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1、血糖影响因素及血糖测定血糖影响因素及血糖测定第1页，共14页，编辑于2022年，星期二【实验目的】【实验目的】n n学习体内哪些激素对血糖浓度有影响。n n学习和掌握葡萄糖氧化酶法测血糖的原理和操作方法。第2页，共14页，编辑于2022年，星期二【实验原理】【实验原理】n n人和动物血糖浓度受神经、激素的调节，维持相对稳定。胰岛素和肾上腺素是调节血糖浓度的两种重要激素，前者使血糖浓度降低，后者使血糖浓度升高。n n葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸，并产生过氧葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及氨化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及
2、氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。与葡萄糖标准溶液比较，可计算得到血浆葡量成正比。与葡萄糖标准溶液比较，可计算得到血浆葡萄糖浓度。萄糖浓度。第3页，共14页，编辑于2022年，星期二【实验试剂与器材】【实验试剂与器材】n n速效胰岛素、盐酸肾上腺素、抗凝剂（草酸钠或草酸钾、肝素钠、柠檬酸三钠）n n禁食四小时以上兔子两只n n葡萄糖试剂盒（、标准液）n n酶标板、板条、微量进样器、注射器、烧杯n n酶标仪、生化培养箱第4页，共14页，编辑于2022年，星期二【实验步骤】【实验步骤】1 1注射激素前后血浆样品制备注射激素前
3、后血浆样品制备 （1 1）动物准备）动物准备）动物准备）动物准备:正常家兔两只正常家兔两只正常家兔两只正常家兔两只,实验前禁食实验前禁食实验前禁食实验前禁食4 4小时以上小时以上小时以上小时以上,称体重称体重称体重称体重.记录并标记录并标记录并标记录并标号。号。号。号。取血：取血：在耳缘静脉处进行，用酒精棉擦拭兔耳，使血管扩张，用棉在耳缘静脉处进行，用酒精棉擦拭兔耳，使血管扩张，用棉花擦干，用针筒采血或于取血处涂薄层凡士林，然后用刀花擦干，用针筒采血或于取血处涂薄层凡士林，然后用刀片割破耳缘静脉，将血液收集于草酸钠抗凝管（每片割破耳缘静脉，将血液收集于草酸钠抗凝管（每mlml约需约需2mg2m
4、g草酸钠）内草酸钠）内,边接边摇边接边摇,以防凝固，取约以防凝固，取约5ml5ml，用普通离，用普通离心机心机2000rpm2000rpm离心离心1010分钟，取上清分装备用，编号为兔分钟，取上清分装备用，编号为兔血清血清血清血清、；第5页，共14页，编辑于2022年，星期二注射激素后再取血注射激素后再取血注射激素后再取血注射激素后再取血:将一家兔皮下注射胰岛素将一家兔皮下注射胰岛素(1(1单位单位/kg/kg体重体重),),另一只家兔皮另一只家兔皮下注射肾上腺素下注射肾上腺素(0.4mg/kg(0.4mg/kg体重体重).).分别记录在注射时间分别记录在注射时间.注射肾注射肾上腺素上腺素20
5、20分钟分钟,胰岛素胰岛素3030分钟后分钟后,按上述方法或颈静脉取血各取按上述方法或颈静脉取血各取5ml5ml于抗凝管内于抗凝管内,用普通离心机用普通离心机2000rpm2000rpm离心离心1010分钟，取上清分分钟，取上清分装备用，编号为兔血清装备用，编号为兔血清、第6页，共14页，编辑于2022年，星期二二二二二.血浆样品萄葡糖测定血浆样品萄葡糖测定 工作试剂配置：工作试剂配置：工作试剂配置：工作试剂配置：取一支试管，加入取一支试管，加入取一支试管，加入取一支试管，加入R1 4.5mlR1 4.5mlR1 4.5mlR1 4.5ml与与与与R2 0.5mlR2 0.5mlR2 0.5m
6、lR2 0.5ml混合。混合。混合。混合。取酶标板一块，板条一条，加入板框中，设定空白管取酶标板一块，板条一条，加入板框中，设定空白管取酶标板一块，板条一条，加入板框中，设定空白管取酶标板一块，板条一条，加入板框中，设定空白管A1A1A1A1，标准管，标准管，标准管，标准管A2.A3A2.A3A2.A3A2.A3，测定管，测定管，测定管，测定管A4.A5A4.A5A4.A5A4.A5，A6.A7A6.A7A6.A7A6.A7，A8.A9A8.A9A8.A9A8.A9，A10.A11A10.A11A10.A11A10.A11（做两管取平均值，可减少实验误差）（做两管取平均值，可减少实验误差）（做
7、两管取平均值，可减少实验误差）（做两管取平均值，可减少实验误差）第7页，共14页，编辑于2022年，星期二n n混匀，37保温15min，以空白管调零，505nm波长处测定各管吸光度值。n n计算 血糖含量=A样/A标标准溶液浓度第8页，共14页，编辑于2022年，星期二加入物加入物加入物加入物（ulul）A1A1A2A2A3A3A4A4A5A5A6A6A7A7A8A8A9A9 A10A10A11A11葡萄糖标准葡萄糖标准葡萄糖标准葡萄糖标准液液液液3 33 3蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水3 3兔血浆兔血浆兔血浆兔血浆3 33 3 3 33 3 3 33 3 3 33 3工作试剂工作试剂 3003
8、00300300300300300300300300300300300300300300300300300300300300第9页，共14页，编辑于2022年，星期二n n混匀置于37孵育箱，反应10min后，在酶标仪上进行比色测定，测定波长为492nm，用空白管A1调零，读取标准管及测定管吸光度。第10页，共14页，编辑于2022年，星期二【结果与计算】【结果与计算】n n血浆葡萄糖浓度血浆葡萄糖浓度=标准管葡萄糖浓度标准管葡萄糖浓度(5.55mmol/L)(5.55mmol/L)第11页，共14页，编辑于2022年，星期二【讨论】【讨论】1 1血糖的来源：1 1碳水化合物的消化和单糖的吸收
9、：机体进食后，食物淀粉在唾液碳水化合物的消化和单糖的吸收：机体进食后，食物淀粉在唾液淀粉酶、胰酶、小肠黏膜分泌的二糖酶作用下水解成单糖。经过淀粉酶、胰酶、小肠黏膜分泌的二糖酶作用下水解成单糖。经过载体主动转运入十二指肠和空肠壁内，并扩散入血。载体主动转运入十二指肠和空肠壁内，并扩散入血。2 2糖原的分解：在饥饿时，肝储存的糖原在葡萄糖糖原的分解：在饥饿时，肝储存的糖原在葡萄糖-6-6-磷酸酶磷酸酶作用下，分解成葡萄糖入血，是空腹血糖的直接来源也是作用下，分解成葡萄糖入血，是空腹血糖的直接来源也是维持血糖浓度恒定的重要机制。维持血糖浓度恒定的重要机制。3 3糖异生：空腹时，体内的非糖物质如氨基酸
10、、乳酸和甘油糖异生：空腹时，体内的非糖物质如氨基酸、乳酸和甘油可经肝脏的糖异生作用生成葡萄糖，参与血糖的恒定。可经肝脏的糖异生作用生成葡萄糖，参与血糖的恒定。第12页，共14页，编辑于2022年，星期二二、血糖的去路：1 1有氧氧化有氧氧化 2 2合成糖原合成糖原 3 3转换成甘油三酯、蛋白质或氨基酸等非糖物质。转换成甘油三酯、蛋白质或氨基酸等非糖物质。4 4当血糖浓度高于肾糖阈时，从尿排出。当血糖浓度高于肾糖阈时，从尿排出。三、血糖的调节：1 1降血糖的激素主要是胰岛素，另有胰岛素样生长因子降血糖的激素主要是胰岛素，另有胰岛素样生长因子 2 2升血糖激素有胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质
11、醇。升血糖激素有胰高血糖素、肾上腺素、生长激素和皮质醇。第13页，共14页，编辑于2022年，星期二四、测定的临床意义：1 1生理性高血糖：摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时生理性高血糖：摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时 2 2病理性高血糖：病理性高血糖：（1 1）糖尿病）糖尿病 （2 2）内分泌腺功能障碍）内分泌腺功能障碍 （3 3）颅内压增高）颅内压增高 （4 4）脱水引起高血糖）脱水引起高血糖 3 3生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动 4 4病理性低血糖：（病理性低血糖：（1 1）胰岛）胰岛B B细胞增生和胰岛细胞增生和胰岛B B细胞瘤等，胰岛素分泌过多。细胞瘤等，胰岛素分泌过多。（2 2）对抗胰岛素的激素分泌不足。）对抗胰岛素的激素分泌不足。（3 3）严重肝病患者，储存糖原功能及糖异生等功能低下。）严重肝病患者，储存糖原功能及糖异生等功能低下。第14页，共14页，编辑于2022年，星期二