《液相色谱分析.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《液相色谱分析.ppt（52页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、液相色谱分析液相色谱分析1现在学习的是第1页，共52页第四章第四章 高效液相色谱分析高效液相色谱分析第一节第一节 概述概述第二节第二节 HPLC仪器仪器第三节第三节 高效液相色谱法的类型及分离原理高效液相色谱法的类型及分离原理第四节第四节 色谱分离方法的选择色谱分离方法的选择第五节第五节 高效毛细管电泳简介高效毛细管电泳简介第六节第六节 纸层析和薄层层析纸层析和薄层层析2现在学习的是第2页，共52页 教学目标及要求教学目标及要求 1、掌握高效液相色谱法的特点及适用范围，与掌握高效液相色谱法的特点及适用范围，与GC及经典及经典LC的异同。的异同。2、掌握高效液相色谱仪的主要部件及基本流程。掌握高
2、效液相色谱仪的主要部件及基本流程。3、理解常用检测器的原理、适用的分析对象及适用范围。、理解常用检测器的原理、适用的分析对象及适用范围。4、理解各种分离方式的原理及选择原则。、理解各种分离方式的原理及选择原则。5、了解、了解高效毛细管电泳基本原理、仪器高效毛细管电泳基本原理、仪器及特点。及特点。6、了解、了解纸层析和薄层层析分离过程、操作技术及特点。纸层析和薄层层析分离过程、操作技术及特点。3现在学习的是第3页，共52页第一节第一节 概述概述 高效液相色谱高效液相色谱（HPLC）是一种以是一种以液体为流动相液体为流动相的的快速分离分析快速分离分析色谱技术色谱技术，采用，采用细微粒固定相细微粒固
3、定相、高压输液泵高压输液泵和和高灵敏度检测器高灵敏度检测器，具，具有有高压、高速、高效、高灵敏度高压、高速、高效、高灵敏度的特点，对于那些的特点，对于那些沸点高沸点高，热稳定性热稳定性差差，相对分子质量大相对分子质量大的的有机化合物有机化合物如烷烃、烯烃、芳烃、染料、如烷烃、烯烃、芳烃、染料、甾族化合物、蛋白质、氨基酸、核酸等均可进行分离分析。甾族化合物、蛋白质、氨基酸、核酸等均可进行分离分析。按按照照固固定定相相不不同同分分为为：液液液液分分配配色色谱谱；吸吸附附色色谱谱（液液固固色色谱谱）；离离子子交交换换色色谱谱；尺尺寸寸排排阻阻色色谱谱（凝凝胶胶渗渗透透色色谱谱）；离离子子色色谱谱、平
4、平板板色色谱（薄层色谱）等。谱（薄层色谱）等。4现在学习的是第4页，共52页1.高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较高高压压：HPlC供供液液压压力力和和进进样样压压力力都都很很高高（150350X105Pa）。高高压是的一个压是的一个突出特点突出特点。高高速速：HPLC采采用用高高压压输输液液设设备备，流流速速大大增增加加，分分析析速速度度极极快快，只只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。高高效效：填填充充物物颗颗粒粒极极细细且且规规则则，固固定定相相涂涂渍渍均均匀匀、传传质质阻阻
5、力力小小，因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。高高灵灵敏敏度度：检检测测器器灵灵敏敏度度极极高高：UV10-9g,荧荧光光检检测测器器10-11g。5现在学习的是第5页，共52页2.HPLC与与GC的比较的比较分分析析对对象象及及范范围围：GC分分析析只只限限于于气气体体和和低低沸沸点点的的稳稳定定有有机机化化合合物物（占占总总数数的的20%）；HPLC可可分分析析高高沸沸点点、高高分分子子量量的的稳稳定定或或不不稳稳定定有机化合物（占有机化合物（占80%）。流流动动相相的的选选择择：GC采采用用的的流流动动相相为为几几种种“惰惰
6、性性”气气体体，只只起起运运载载作作用用，对对组组分分作作用用小小；HPLC采采用用的的流流动动相相为为液液体体或或各各种种液液体体的的混混合合（供供选选择择的的机机会会多多）。它它除除了了起起运运载载作作用用外外，还还可可与与组组分分作作用用，并并与与固固定定相相对对组组分分的的作作用用产产生生竞竞争争，即即流流动动相相对对分分离离的的贡贡献献很很大大，可可通通过过溶溶剂剂来来控控制制和和改进分离。改进分离。操作温度：操作温度：GC需高温；需高温；HPLC通常在室温下进行。通常在室温下进行。6现在学习的是第6页，共52页3.应用应用极性增加极性增加不溶于水不溶于水溶于水溶于水非极性非极性离子
7、离子非离子极性非离子极性吸附吸附反向分配反向分配分配分配正向分配正向分配离子交换离子交换尺寸排阻尺寸排阻凝胶渗透凝胶渗透凝胶过滤凝胶过滤分分子子量量7现在学习的是第7页，共52页第二节第二节 HPLC仪器仪器8现在学习的是第8页，共52页HPLC仪器包括：仪器包括：高压输液装置高压输液装置 进样系统进样系统 分离系统分离系统 检测系统检测系统 此外还配有梯度淋洗、自动进样和数据处理装置。此外还配有梯度淋洗、自动进样和数据处理装置。梯梯度淋洗度淋洗9现在学习的是第9页，共52页1.高压输液系统高压输液系统1）贮贮液液器器：1-2L的的玻玻璃璃瓶瓶，配配有有溶溶剂剂过过滤滤器器(Ni合合金金)，其
8、其孔孔径径约约2 m，可防止颗粒物进入泵内。，可防止颗粒物进入泵内。2）脱脱气气：超超声声波波脱脱气气或或真真空空加加热热脱脱气气。溶溶剂剂通通过过脱脱气气器器中中的的脱脱气气膜，相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去。膜，相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去。3）高压泵）高压泵：要求要求：密封性好、输液流量稳定无脉动、可调范围宽、耐腐蚀。：密封性好、输液流量稳定无脉动、可调范围宽、耐腐蚀。输液泵种类：恒压型和恒流型。输液泵种类：恒压型和恒流型。10现在学习的是第10页，共52页4）梯梯度度淋淋洗洗装装置置：作作用用是是在在分分离离过过程程中中，按按一一定定的的程程序序连连续续改改变变流流动动相
9、相中中多多种种不不同同性性质质溶溶剂剂的的配配比比，以以改改变变流流动动相相的的极极性性、离离子子强强度度或或酸酸度度等等，从从而而提提高高试试样样的的分分离离效效率率，缩缩短短分分析析时时间间，使使色色谱谱峰峰形形得得到到改改善，提高测定的灵敏度和定量的准确度。善，提高测定的灵敏度和定量的准确度。11现在学习的是第11页，共52页2.进样系统进样系统1）隔隔膜膜注注射射进进样样：使使用用微微量量注注射射器器进进样样。装装置置简简单单、死死体体积积小小。但但进样量小且重现性差进样量小且重现性差。2）高高压压进进样样阀阀：目目前前最最常常用用的的为为六六通通阀阀。由由于于进进样样量量可可由由样样
10、品品管管控制，因此控制，因此进样准确，重复性好进样准确，重复性好。装入样品装入样品出口出口进样进样采样环采样环泵入溶剂泵入溶剂进色谱柱进色谱柱12现在学习的是第12页，共52页3.色谱柱色谱柱1）要要求求：内内壁壁光光滑滑的的优优质质不不锈锈钢钢柱柱，柱柱接接头头的的死死体体积积尽尽可可能能小小。柱柱长长多为多为1530cm，内径为，内径为45mm；2）柱的填充柱的填充：主要采用匀浆法。：主要采用匀浆法。填充方法：填充方法：填填充充时时，将将制制作作好好的的匀匀浆浆液液，用用流流动动相相充充满满色色谱谱柱柱及及其其延延长长管管中中，然然后后将将匀匀浆浆液液倒倒入入匀匀浆浆填填充充器器，在在较较
11、高高压压力力下下迅迅速速将将其其注注入入色色谱谱柱柱内内。要要求求填填充充速速度度快快（防防凝凝聚聚、沉沉降降或或结结块块）、且且无无空空气气进进入入（影影响响填填充充均匀性）。均匀性）。13现在学习的是第13页，共52页4.检测器检测器1）紫外检测器）紫外检测器 依据被分析组分对特定紫外光的选择性吸收。依据被分析组分对特定紫外光的选择性吸收。最小检测量最小检测量10-9gmL-1，对流量和温度的波动不敏感，对流量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。，可用于梯度洗脱。14现在学习的是第14页，共52页光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器15现在学习的是第15页，共52页波长波长可的松可的松
12、氟美松氟美松皮质酮皮质酮快速扫描快速扫描光电二极管阵列（光电二极管阵列（PDA）检测所获得的三维色谱）检测所获得的三维色谱-光谱图光谱图16现在学习的是第16页，共52页原原理理：利利用用两两束束相相同同角角度度的的光光照照射射溶溶剂剂相相和和样样品品+溶溶剂剂相相，利用二者利用二者对光的折射率不同对光的折射率不同。为为通通用用型型检检测测器器，灵灵敏敏度度为为10-7g/mL。但但对对温温度度变变化敏感，且化敏感，且不适于梯度淋洗不适于梯度淋洗。光源光源调零调零光学零光学零参比参比样品样品平面镜平面镜透镜透镜光电转换光电转换记录仪记录仪放大器放大器遮光板遮光板2）示差折光检测器）示差折光检测
13、器17现在学习的是第17页，共52页3）荧光检测器）荧光检测器 根根据据某某些些物物质质受受激激后后能能产产生生一一定定强强度度荧荧光光的的性性质质，可可制制成成灵灵敏敏度度极极高高的的荧荧光光检检测测器器。它它是是一一种种选选择择性性很很强强的的检检测测器器，其其灵灵敏敏度度比比UV检检测测器高器高23个数量级。个数量级。适适合合于于稠稠环环芳芳烃烃、甾甾族族化化合合物物、酶酶、氨氨基基酸酸、维维生生素素、色色素素、蛋白质等荧光物质的测定。蛋白质等荧光物质的测定。4）电导检测器）电导检测器 主要用于离子色谱的检测。主要用于离子色谱的检测。原理原理：基于待测物在一些介质中电离后所产生的电导（电
14、阻的倒数）：基于待测物在一些介质中电离后所产生的电导（电阻的倒数）变化来测量电离物质的含量。变化来测量电离物质的含量。18现在学习的是第18页，共52页第三节第三节 高效液相色谱法的类型及分离原理高效液相色谱法的类型及分离原理 一、一、吸附色谱（液固吸附色谱）吸附色谱（液固吸附色谱）二、分配色谱二、分配色谱 三、离子交换色谱三、离子交换色谱 四、体积排阻色谱四、体积排阻色谱高高效效液液相相色色谱谱法法的的分分类类19现在学习的是第19页，共52页一、一、吸附色谱（液固吸附色谱）吸附色谱（液固吸附色谱）v吸附色谱吸附色谱是基于各组分在固体吸附剂表面上具有是基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同吸不
15、同吸附能力附能力而进行分离。而进行分离。v以固体吸附剂为固定相，如极性的硅胶、氧化铝、分子以固体吸附剂为固定相，如极性的硅胶、氧化铝、分子筛和非极性的活性炭等（较常使用筛和非极性的活性炭等（较常使用硅胶硅胶）。流动相可以是）。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。各种不同极性的一元或多元溶剂。v宜于宜于分离极性不同或含极性基团相同但数目不同的试样，也分离极性不同或含极性基团相同但数目不同的试样，也适于分离异构体适于分离异构体，但不宜于分离同系物。，但不宜于分离同系物。20现在学习的是第20页，共52页二、分配色谱（液液分配色谱）二、分配色谱（液液分配色谱）1.原理原理 根据各待测物在互不相
16、溶的两溶液中的溶解度不根据各待测物在互不相溶的两溶液中的溶解度不同，因而具不同的分配系数同，因而具不同的分配系数。在色谱柱中，随着流动。在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需进行多次，造成各待测物相的移动，这种分配平衡需进行多次，造成各待测物的迁移速率不同，从而实现分离的过程。的迁移速率不同，从而实现分离的过程。21现在学习的是第21页，共52页2.流动相流动相 根根据据流流动动相相与与固固定定相相极极性性的的差差别别程程度度，可可将将液液液液色色谱谱分为分为正相分配色谱正相分配色谱和和反相分配色谱。反相分配色谱。正相分配色谱正相分配色谱：流流动动相相极极性性小小于于固固定定相相极极性性
17、，极极性性小小的的先先流流出出，适于极性组分分离适于极性组分分离。反相分配色谱反相分配色谱：流流动动相相极极性性大大于于固固定定相相极极性性，极极性性大大的的先先流流出出，适于非极性组分分离适于非极性组分分离。22现在学习的是第22页，共52页3.固定相固定相 原则上，用于原则上，用于GC的固定相也可用于的固定相也可用于HPLC作固定相。作固定相。但但HPLC固定液易流失，因此常用的只有几种，按极性由高固定液易流失，因此常用的只有几种，按极性由高到低为：到低为：,-氧二丙腈氧二丙腈（ODPN)、聚乙二醇、聚乙二醇（PEM）、角鲨烷角鲨烷（SQ）。早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相早期通
18、过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相,现现多为多为化学键合固定相化学键合固定相（通过化学反应将有机分子键合在通过化学反应将有机分子键合在载体表面所形成的柱填充剂，具有稳定、流失小、适于载体表面所形成的柱填充剂，具有稳定、流失小、适于梯度淋洗等特点梯度淋洗等特点）。）。23现在学习的是第23页，共52页正相色谱正相色谱低极性流动相低极性流动相反相色谱反相色谱高极性流动相高极性流动相中等极性流动相中等极性流动相中等极性流动相中等极性流动相时间时间时间时间时间时间时间时间待测物极性：待测物极性：ABC正、反相色谱中极性和保留时间的关系正、反相色谱中极性和保留时间的关系24现在学习的是第24页，共52
19、页三、离子交换色谱三、离子交换色谱 此此法法是是利利用用离离子子交交换换原原理理和和液液相相色色谱谱技技术术相相结结合合，测测定定各各类类阴阴、阳阳离离子子的的分分离离分分析析方方法法。它它既既适适于于无无机机离离子子，也适于有机物分离也适于有机物分离，如蛋白质、氨基酸、核酸等。，如蛋白质、氨基酸、核酸等。1.原原理理：利利用用不不同同待待测测离离子子对对固固定定相相的的亲亲和和能能力力（或或离子交换能力）的差别来实现分离的。离子交换能力）的差别来实现分离的。25现在学习的是第25页，共52页2.固定相固定相 按离子交换剂类型分四种：按离子交换剂类型分四种：26现在学习的是第26页，共52页微
20、孔型微孔型 大孔型大孔型微孔微孔微孔微孔薄膜型薄膜型 表面多孔型表面多孔型离子交换层离子交换层惰性核惰性核惰性核惰性核离子交换剂硅胶层涂覆离子交换剂硅胶层涂覆按固定相制按固定相制作方法可分作方法可分为：为：27现在学习的是第27页，共52页3.流动相流动相 离离子子交交换换色色谱谱流流动动相相为为无无机机酸酸或或无无机机碱碱的的盐盐类类缓缓冲冲溶溶液液（有有一一定定pH和和离离子子强强度度），通通过过改改变变pH、缓缓冲冲剂剂类类型型、离离子子强强度度、加加入入有有机机试试剂剂和和配配位位剂剂等等条条件件来来控控制制分分配配比比k，改变交换剂的选择性，进而影响样品待测物的分离。，改变交换剂的选
21、择性，进而影响样品待测物的分离。28现在学习的是第28页，共52页29v离子色谱（离子色谱（IC）以无机、特别是无机阴离子混合物为主要分析对象以无机、特别是无机阴离子混合物为主要分析对象。现在学习的是第29页，共52页30离子色谱的原理离子色谱的原理:v采用交换容量非常低的特制离子交换树脂为固定相；采用交换容量非常低的特制离子交换树脂为固定相；v在在分分离离柱柱后后，用用另另外外一一支支抑抑制制柱柱来来消消除除淋淋洗洗液液的的高高本本底底电电流流;v采采用用电电导导检检测测器器检检测测流流出出组组分分。快快速速分分离离分分析析微微量量无无机机离离子子混合物混合物;v各种抑制装置及无抑制方法的出
22、现，发展迅速。各种抑制装置及无抑制方法的出现，发展迅速。现在学习的是第30页，共52页31例例如如：分分析析阳阳离离子子时时，以以无无机机酸酸为为流流动动相相，抑抑制制柱柱为为高高容量的强碱性阴离子交换树脂，则发生下列反应：容量的强碱性阴离子交换树脂，则发生下列反应：R+OH+HCl(流动相流动相)R+Cl-+H2O R+OH+MCl(待测物待测物)R+Cl+M+OH-可可见见，不不仅仅大大量量酸酸转转化化为为低低电电导导的的水水，而而且且待待测测离子转化为具有更大淌度的碱。离子转化为具有更大淌度的碱。离子色谱的原理离子色谱的原理:现在学习的是第31页，共52页32离子色谱的特点：离子色谱的特
23、点：v分析速度快：可在数分钟内完成一个试样的分析；分析速度快：可在数分钟内完成一个试样的分析；v分离能力高：在适宜的条件下，可使常见的各种阴离子混分离能力高：在适宜的条件下，可使常见的各种阴离子混合物分离；合物分离；分离混合阴离子（分离混合阴离子（NO3、NO2、SO42、PO43等）等）惟一快速、灵敏、准确的最有效分析方法惟一快速、灵敏、准确的最有效分析方法。缺点：缺点：抑制柱要定期再生、谱峰在经过抑制柱后会展宽，降抑制柱要定期再生、谱峰在经过抑制柱后会展宽，降低分离度。低分离度。现在学习的是第32页，共52页四四、尺寸排阻色谱法、尺寸排阻色谱法 又又称称凝凝胶胶（渗渗透透）色色谱谱，主主要
24、要用用于于大大分分子子的的分分子子分分离离。它是它是基于待测物分子的尺寸和形状不同来实现分离的基于待测物分子的尺寸和形状不同来实现分离的。1、分分离离原原理理：固固定定相相为为化化学学惰惰性性的的多多孔孔凝凝胶胶，它它类类似似于于分分子子筛筛，但但孔孔径径更更大大。凝凝胶胶内内有有一一定定大大小小的的空空穴穴，分分子子体体积积大大的的待待测测物物不不能能渗渗入入孔孔穴穴中中而而被被排排阻阻，较较早早地地被被淋淋洗洗出出来来，中中等等的的部部分分渗渗透透，小小分分子子则则完完全全渗渗透透，最最后后流流出出色色谱谱柱柱。即即待待测测物分子按分子大小（分子量大小）先后从柱中流出。物分子按分子大小（分
25、子量大小）先后从柱中流出。33现在学习的是第33页，共52页2.固定相固定相3.流流动动相相的的要要求求：能能溶溶解解样样品品且且与与凝凝胶胶相相似似（润润湿湿凝凝胶）、粘度小（增加扩散速度）。胶）、粘度小（增加扩散速度）。34现在学习的是第34页，共52页第四节第四节 色谱分离方法的选择色谱分离方法的选择 一般可根据试样相对分子质量范围、溶解度及分子结一般可根据试样相对分子质量范围、溶解度及分子结构等进行分离方法的初步选择构等进行分离方法的初步选择。一、根据相对分子质量选择一、根据相对分子质量选择二、根据溶解性选择二、根据溶解性选择三、根据分子结构选择三、根据分子结构选择35现在学习的是第3
26、5页，共52页36现在学习的是第36页，共52页第五节第五节 高效毛细管电泳简介高效毛细管电泳简介一、基本原理一、基本原理1、概述、概述 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为反的电极方向迁移的现象，称之为电泳电泳。由于不同。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同可实现分离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同可实现分离。离。37现在学习的是第37页，共52页 毛细管电泳毛细管电泳是以是以高压高压电场为驱动力，以电场为驱动力，以毛细管毛细
27、管为分离通为分离通道，依据试样中各组分之间道，依据试样中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离淌度和分配行为上的差异而实现分离、分析物质的一类液相技术，是经典电泳和现代微柱分离的结合。分析物质的一类液相技术，是经典电泳和现代微柱分离的结合。38现在学习的是第38页，共52页2、电泳现象与电渗流现象、电泳现象与电渗流现象电泳现象电泳现象：带电离子在电场作用下的迁移（定向移动），：带电离子在电场作用下的迁移（定向移动），速度速度电泳电泳39现在学习的是第39页，共52页电渗流现象：电渗流现象：石英玻璃表面存在硅羟基，石英玻璃表面存在硅羟基，pH3时时,形成双电层，在高电场的作用形成双电层，在高
28、电场的作用下，双电层中的水合阳离子引起毛细管中的溶液整体向负极移动，速度下，双电层中的水合阳离子引起毛细管中的溶液整体向负极移动，速度电渗流电渗流40现在学习的是第40页，共52页3、分离过程：、分离过程：41现在学习的是第41页，共52页4 4、分离类型、分离类型v 毛细管区带电泳（毛细管区带电泳（CZE）：最普遍、最基本的一种分离模：最普遍、最基本的一种分离模式。式。42现在学习的是第42页，共52页v毛细管凝胶电泳（毛细管凝胶电泳（CGE）：）：v将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性，类似分子将聚丙烯酰胺在毛细管柱内交联生成凝胶。其具有多孔性，类似分子筛的作用，试样分子按大
29、小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖筛的作用，试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散，所得峰型尖锐，分离效率高。可分离测定蛋白质、锐，分离效率高。可分离测定蛋白质、DNA等。等。43现在学习的是第43页，共52页v 毛细管胶束电动力学色谱（毛细管胶束电动力学色谱（MECC）：）：用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围。44现在学习的是第44页，共52页二、仪器装置二、仪器装置45现在学习的是第45页，共52页v 电压：电压：030KV。v 分离柱不涂敷任何固定液；分离柱不涂敷任何固定液；v 紫外或激光诱导荧光检测器（紫外或激光诱
30、导荧光检测器（10-1910-21 mol/L）46现在学习的是第46页，共52页三、主要特点和应用三、主要特点和应用v高分辨率高分辨率：理论：理论n高达数百万块，甚至数千万块；高达数百万块，甚至数千万块；v高灵敏度高灵敏度：可检测出低至：可检测出低至10-21 mol/L浓度的物质；浓度的物质；v高分析速度高分析速度：可在：可在3分钟内分离分钟内分离30种阴离子；种阴离子；1.7分钟分离分钟分离19种阳离子；种阳离子；4分钟可分离分钟可分离10种蛋白质；种蛋白质；v试样用量少试样用量少：仅需几：仅需几nL（10-9 L）的试样；）的试样；v仪器仪器简单简单，操作，操作成本低成本低：分析一个试
31、样仅需几毫升流动：分析一个试样仅需几毫升流动液。液。47现在学习的是第47页，共52页不足之处：不足之处：v 进样不够方便。应用范围相对较窄。进样不够方便。应用范围相对较窄。v 分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出渗流方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。峰时间较长。48现在学习的是第48页，共52页第六节第六节 纸层析和薄层层析法纸层析和薄层层析法一、纸层析和薄层层析分离过程一、纸层析和薄层层析分离过程 纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作
32、用。49现在学习的是第49页，共52页二、操作技术二、操作技术层层析析纸纸和和层层析析板板:特特制制的的色色层层滤滤纸纸。层层析析板板是是用用专专门门的的涂涂布布器器把把浆浆状状的的吸吸附附剂剂（硅硅胶胶或或氧氧化化铝铝，200250目目）均均匀匀地地涂涂在在长长条条形形玻玻璃板上（厚度璃板上（厚度0.150.5mm）。干燥后即可使用。）。干燥后即可使用。展开剂展开剂：由一种或多种溶剂按一定比例组成。：由一种或多种溶剂按一定比例组成。点样点样:用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。显显色色检检测测：常常用用的的显显色色方方法法有有喷
33、喷洒洒显显色色剂剂、碘碘蒸蒸气气熏熏或或氨氨水水熏熏等。等。50现在学习的是第50页，共52页三、特点及应用三、特点及应用v 平板色谱平板色谱简单、方便简单、方便、及操作、及操作费用低费用低；v 可以在一块层析板上可以在一块层析板上同时展开同时展开多个试样及将多个试样及将多条滤纸同时展开；多条滤纸同时展开；v 采用方形薄层板还可以方便的进行二维展采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开，即按一般方法展开后，改变方向和展开开，即按一般方法展开后，改变方向和展开剂再次展开，进一步剂再次展开，进一步改善分离效果改善分离效果；v 试样一般试样一般不需要经过预处理不需要经过预处理即可分离。即可分离。51现在学习的是第51页，共52页缺点缺点：分离效率较低分离效率较低，不适用挥发性试样分离不适用挥发性试样分离。定定性定量不便性定量不便。应用应用：平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化：平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草药中有效成合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草药中有效成分的分离分析中经常被使用。也可以用于无机离子的分分的分离分析中经常被使用。也可以用于无机离子的分离。还经常作为高效液相色谱的一种预试方法。离。还经常作为高效液相色谱的一种预试方法。52现在学习的是第52页，共52页