同，因而不同启动子序列也很不相同，要比原核更复同，因而不同启动子序列也很不相同，要比原核更复杂、序列也更长。杂、序列也更长。现在学习的是第19页，共88页真核启动子一般包括转录起始点及其上游约真核启动子一般包括转录起始点及其上游约100200bp序列，包含有若干具有独立功能的序列，包含有若干具有独立功能的
18、DNA序列元件，每个元件约长序列元件，每个元件约长730bp。最常见的哺乳类最常见的哺乳类RNA聚合酶聚合酶启动子中的元件序启动子中的元件序列见下表。列见下表。现在学习的是第20页，共88页元件名称共同序列结合的蛋白因子名称分子量结合DNA长度TATAboxTATAAAATBP30,00010bpGCboxGGGCGGSP-1105,00020bpCAATboxGGCCAATCTCTF/NF160,00022bpOctamerATTTGCATOct-176,00010bpOct-253,00020bpkBGGGACTTTCCNFkB44,00010bpATFGTGACGTAFT?20bp哺乳类
19、哺乳类RNA聚合酶聚合酶启动子中的元件序列启动子中的元件序列现在学习的是第21页，共88页启动子中的元件可以分为两种：启动子中的元件可以分为两种：核心启动子元件核心启动子元件(corepromoterelement)指指RNA聚合酶起始转录所必需的最小的聚合酶起始转录所必需的最小的DNA序序列，包括转录起始点及其上游列，包括转录起始点及其上游25/30bp处的处的TATA盒。核心元件单独起作用时只能确定转录盒。核心元件单独起作用时只能确定转录起始位点和产生基础水平的转录。起始位点和产生基础水平的转录。现在学习的是第22页，共88页v上游启动子元件上游启动子元件(upstreampromoter
20、element)包括通常位于包括通常位于70bp附近的附近的CAAT盒和盒和GC盒、以盒、以及距转录起始点更远的上游元件。这些元件与相应的及距转录起始点更远的上游元件。这些元件与相应的蛋白因子结合能提高或改变转录效率。蛋白因子结合能提高或改变转录效率。不同基因具有不同的上游启动子元件，其位置也不不同基因具有不同的上游启动子元件，其位置也不相同，这使得不同的基因表达分别有不同的调控。相同，这使得不同的基因表达分别有不同的调控。现在学习的是第23页，共88页2.增强子增强子是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在是在SV40病毒中发现的长约病毒中发现
21、的长约200bp的一段的一段DNA，可，可使旁侧的基因转录提高使旁侧的基因转录提高100倍。倍。其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。增强子通常占了增强子。增强子通常占100200bp长度，也和长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为812bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。现在学习的是第24页，共88页增强子的作用有以下特点增强子的作用有以下特点：增强子提高同一条增强子提高同一条DNA链上基因转录效率，可以链上基因转录效率，可以远距离作用，通常可距
22、离远距离作用，通常可距离14kb、个别情况下离开所、个别情况下离开所调控的基因调控的基因30kb仍能发挥作用，而且在基因的上游或仍能发挥作用，而且在基因的上游或下游都能起作用。下游都能起作用。增强子作用与其序列的正反方向无关，将增强子方增强子作用与其序列的正反方向无关，将增强子方向倒置依然能起作用。而将启动子倒就不能起作用，向倒置依然能起作用。而将启动子倒就不能起作用，可见增强子与启动子是很不相同的。可见增强子与启动子是很不相同的。现在学习的是第25页，共88页增强子要有启动子才能发挥作用，没有启动子存增强子要有启动子才能发挥作用，没有启动子存在，增强子不能表现活性。在，增强子不能表现活性。但
23、增强子对启动子没有严格的专一性，同一增强子但增强子对启动子没有严格的专一性，同一增强子可以影响不同类型启动子的转录。可以影响不同类型启动子的转录。例如当含有增强子的病毒基因组整合入宿主细胞例如当含有增强子的病毒基因组整合入宿主细胞基因组时，能够增强整合区附近宿主某些基因的基因组时，能够增强整合区附近宿主某些基因的转录；当增强子随某些染色体段落移位时，也能转录；当增强子随某些染色体段落移位时，也能提高移到的新位置周围基因的转录。使某些癌基提高移到的新位置周围基因的转录。使某些癌基因转录表达增强，可能是肿瘤发生的因素之一。因转录表达增强，可能是肿瘤发生的因素之一。现在学习的是第26页，共88页v增
24、强子的作用机理虽然还不明确，但与其他顺增强子的作用机理虽然还不明确，但与其他顺式调控元件一样，必须与特定的蛋白质结合后才式调控元件一样，必须与特定的蛋白质结合后才能发挥增强转录的作用。能发挥增强转录的作用。v增强子一般具有组织或细胞特异性，许多增强子只在增强子一般具有组织或细胞特异性，许多增强子只在某些细胞或组织中表现活性，是由这些细胞或组织中某些细胞或组织中表现活性，是由这些细胞或组织中具有的特异性蛋白质因子所决定的。具有的特异性蛋白质因子所决定的。现在学习的是第27页，共88页增强子可能有如下增强子可能有如下3种作用机制：种作用机制：影响模板附近的影响模板附近的DNA双螺旋结构，导致双螺旋
25、结构，导致DNA双螺旋弯折或在反式因子的参与下，双螺旋弯折或在反式因子的参与下，以蛋白质之间的相互作用为媒介形成增强以蛋白质之间的相互作用为媒介形成增强子与启动子之间子与启动子之间“成环成环”连接，活化基因连接，活化基因转录；转录；现在学习的是第28页，共88页 将模板固定在细胞核内特定位置，如连接在核将模板固定在细胞核内特定位置，如连接在核将模板固定在细胞核内特定位置，如连接在核将模板固定在细胞核内特定位置，如连接在核基质上，有利于基质上，有利于基质上，有利于基质上，有利于DNADNA拓扑异构酶改变拓扑异构酶改变DNADNA双螺旋双螺旋双螺旋双螺旋结构的张力，促进结构的张力，促进结构的张力，
26、促进结构的张力，促进RNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶IIII在在在在DNADNA链上的结合链上的结合和滑动；和滑动；增强子区可以作为反式作用因子或增强子区可以作为反式作用因子或增强子区可以作为反式作用因子或增强子区可以作为反式作用因子或RNARNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶IIII进进进进入染色质结构的入染色质结构的入染色质结构的入染色质结构的“入口入口入口入口”。现在学习的是第29页，共88页3.静止子静止子最早在酵母中发现，以后在最早在酵母中发现，以后在T淋巴细胞的淋巴细胞的T抗原受抗原受体基因的转录和重排中证实这种负调控顺式元件体基因的转录和重排中证实这种负调控顺式元件的存在。的存在。静止子
27、的作用可不受序列方向的影响，也能远距离静止子的作用可不受序列方向的影响，也能远距离发挥作用，并可对异源基因的表达起作用。目前对发挥作用，并可对异源基因的表达起作用。目前对这种在基因转录降低或关闭中起作用的序列研究还这种在基因转录降低或关闭中起作用的序列研究还不多。不多。现在学习的是第30页，共88页第二节第二节 真核生物真核生物DNA水平上的基因表达水平上的基因表达调控调控现在学习的是第31页，共88页一、真核生物一、真核生物DNA水平上的基因表达调水平上的基因表达调控特点控特点 分子生物学的最新研究表明，在个体发育过程分子生物学的最新研究表明，在个体发育过程中，用来合成中，用来合成RNA的的
28、DNA模板模板也会发生也会发生规律性规律性变化变化，从而控制基因表达和生物体的发育。，从而控制基因表达和生物体的发育。现在学习的是第32页，共88页 高度重复基因高度重复基因的形成通常与个体分化阶的形成通常与个体分化阶段段DNA的某些变化有关。的某些变化有关。例如，一个成熟的红细胞能产生大量的例如，一个成熟的红细胞能产生大量的可翻译出成熟珠蛋白的可翻译出成熟珠蛋白的mRNA，而其前，而其前体细胞却不产生珠蛋白。许多情况下，体细胞却不产生珠蛋白。许多情况下，这种变化是由于基因本身或它的拷贝数这种变化是由于基因本身或它的拷贝数发生了永久性变化。发生了永久性变化。现在学习的是第33页，共88页这种这
29、种DNA水平水平的调控是真核生物发育调控的一的调控是真核生物发育调控的一种形式，它包括了种形式，它包括了基因丢失、扩增、重排和移位基因丢失、扩增、重排和移位等方式，通过这些方式可以消除或变换某些基因等方式，通过这些方式可以消除或变换某些基因并改变它们的活性。并改变它们的活性。这些调控方式与转录及翻译水平的调控是不同的，这些调控方式与转录及翻译水平的调控是不同的，因为它使基因组发生了改变。因为它使基因组发生了改变。现在学习的是第34页，共88页二、二、“开放开放”型活性染色质（型活性染色质（active chromatin）结构对转录的影响）结构对转录的影响真核基因的活跃转录是在常染色质上进真核
30、基因的活跃转录是在常染色质上进行的。转录发生之前，染色质常常会在行的。转录发生之前，染色质常常会在特定的区域被特定的区域被解旋松弛解旋松弛，形成，形成自由自由DNA。这种变化可能包括核小体结构的消除或这种变化可能包括核小体结构的消除或改变，改变，DNA本身局部结构的变化等，这本身局部结构的变化等，这些变化可导致些变化可导致结构基因暴露结构基因暴露，促进转录，促进转录因子与启动区因子与启动区DNA的结合，诱发基因转的结合，诱发基因转录。录。现在学习的是第35页，共88页用用DNA酶酶I处理各种组织的染色质时，发处理各种组织的染色质时，发现处于活跃状态的基因比非活跃状态的现处于活跃状态的基因比非活
31、跃状态的DNA更容易被更容易被DNA酶酶I所降解。所降解。鸡成红细胞鸡成红细胞（erythroblast）染色质中，）染色质中，-血红蛋白基因比卵清蛋白基因更容易血红蛋白基因比卵清蛋白基因更容易被被DNA酶酶I切割降解。切割降解。鸡输卵管细胞鸡输卵管细胞的染色质中被的染色质中被DNA酶酶I优优先降解的是卵清蛋白基因，而不是先降解的是卵清蛋白基因，而不是-血血红蛋白基因。红蛋白基因。现在学习的是第36页，共88页存在于存在于“灯刷型灯刷型”染色体染色体（lamp brush）上的环形结构可能与基因的活性转录有上的环形结构可能与基因的活性转录有关。关。“灯刷型灯刷型”染色体只有在两栖类动物卵染色体
32、只有在两栖类动物卵细胞发生减数分裂时才能被观察到，它细胞发生减数分裂时才能被观察到，它是染色体充分伸展时的一种形态。高倍是染色体充分伸展时的一种形态。高倍电镜下观察发现，灯刷型染色体上存在电镜下观察发现，灯刷型染色体上存在许多突起的许多突起的“泡泡”状或状或“环环”状结构，状结构，有时还能看到有时还能看到RNP沿着这些突起结构移沿着这些突起结构移动，表明这些动，表明这些DNA正在被正在被RNA聚合酶所聚合酶所转录。转录。现在学习的是第37页，共88页现在学习的是第38页，共88页三、基因扩增三、基因扩增基因扩增是指某些基因的拷贝数专一性基因扩增是指某些基因的拷贝数专一性大量增加的现象，它使细胞
33、在短期内产大量增加的现象，它使细胞在短期内产生大量的某个基因产物以满足生长发育生大量的某个基因产物以满足生长发育的需要，是基因活性调控的一种方式。的需要，是基因活性调控的一种方式。现在学习的是第39页，共88页两栖类和昆虫卵母细胞两栖类和昆虫卵母细胞rRNA基因的扩增基因的扩增非洲爪蟾的染色体上有约非洲爪蟾的染色体上有约450拷贝编码拷贝编码18SrRNA和和28SrRNA的的DNA，在卵母细胞中它们的拷贝数扩大，在卵母细胞中它们的拷贝数扩大了了1000倍。倍。一旦卵母细胞成熟，多余的一旦卵母细胞成熟，多余的rDNA就没有用了，将就没有用了，将被逐渐降解。受精之后，染色体被逐渐降解。受精之后，
34、染色体DNA开始复制，开始复制，并通过有丝分裂的方式，不断扩大细胞群体。在并通过有丝分裂的方式，不断扩大细胞群体。在此期间，多余的此期间，多余的rDNA继续被降解，直到分裂产生几继续被降解，直到分裂产生几百个细胞时，百个细胞时，rDNA的过剩现象就不复存在了。的过剩现象就不复存在了。现在学习的是第40页，共88页四、基因重排四、基因重排将一个基因从远离启动子的地方移到距将一个基因从远离启动子的地方移到距它很近的位点从而启动转录，这种方式它很近的位点从而启动转录，这种方式被称为基因重排。被称为基因重排。真核生物最典型的例子是免疫球蛋白在真核生物最典型的例子是免疫球蛋白在成熟过程中的重排以及酵母的
35、交配型转成熟过程中的重排以及酵母的交配型转变。变。现在学习的是第41页，共88页V、C和和J基因片段在胚胎细胞中相隔较远。编码产生免基因片段在胚胎细胞中相隔较远。编码产生免疫球蛋白的细胞发育分化时，通过染色体内疫球蛋白的细胞发育分化时，通过染色体内DNA重组把重组把4个相隔较远的基因片段连接在一起，从而产生了具有表达活性个相隔较远的基因片段连接在一起，从而产生了具有表达活性的免疫球蛋白基因。的免疫球蛋白基因。现在学习的是第42页，共88页五、五、DNA甲基化与基因活性的调控甲基化与基因活性的调控1、DNA的甲基化的甲基化DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一，它可能存在于所有高甲基化是最早发现的
36、修饰途径之一，它可能存在于所有高等生物中并与基因表达调控密切相关。等生物中并与基因表达调控密切相关。研究表明，研究表明，DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。诱导了基因的重新活化和表达。DNA甲基化能引起染色质结构、甲基化能引起染色质结构、DNA构象、构象、DNA稳定性及稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。CpG二核苷酸中胞嘧啶的甲基化导致了人体二核苷酸中胞嘧啶的甲基化导致了人体1/3以上由于碱基转以上由于碱基转换而引起的遗传病。换而引起的遗传病。现在学
37、习的是第43页，共88页DNA甲基化修饰现象广泛存在于多种甲基化修饰现象广泛存在于多种有机体中。有机体中。实验证明，这个过程不但与实验证明，这个过程不但与DNA复制复制起始及错误修正时的定位有关，还通过起始及错误修正时的定位有关，还通过改变基因的表达参与细胞的生长、发育改变基因的表达参与细胞的生长、发育过程及过程及X染色体失活等的调控。染色体失活等的调控。现在学习的是第44页，共88页DNA甲基化主要形成甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的）和少量的N6-甲基腺嘌呤甲基腺嘌呤（N6-mA）及）及7-甲基鸟嘌呤（甲基鸟嘌呤（7-mG）。）。在真核生物中，在真核生物中，5-甲
38、基胞嘧啶主要甲基胞嘧啶主要出现在出现在CpG序列、序列、CpXpG、CCA/TGG和和GATC中。因为高等生物中。因为高等生物CpG二核苷酸序列中的二核苷酸序列中的C通常是甲通常是甲基化的，极易自发脱氨，生成基化的，极易自发脱氨，生成胸腺胸腺嘧啶嘧啶。由于这些由于这些CpG二核苷酸通常成串二核苷酸通常成串出现在出现在DNA上，这段序列往往被称为上，这段序列往往被称为CpG岛岛。现在学习的是第45页，共88页2、真核生物细胞内存在两种甲基化酶活性：、真核生物细胞内存在两种甲基化酶活性：一种为一种为日常型甲基转移酶日常型甲基转移酶、另一种是、另一种是从头合成型甲从头合成型甲基转移酶基转移酶日常型日
39、常型主要在甲基化母链（模板链）指导下使处于主要在甲基化母链（模板链）指导下使处于半甲基化的半甲基化的DNA双链分子上与甲基胞嘧啶相对应的双链分子上与甲基胞嘧啶相对应的胞嘧啶甲基化。该酶催化特异性极强，对半甲基化胞嘧啶甲基化。该酶催化特异性极强，对半甲基化的的DNA有较高的亲和力，使新生的半甲基化有较高的亲和力，使新生的半甲基化DNA迅迅速甲基化，从而保证速甲基化，从而保证DNA复制及细胞分裂后甲基化复制及细胞分裂后甲基化模式不变。模式不变。从头合成型从头合成型甲基转移酶催化未甲基化的甲基转移酶催化未甲基化的CpG成为成为mCpG，它不需要母链指导，但速度很慢。，它不需要母链指导，但速度很慢。现
40、在学习的是第46页，共88页现在学习的是第47页，共88页3、DNA甲基化抑制基因转录的机理甲基化抑制基因转录的机理DNA甲基化导致某些区域甲基化导致某些区域DNA构象构象变化，从而变化，从而影响了蛋白质与影响了蛋白质与DNA的相互作用，抑制了转录的相互作用，抑制了转录因子与启动区因子与启动区DNA的结合效率。的结合效率。当组蛋白当组蛋白H1与含与含CCGG序列的甲基化或非甲基序列的甲基化或非甲基化化DNA分别形成复合体时，分别形成复合体时，DNA的构型存在着的构型存在着很大的差别，甲基化达到一定程度时会发生从很大的差别，甲基化达到一定程度时会发生从常规的常规的B-DNA向向Z-DNA的过渡。
41、由于的过渡。由于Z-DNA结结构收缩，螺旋加深，使许多蛋白质因子赖以结构收缩，螺旋加深，使许多蛋白质因子赖以结合的元件缩入大沟而不利于基因转录的起始。合的元件缩入大沟而不利于基因转录的起始。现在学习的是第48页，共88页有实验用序列相同但甲基化水平不同的有实验用序列相同但甲基化水平不同的DNA为材料，比较其作为为材料，比较其作为RNA聚合酶转聚合酶转录模板的活性，发现甲基的引入不利于录模板的活性，发现甲基的引入不利于模板与模板与RNA聚合酶的结合，降低了其体聚合酶的结合，降低了其体外转录活性。外转录活性。现在学习的是第49页，共88页5-甲基胞嘧啶在甲基胞嘧啶在DNA上并不是随机分上并不是随机
42、分布的，基因的布的，基因的5端和端和3端往往富含甲基端往往富含甲基化位点，而启动区化位点，而启动区DNA分子上的甲基化分子上的甲基化密度与基因转录受抑制的程度密切相关。密度与基因转录受抑制的程度密切相关。现在学习的是第50页，共88页对于弱启动子来说，稀少的甲基化就能对于弱启动子来说，稀少的甲基化就能使其完全失去转录活性。当这一类启动使其完全失去转录活性。当这一类启动子被增强时（带有增强子），即使不去子被增强时（带有增强子），即使不去甲基化也可以恢复其转录活性。若进一甲基化也可以恢复其转录活性。若进一步提高甲基化密度，即使增强后的启动步提高甲基化密度，即使增强后的启动子仍无转录活性。子仍无转录
43、活性。因为甲基化对转录的抑制强度与因为甲基化对转录的抑制强度与MeCPl（methyl CpG-binding protein l）结合结合DNA的能力成正相关，甲基化的能力成正相关，甲基化CpG的密度和启动子强度之间的平衡决定了的密度和启动子强度之间的平衡决定了该启动子是否具有转录活性。该启动子是否具有转录活性。现在学习的是第51页，共88页4、DNA甲基化与甲基化与X染色体失活染色体失活X染色体失活是发育过程中独特的调节机制。染色体失活是发育过程中独特的调节机制。雌性胎生哺乳类动物细胞中两条雌性胎生哺乳类动物细胞中两条X染色体之一在染色体之一在发育早期随机失活，以确保与只有一条发育早期随机
44、失活，以确保与只有一条X染色体的染色体的雄性个体内雄性个体内X染色体基因的剂量相同。一旦发生染色体基因的剂量相同。一旦发生X染色体失活，这个信息便能够稳定地传递给子代细染色体失活，这个信息便能够稳定地传递给子代细胞，使该细胞有丝分裂所产生的后代都保持同一条胞，使该细胞有丝分裂所产生的后代都保持同一条X染色体失活。染色体失活。现在学习的是第52页，共88页第三节第三节反式作用因子反式作用因子(transactingfactors)现在学习的是第53页，共88页一、反式作用因子一、反式作用因子(transactingfactors)由不同染色体上基因座位编码的、能直接或间接由不同染色体上基因座位编
45、码的、能直接或间接地识别或结合在各顺式作用元件地识别或结合在各顺式作用元件812bp核心序列核心序列上并参与调控靶基因转录效率的这些结合蛋白，称作上并参与调控靶基因转录效率的这些结合蛋白，称作反式作用因子反式作用因子(transactingfactor)。现在学习的是第54页，共88页v反式作用因子在转录调节中具有特殊的重要性。这类反式作用因子在转录调节中具有特殊的重要性。这类DNA结合蛋白有多种，能特异性识别这类蛋白的序列结合蛋白有多种，能特异性识别这类蛋白的序列也有多种。也有多种。v正是不同的正是不同的DNA结合蛋白与不同识别序列之间在空结合蛋白与不同识别序列之间在空间结构上的相互作用，以
46、及蛋白质与蛋白质之间的间结构上的相互作用，以及蛋白质与蛋白质之间的相互作用，构成了复杂的基因转录调控机制的基础。相互作用，构成了复杂的基因转录调控机制的基础。现在学习的是第55页，共88页 真核生物启动子和增强子是由若干真核生物启动子和增强子是由若干DNA序列元件组成的，由于它们常与特定的序列元件组成的，由于它们常与特定的功能基因连锁在一起，因此被称为顺式功能基因连锁在一起，因此被称为顺式作用元件。这些序列组成基因转录的调作用元件。这些序列组成基因转录的调控区，影响基因的表达。控区，影响基因的表达。反式作用因子是能直接或间接地识别或反式作用因子是能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序
47、列上，结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。参与调控靶基因转录效率的蛋白质。现在学习的是第56页，共88页如果某个蛋白是体外转录系统中起始如果某个蛋白是体外转录系统中起始RNA合成所必需的，它就是转录复合物合成所必需的，它就是转录复合物的一部分。根据各个蛋白成分在转录中的一部分。根据各个蛋白成分在转录中的作用，将整个复合物分为的作用，将整个复合物分为3部分：部分：参与所有或某些转录阶段的参与所有或某些转录阶段的RNA聚合聚合酶亚基酶亚基，不具有基因特异性。，不具有基因特异性。现在学习的是第57页，共88页与转录的起始或终止有关的与转录的起始或终止有关的辅助因子辅助因
48、子，不具有基因特异性。不具有基因特异性。与特异调控序列结合的转录因子。它与特异调控序列结合的转录因子。它们中有些被认为是转录复合物的一部分，们中有些被认为是转录复合物的一部分，因为所有或大部分基因的启动区都含有因为所有或大部分基因的启动区都含有这一特异序列。更多的则是基因或启动这一特异序列。更多的则是基因或启动子特异性结合调控蛋白，它们是起始某子特异性结合调控蛋白，它们是起始某个（类）基因转录所必需的。个（类）基因转录所必需的。现在学习的是第58页，共88页二、反式作用因子可以分为3类 (1)(1)通用反式作用因子通用反式作用因子，主要识别启动子的核心启动成，主要识别启动子的核心启动成分分 （
49、2 2）特殊组织与细胞特殊组织与细胞中的反式作用因子中的反式作用因子 （3 3）和）和反应性元件反应性元件（response elenentsresponse elenents）相结合的反式）相结合的反式作用因子。作用因子。如如HSEHSE（热休克反应元件，（热休克反应元件，heat shock response elementheat shock response element），），GREGRE（糖皮质激素反应元件（糖皮质激素反应元件glucocorticoid response elementglucocorticoid response element）；）；MREMRE（金属反应元
50、件，（金属反应元件，metal response elementmetal response element）；）；TRETRE（肿瘤诱（肿瘤诱导剂反应元件，导剂反应元件，tumorgenic agent response element);tumorgenic agent response element);现在学习的是第59页，共88页三、DNA结合蛋白的共同特性：（1）具有一些与）具有一些与DNA结合的螺旋区结合的螺旋区（2）能形成二聚体）能形成二聚体（3）有一个共同的基本序列）有一个共同的基本序列现在学习的是第60页，共88页DNA结合蛋白基本序列由基本序列由4050个氨基酸组成，含有