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1、微病毒感染的检查方法与防治原则第一页，讲稿共二十九页哦目的与要求目的与要求了解病毒的诊断，抗病毒治疗，病毒感染的预防。第二页，讲稿共二十九页哦 第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法第三页，讲稿共二十九页哦病毒感染的检查病毒感染的检查检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性抗体查特异性抗体 病毒颗粒病毒颗粒 病毒抗原病毒抗原 病毒核酸病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察电镜直接观察 光镜检查包涵体光镜检查包涵体 分离培养分离培养第四页，讲稿共二十九页哦一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：原则基本与细菌相似，但应注意：1.1.
2、标本用标本用“双抗双抗”或两性霉素或两性霉素B B处理处理 2.2.低温保存，尽快送检低温保存，尽快送检 3.3.血清学诊断采双份血清血清学诊断采双份血清第五页，讲稿共二十九页哦二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 细胞培养细胞培养（cell culture）鸡胚接种鸡胚接种（egg inoculation）动物接种动物接种（animal inoculation）第六页，讲稿共二十九页哦1 1.鸡胚培养鸡胚培养 采用孵化采用孵化9 91414天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜 痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗
3、病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔尿囊腔尿囊腔尿囊腔接种部位接种部位接种部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔羊膜腔羊膜腔羊膜腔 流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离 卵黄囊卵黄囊 嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒 第七页，讲稿共二十九页哦第八页，讲稿共二十九页哦1 1、鸡胚培养、鸡胚培养优点：优点：易管理，不带微生物，成本较低易管理，不带微生物，成本较低缺点：缺点：操作程序复杂操作程序复杂第九页，讲稿共二十九页哦第十页，讲稿共二十九页哦2 2.动物接种动物接种 应用：应用：尚无敏感细胞的病毒培
4、养尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养 动物：动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：优点：结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型 缺点：缺点：缺点：缺点：有饲养条件要求，费用高，动物有饲养条件要求，费用高，动物有饲养条件要求，费用高，动物有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒第十一页，讲稿共二十九页哦病毒的分离培养病毒的分离培养 3.3.细胞培养细胞培养 单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养（monolaye
5、r cell culturemonolayer cell culture）分类分类 悬浮细胞培养悬浮细胞培养（suspended cell culture）原代细胞（原代细胞（primary cellprimary cell）细胞种类细胞种类 二倍体细胞（二倍体细胞（diploid cell）传代细胞系（传代细胞系（传代细胞系（传代细胞系（continuous cell line）第十二页，讲稿共二十九页哦病毒的细胞培养病毒的细胞培养细胞培养瓶细胞培养瓶单层细胞单层细胞第十三页，讲稿共二十九页哦1 1病毒增殖鉴定病毒增殖鉴定 (1)(1)(1)(1)细胞病变效应细胞病变效应细胞病变效应细胞病变
6、效应（cytopathic effect,effect,CPE）细细细细胞胞胞胞变变变变圆圆圆圆、聚聚聚聚集集集集、坏坏坏坏死死死死、溶溶溶溶解解解解或或或或脱脱脱脱落落落落等等等等（多多多多数数数数病毒）；病毒）；病毒）；病毒）；形形成成多多核核巨巨细细胞胞或或称称融融合合细细胞胞（麻麻疹疹病病毒毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；在在培培养养细细胞胞中中形形成成包包涵涵体体（狂狂犬犬病病病病毒毒、麻疹病毒等）。麻疹病毒等）。（二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定 第十四页，讲稿共二十九页哦细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落第十五页，讲
7、稿共二十九页哦麻疹病毒感麻疹病毒感染细胞染细胞呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒感染细胞感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)第十六页，讲稿共二十九页哦形成包涵体形成包涵体(inclusion bodyinclusion bodyinclusion bodyinclusion body)(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)第十七页，讲稿共二十九页哦腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞腮腺
8、炎病毒感染细胞(2 2)红细胞吸附（红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素病毒囊膜表面血凝素(HAHA)红细胞表面红细胞表面HAHAHAHA受体受体第十八页，讲稿共二十九页哦(3 3)干扰现象（干扰现象（interference）风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，CPECPECPECPE()埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPECPE()人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒？埃可病毒埃可病毒CPE(-)CPE(-)CP
9、E(-)CPE(-)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(+)+)+)+)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(-)(-)(-)(-)CPE(+)CPE(+)CPE(+)CPE(+)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(-)(-)(-)(-)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(+)(+)(+)(+)第十九页，讲稿共二十九页哦2.2.病毒数量与感染性测定病毒数量与感染性测定1 1.蚀斑形成试验蚀斑形成试验蚀斑形成试验蚀斑形成试验 （plaque formation testplaque formation test）2.2.5050组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量 （5050 tiss
10、ue culturetissue culture infectious dose,TCIDTCID5050）感染性病毒量感染性病毒量第二十页，讲稿共二十九页哦2 2.病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大对一般病毒检测意义不大对一般病毒检测意义不大对一般病毒检测意义不大第二十一页，讲稿共二十九页哦3 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定 用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型用
11、已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型 (1 1)血凝抑制试验血凝抑制试验-正粘病毒型与亚型鉴定正粘病毒型与亚型鉴定 病毒病毒病毒病毒鸡红细胞鸡红细胞凝集凝集（血凝试验）（血凝试验）病毒病毒特异性抗体特异性抗体鸡红细胞鸡红细胞不凝集不凝集不凝集不凝集 （血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验）(2)(2)免疫标记法（免疫标记法（免疫标记法（免疫标记法（FIAFIA、EIAEIAEIAEIA、RIARIA）多种病毒鉴定多种病毒鉴定第二十二页，讲稿共二十九页哦三、病毒分子生物学鉴定三、病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增核酸扩增 核酸杂交核酸杂交 基因芯片基
12、因芯片 基因测序基因测序基因测序基因测序第二十三页，讲稿共二十九页哦四、病毒感染的血清学诊断四、病毒感染的血清学诊断应用：应用：采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚目目目目前前前前尚尚尚尚无无无无分分分分离离离离此此此此病病病病毒毒毒毒的的的的方方方方法法法法或或或或难难难难以以以以分分分分离离离离的的的的病病病病毒毒毒毒为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等第二十四页，讲稿共二十九页哦1 1.中和试验（中和试验（neutralizing test）病毒病毒病毒病毒中和抗体
13、中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性 特点：特点：特点：特点：特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长应用：应用：人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查 临床诊断少用临床诊断少用第二十五页，讲稿共二十九页哦五、病毒感染的快速诊断五、病毒感染的快速诊断数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果病毒颗粒病毒颗粒病毒颗粒病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测早期抗体检测（I IgMgM）第二十六页，讲稿共二十九页哦病毒的快速诊
14、断病毒的快速诊断光镜光镜-包涵体电镜电镜免疫荧光免疫荧光ELISA分子生物学技术分子生物学技术杂交Southern blotPCRNorthern blot第二十七页，讲稿共二十九页哦第二节第二节 病毒感染的防治原则病毒感染的防治原则第二十八页，讲稿共二十九页哦灭活疫苗（灭活疫苗（inactivated vaccineinactivated vaccine）活疫苗（活疫苗（living vaccineliving vaccine）重组载体疫苗（重组载体疫苗（重组载体疫苗（重组载体疫苗（recombinant carrier vaccinerecombinant carrier vaccine）亚单位疫苗（亚单位疫苗（subunit vaccine）化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（重组疫苗（recombinant vaccinerecombinant vaccine）核酸疫苗（核酸疫苗（核酸疫苗（核酸疫苗（nucleic acid vaccine）一、人工主动免疫常用生物制品一、人工主动免疫常用生物制品第二十九页，讲稿共二十九页哦