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1、第6节 激素检测方法及注意事项第1页，本讲稿共16页现现在在激激素素多多用用较较灵灵敏敏特特异异的的免免疫疫法法和和HPLC、HPCE检检测测，但但除除受受方方法法技技术术本本身身影影响响外外，激激素素测测定定结结果果受受多多种种分分析析前前因因素素，如如取取样样时时间间、方方法法、样样品品预预处处理理等等的的影影响响大，在激素测定和结果解释中应特别注意。大，在激素测定和结果解释中应特别注意。第2页，本讲稿共16页(一一)常用激素检测方法及评价常用激素检测方法及评价 常用激素检测方法有生物活性法、受体常用激素检测方法有生物活性法、受体结合竞争法、结合竞争法、HPLC、高效毛细管电泳法、高效毛细
2、管电泳法(HPCE)及免疫法。其中生物活性法一方面及免疫法。其中生物活性法一方面仅为半定量，另一方面受影响生物反应性仅为半定量，另一方面受影响生物反应性因素的影响，现已趋于淘汰。受体结合竞因素的影响，现已趋于淘汰。受体结合竞争法因需复杂的受体制备，难以在临床常争法因需复杂的受体制备，难以在临床常规检测中应用。规检测中应用。HPLC和和HPCE由于需特殊由于需特殊仪器及大多要进行样品预处理，亦未能在仪器及大多要进行样品预处理，亦未能在国内临床常规检测中推广。因此，免疫法国内临床常规检测中推广。因此，免疫法为临床激素常规检测的主要方法。为临床激素常规检测的主要方法。第3页，本讲稿共16页激激素素免
3、免疫疫法法检检测测根根据据标标记记物物的的性性质质、检检测测方方法法不不同同，有有多多种种试试剂剂盒盒可可供供选选用用。但但对对检检测测结结果果影影响响最最大大的的是是所所用用抗抗体体的的质质量量。前前已已述述及及，一一些些激激素素如如TSH、FSH、LH、hCG间间存存在在交交叉叉抗抗原原性性；PRL在在血血液液中中存存在在有有交交叉叉免免疫疫性性但但活活性性不不同同的的单单体体和和多多聚聚体体形形式式；一一些些激激素素的的代代谢谢物物及及药药物物，亦亦可可和和激激素素有有程程度度不不等等的的交交叉叉免免疫疫反反应应性性。同同一一样样本本用用抗抗体体质质量量不不同同的的试试剂剂盒盒检检测测，
4、将将有有较较大大差差异异。此此亦亦是是有有关关激激素素参参考考值值各各家家报报告告差差别别大大，较较难难统统一一的的主主要要原原因因。因因此此，最最好好能能坚坚持持使使用用质质量量可可靠靠的的同同一一种种试试剂剂盒盒，并并建立以该试剂盒测定的参考值。建立以该试剂盒测定的参考值。第4页，本讲稿共16页(二二)重视分析前干扰因素重视分析前干扰因素 多数激素在安静状态和应激反应时分泌量差多数激素在安静状态和应激反应时分泌量差异巨大，如异巨大，如E和和NE仅由卧位变为立位，血浆浓仅由卧位变为立位，血浆浓度便可增加一倍以上。因此供激素测定的血样，度便可增加一倍以上。因此供激素测定的血样，一般都主张在空腹
5、安静平卧状态，置人保留式一般都主张在空腹安静平卧状态，置人保留式取血导管半小时以上采集。以减小因活动、对取血导管半小时以上采集。以减小因活动、对疾病和静脉穿刺的恐惧等引起的分泌量剧变。疾病和静脉穿刺的恐惧等引起的分泌量剧变。生长激素可迅速被血液中的肽酶水解，生长激素可迅速被血液中的肽酶水解，E和和NE可迅速被氧化破坏。因此，血样采集后应迅速可迅速被氧化破坏。因此，血样采集后应迅速低温分离血浆，必要时可加入肽酶抑制剂或抗低温分离血浆，必要时可加入肽酶抑制剂或抗氧化剂。而氧化剂。而ACTH易被玻璃器皿吸附，从血样易被玻璃器皿吸附，从血样采集到分析都应避免接触。采集到分析都应避免接触。第5页，本讲稿
6、共16页(三三三三)正确评价单次激素水平测定的意义正确评价单次激素水平测定的意义正确评价单次激素水平测定的意义正确评价单次激素水平测定的意义 不少激素分泌存在生理性昼夜节律及随生长发育阶段不不少激素分泌存在生理性昼夜节律及随生长发育阶段不不少激素分泌存在生理性昼夜节律及随生长发育阶段不不少激素分泌存在生理性昼夜节律及随生长发育阶段不同而改变，性激素在不同的发育阶段及女性月经周期的不同而改变，性激素在不同的发育阶段及女性月经周期的不同而改变，性激素在不同的发育阶段及女性月经周期的不同而改变，性激素在不同的发育阶段及女性月经周期的不同时相差别甚大。因此应根据取样时间所处的昼夜节律、同时相差别甚大。
7、因此应根据取样时间所处的昼夜节律、同时相差别甚大。因此应根据取样时间所处的昼夜节律、同时相差别甚大。因此应根据取样时间所处的昼夜节律、发育阶段及月经周期时相，具体分析。对昼夜节律明显者，发育阶段及月经周期时相，具体分析。对昼夜节律明显者，发育阶段及月经周期时相，具体分析。对昼夜节律明显者，发育阶段及月经周期时相，具体分析。对昼夜节律明显者，最好分别在同一天的高峰期和低谷期取样测定，观察其昼最好分别在同一天的高峰期和低谷期取样测定，观察其昼最好分别在同一天的高峰期和低谷期取样测定，观察其昼最好分别在同一天的高峰期和低谷期取样测定，观察其昼夜节律。而对夜节律。而对夜节律。而对夜节律。而对GHGH等
8、主要以脉冲式分泌的激素，单次测等主要以脉冲式分泌的激素，单次测等主要以脉冲式分泌的激素，单次测等主要以脉冲式分泌的激素，单次测定结果实无多大意义，必需结合动态功能试验等做出诊定结果实无多大意义，必需结合动态功能试验等做出诊定结果实无多大意义，必需结合动态功能试验等做出诊定结果实无多大意义，必需结合动态功能试验等做出诊断。对甲状腺激素、皮质醇、性激素等高血浆蛋白结合断。对甲状腺激素、皮质醇、性激素等高血浆蛋白结合断。对甲状腺激素、皮质醇、性激素等高血浆蛋白结合断。对甲状腺激素、皮质醇、性激素等高血浆蛋白结合率的激素，最好直接测定游离激素浓度。若测定总激素率的激素，最好直接测定游离激素浓度。若测定
9、总激素率的激素，最好直接测定游离激素浓度。若测定总激素率的激素，最好直接测定游离激素浓度。若测定总激素水平，结果解释时要充分考虑各种影响其蛋白结合率生水平，结果解释时要充分考虑各种影响其蛋白结合率生水平，结果解释时要充分考虑各种影响其蛋白结合率生水平，结果解释时要充分考虑各种影响其蛋白结合率生物化学检验广泛应用于内分泌疾病诊断、病情评估和疗物化学检验广泛应用于内分泌疾病诊断、病情评估和疗物化学检验广泛应用于内分泌疾病诊断、病情评估和疗物化学检验广泛应用于内分泌疾病诊断、病情评估和疗效监控。效监控。效监控。效监控。第6页，本讲稿共16页下丘脑下丘脑-腺垂体腺垂体腺垂体腺垂体-内分泌腺内分泌腺(细
10、胞细胞)激素系统的反馈激素系统的反馈激素系统的反馈激素系统的反馈调节，是内分泌的主要调控机制。多数激素并非每调节，是内分泌的主要调控机制。多数激素并非每调节，是内分泌的主要调控机制。多数激素并非每调节，是内分泌的主要调控机制。多数激素并非每日均衡分泌，而存在生理性节律日均衡分泌，而存在生理性节律日均衡分泌，而存在生理性节律日均衡分泌，而存在生理性节律(昼夜节律、不同昼夜节律、不同发育阶段节律、月经周期节律等发育阶段节律、月经周期节律等)或脉冲式分泌。或脉冲式分泌。甲状腺激素、糖皮质激素、性激素等和血浆蛋白甲状腺激素、糖皮质激素、性激素等和血浆蛋白结合率高，其血浆结合率高，其血浆(清清)总浓度受
11、相应结合蛋白浓总浓度受相应结合蛋白浓度影响大，但只有游离激素才能发挥包括对上度影响大，但只有游离激素才能发挥包括对上述调节轴的反馈调控在内的作用。理解掌握各述调节轴的反馈调控在内的作用。理解掌握各种激素的分泌调控机制、分泌方式和血浆运输种激素的分泌调控机制、分泌方式和血浆运输特点，是正确解释激素及其结合蛋白和代谢物特点，是正确解释激素及其结合蛋白和代谢物检测、动态功能试验的基础。检测、动态功能试验的基础。第7页，本讲稿共16页 1由于生长激素由于生长激素(GH)每日仅数次脉冲每日仅数次脉冲式分泌方式和半寿期短的特点，式分泌方式和半寿期短的特点，GH紊紊乱疾病的生物化学诊断，首选检测项目乱疾病的
12、生物化学诊断，首选检测项目不是不是GH，而是半寿期长并依赖，而是半寿期长并依赖GH生成生成的作用介导物的作用介导物IGF-1或其结合蛋白或其结合蛋白IGFB-3。仅。仅GH异常无多大意义，只有异常无多大意义，只有同时至少两项相关动态功能试验异常方同时至少两项相关动态功能试验异常方可做出诊断。可做出诊断。第8页，本讲稿共16页2甲状腺功能紊乱是内分泌病中最常见者。其首甲状腺功能紊乱是内分泌病中最常见者。其首甲状腺功能紊乱是内分泌病中最常见者。其首甲状腺功能紊乱是内分泌病中最常见者。其首选筛查项目是血清选筛查项目是血清选筛查项目是血清选筛查项目是血清TSH测定，特别是新生儿尽早测定，特别是新生儿尽
13、早发现甲减及时治疗，避免呆小症发生，意义重发现甲减及时治疗，避免呆小症发生，意义重大。确诊甲状腺功能紊乱的种类、严重程度及大。确诊甲状腺功能紊乱的种类、严重程度及疗效监控，可同时测定血浆疗效监控，可同时测定血浆(清清)甲状腺激素。由甲状腺激素。由甲状腺激素。由甲状腺激素。由于甲状腺激素高血浆蛋白结合特点，甲状腺激素测于甲状腺激素高血浆蛋白结合特点，甲状腺激素测于甲状腺激素高血浆蛋白结合特点，甲状腺激素测于甲状腺激素高血浆蛋白结合特点，甲状腺激素测定包括定包括定包括定包括TT4、TT3、FT3、FT4，随着检测技术的，随着检测技术的可靠性提高，推荐将可靠性提高，推荐将FT3、FT4，尤其是，尤其
14、是FT3FT3作作为甲状腺激素测定常规项目。为甲状腺激素测定常规项目。第9页，本讲稿共16页多多数数甲甲状状腺腺功功能能紊紊乱乱都都有有自自身身免免疫疫机机制制参参与与，甲甲状状腺腺自自身身抗抗体体检检测测在在国国内内较较普普及及。但但这这些些自自身身抗抗体体多多缺缺乏乏特特异异性性，亦亦见见于于部部分分正正常常人人尤尤其其是是老老年年人人、其其他他自自身身免免疫疫性性内内分分泌泌病病者者，尚尚有有部部分分自自身身免免疫疫性性甲甲状状腺腺炎炎患患者者不不能能检检测测出出。因因此此，在在甲甲状状腺腺功功能能紊紊乱乱的的诊诊断断上上，甲甲状状腺腺自自身身抗抗体体检检测测仅仅有有助助于于自自身身免免
15、疫疫性性甲甲状状腺腺炎炎的的诊诊断断，而而不不能能说明甲状腺功能有无紊乱及种类。说明甲状腺功能有无紊乱及种类。第10页，本讲稿共16页3肾上腺由皮质和髓质两个独立的内分肾上腺由皮质和髓质两个独立的内分泌腺组成。肾上腺皮质功能紊乱诊断的首泌腺组成。肾上腺皮质功能紊乱诊断的首选项目是血浆选项目是血浆(清清)总皮质醇、唾液及尿游总皮质醇、唾液及尿游离皮质醇测定。若能同肘检测血浆离皮质醇测定。若能同肘检测血浆ACTH及进行必要的动态功能试验，则有助于病及进行必要的动态功能试验，则有助于病变部位及性质判断。变部位及性质判断。第11页，本讲稿共16页尿尿17-OHCS、17-KS测测定定因因干干扰扰因因素
16、素多多，诊诊断断效效率率较较低低，已已趋趋于于淘淘汰汰。嗜嗜铬铬细细胞胞瘤瘤是是肾肾上上腺腺髓髓质质的的主主要要病病变变，其其临临床床生生物物化化学学检检验验首首选选血血浆浆肾肾上上腺腺素素和和去去甲甲肾肾上上腺腺素素测测定定。尿尿中中该该两两种种激激素素代代谢谢物物3-甲甲氧氧-4-羟羟杏杏仁仁酸酸检检测测因因干干扰扰因因素素多多，特特异异性性差差，已已较较少少使使用用。由由于于嗜嗜铬铬细细胞胞瘤瘤的的激激素素释释放放可可为为间间发发性性，必必要要时时可可进进行行高高血血糖糖素素刺刺激激试试验协助诊断。验协助诊断。第12页，本讲稿共16页ACTH和肾上腺素、去甲肾上腺素测定只和肾上腺素、去甲
17、肾上腺素测定只能用血浆作样本，严格按照前面介绍的方能用血浆作样本，严格按照前面介绍的方法采集血样和迅速低温分离血浆，尽快检法采集血样和迅速低温分离血浆，尽快检测，减少分析前干扰因素，对保证结果的测，减少分析前干扰因素，对保证结果的准确可靠极为重要。准确可靠极为重要。第13页，本讲稿共16页4内内分分泌泌性性性性功功能能异异常常的的诊诊断断很很大大程程度度上上依依靠靠生生物物化化学学检检验验。单单纯纯检检测测血血浆浆(清清)性性激激素素水水平平提提供供的的信信息息有有限限，同同时时检检测测性性激激素素和和促促性性腺腺激激素素(FSH、LH)则则对对性性激激素素紊紊乱乱的的有有无无及及种种类类做做
18、出出初初步步诊诊断断。但但由由于于性性发发育育及及女女性性月月经经周周期期存存在在较较大大的的个个体体差差异异，对对性性激激素素和和促促性性腺腺激激素素异异常常者者，应应通通过过兴兴奋奋或或抑抑制制动动态态功功能能试试验验，准准确确了了解解性性腺腺及及其其调调节节系系统统的的功功能能状状况况，并并协协助助病病变变部部位位和和性性质质的的确确定定。这这在在青青春春期期延延迟迟和和性性幼幼稚稚症症的的鉴鉴别别、男男性性青青春春期期后后性性功功能能减减退退症症及及女女性性继继发发性性闭闭经经的的病病因因诊断、治疗决策上，尤为重要。诊断、治疗决策上，尤为重要。第14页，本讲稿共16页小 结第15页，本讲稿共16页 1.了了解解内内分分泌泌的的概概念念、内内分分泌泌系系统统和和神神经经系系统统的的调调节节机机制制及及有有关关内内分分泌泌紊紊乱乱性性疾疾病病的临床生化检查方法的临床生化检查方法 2熟熟悉悉主主要要内内分分泌泌激激素素的的生生理理、生生化化功功能能及生化诊断及生化诊断 3.掌握甲状腺激素、肾上腺激素的代谢、掌握甲状腺激素、肾上腺激素的代谢、调节及生化诊断调节及生化诊断 第16页，本讲稿共16页