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1、放射自显影影像第1页，此课件共69页哦l本章重点：l放射自显影的定义l放射自显影的基本类型和基本方法l放射自显影的感光材料第2页，此课件共69页哦一 概述l1、定、定义：l放射自放射自显影影:利用射利用射线使感光材料感光形成潜影，使感光材料感光形成潜影，经显影定影后形成影定影后形成图像；判断放射性示踪像；判断放射性示踪剂的分布部的分布部位和数量（半定量）的技位和数量（半定量）的技术。第3页，此课件共69页哦第4页，此课件共69页哦2、放射自显影的发展、放射自显影的发展l1867年年:铀盐可以使可以使银离子感光；离子感光；l1924年年 Lacassagne 应用于研究用于研究钚在生物在生物标本
2、中的分布本中的分布l1946年，年，Belanger和和Leblond首首次建立次建立现代放射自代放射自显影的方法。影的方法。第5页，此课件共69页哦3、放射自、放射自显影的影的优点点1 1）灵敏度高。）灵敏度高。2 2）定位准确，能把定位和定量结合分析）定位准确，能把定位和定量结合分析3 3）感光材料具有累积成像的效应，所需的放射性物质可极微量。）感光材料具有累积成像的效应，所需的放射性物质可极微量。4 4）操作简单易行，不需要复杂昂贵的设备。）操作简单易行，不需要复杂昂贵的设备。5 5）形态、机能和代谢的综合分析）形态、机能和代谢的综合分析 6 6）结果可以长期保存）结果可以长期保存第6页
3、，此课件共69页哦l局限性：局限性：1 1、实验周期长。、实验周期长。2 2、定量不准确，只能半定量。、定量不准确，只能半定量。第7页，此课件共69页哦4 4、应用举例、应用举例l药物、营养物质、毒物等在器官、组织、细胞中的分布、运转l研究特异性标记前体的参入部位、特点、影响因素l标记抗体或药物在离体标本上进行抗原研究或受体的定位示踪第8页，此课件共69页哦二 放射自显影的原理l（一）潜影形成的原理：（一）潜影形成的原理：l和普通光学摄影原理相同；和普通光学摄影原理相同；l利用射线使感光材料感光在标本中放射性存利用射线使感光材料感光在标本中放射性存在的原位置出现银颗粒的沉积。在的原位置出现银颗
4、粒的沉积。第9页，此课件共69页哦1 1、电离：释放电子、电离：释放电子l感光乳胶中每颗溴化银结感光乳胶中每颗溴化银结晶由许多晶由许多AgBrAgBr分子组成。分子组成。l制造乳胶时，都使晶体发制造乳胶时，都使晶体发生点阵上的缺陷敏化生点阵上的缺陷敏化中心。中心。第10页，此课件共69页哦具有缺陷的晶格排列l完整的晶格排列第11页，此课件共69页哦l当核射当核射线作用于溴化作用于溴化银结晶晶时，使某些分，使某些分子子电离射出离射出电子，向子，向敏化中心移敏化中心移动形成阴形成阴电层。lAgBr+-Ag+Br+e-第12页，此课件共69页哦第13页，此课件共69页哦2、Ag+离子向敏化中心移离子
5、向敏化中心移动：lAg+离子向敏化中心移离子向敏化中心移动，与，与电子子结合，即合，即射出的射出的电子被子被带正正电荷的荷的银离子俘离子俘获，形成，形成银原子。原子。lAg+e+-Ag第14页，此课件共69页哦3、形成潜影、形成潜影l许多多带正正电荷的荷的银离子被离子被显影影剂还原成原成银原原子，在子，在该溴化溴化银结晶晶颗粒中形成潜影。粒中形成潜影。第15页，此课件共69页哦第16页，此课件共69页哦l（二）潜影的消退：（二）潜影的消退：l已经还原的银原子在水、氧的作用下重新变已经还原的银原子在水、氧的作用下重新变成离子，使已经形成的潜影消退。成离子，使已经形成的潜影消退。l放射自显影的曝光
6、过程应在干燥、低温或充放射自显影的曝光过程应在干燥、低温或充氮气的环境下进行。氮气的环境下进行。第17页，此课件共69页哦（三）显影和定影l显影液将银离子还原成银颗粒的过程l显影液=显影剂+促进剂+保护剂+抑制剂l显影剂：还原作用，米吐尔、海德尔l促进剂：提供碱性环境，增加显影作用，常用碳酸钠l保护剂：中和还原产物，亚硫酸钠l抑制剂：抑制未形成潜影的银盐分解，溴化钾第18页，此课件共69页哦第19页，此课件共69页哦l定影：定影液溶解未形成潜影的银晶体。l定影液=定影剂+保护剂+停显剂+坚膜剂l定影剂：溶解银晶体，海波l保护剂：抑制定影剂被酸分解，亚硫酸钠l停显剂：终止显影液的继续作用，醋酸l
7、坚膜剂：防止乳胶膨胀、脱落、擦伤。钾矾第20页，此课件共69页哦三 放射自显影的材料（一）感光材料：（一）感光材料：l1 1、组成、组成l由由银盐和明胶银盐和明胶组成。组成。l银盐多为银盐多为卤化银卤化银，如溴化银。，如溴化银。l明胶主要起支持作用；吸水膨胀后具有通透明胶主要起支持作用；吸水膨胀后具有通透性性第21页，此课件共69页哦第22页，此课件共69页哦l2、分、分类：（1 1）原子核乳胶：）原子核乳胶：l溴化银和明胶按照一定的比例混匀制备而成；溴化银和明胶按照一定的比例混匀制备而成；l常温下呈粘稠液状，低温下则为胶冻状，温常温下呈粘稠液状，低温下则为胶冻状，温度升至度升至4040左右时
8、为液态。左右时为液态。l可以根据使用需要制备成各种形态可以根据使用需要制备成各种形态第23页，此课件共69页哦l液体核乳胶：液体核乳胶：由溴化银和明胶按照由溴化银和明胶按照8080：2020的比例混合制备，可的比例混合制备，可制备成不同形状和厚度。制备成不同形状和厚度。l核乳胶干板：核乳胶胶片核乳胶干板：核乳胶胶片l揭膜核乳胶：揭膜核乳胶：第24页，此课件共69页哦中国原子能科学研究院物理生产的核乳胶中国原子能科学研究院物理生产的核乳胶乳胶型号 核-2核-4HW-3HW-4银晶直径（m）0.170.240.10-0.110.14适用范围 粒子11MeV以下的质子所有带电粒子所有带电粒子（电镜自
9、显影）第25页，此课件共69页哦l（2）氚片：l由溴化银、碘化银和明胶组成。l银晶体颗粒平均直径为1ml单面涂胶l主要用于3H标记化合物的自显影第26页，此课件共69页哦l（3）X线片：l由溴化银、碘化银和明胶组成。l银晶体颗粒平均直径为2.5ml双面或单面涂胶l主要用于射线能量较高的宏观自显影第27页，此课件共69页哦乳胶类型乳胶类型溴化银直径溴化银直径（m）乳乳胶胶层层的的厚厚度（度（m）用途用途原子核乳胶原子核乳胶0.10.24光光镜镜、电电镜镜自显影自显影氚片氚片1.0510宏观自显影宏观自显影X光片光片2.53.01530核核素素能能量量较较高高宏宏观观自自显显影影第28页，此课件共
10、69页哦l（4）自）自显影增影增强剂：l在感光材料里面加入在感光材料里面加入荧光材料或将光材料或将荧光材料制作成薄膜覆盖在凝胶表面。光材料制作成薄膜覆盖在凝胶表面。l感光材料在射感光材料在射线和光子的双重作用下面感光，可以和光子的双重作用下面感光，可以缩短短实验周期。周期。第29页，此课件共69页哦暗盒和增强屏第30页，此课件共69页哦l（5）磷屏成像：）磷屏成像：l用可重复使用的磷屏作用可重复使用的磷屏作为成像成像板板l专门的的读出装置。出装置。第31页，此课件共69页哦计算机磷屏成像系算机磷屏成像系统第32页，此课件共69页哦l优点：点：可用于多种核素的宏可用于多种核素的宏观自自显影影操作
11、操作简便便不需胶片和不需胶片和显影定影等照相影定影等照相处理步理步骤磷屏可以重复使用磷屏可以重复使用l缺点：缺点：分辨率分辨率较低低目前目前还不能用于高倍光不能用于高倍光镜和和电镜自自显影影仪器价格比器价格比较昂昂贵第33页，此课件共69页哦（二）放射自（二）放射自显影中常用的放射性核素影中常用的放射性核素l应考考虑其射其射线的种的种类、能量和半衰期。、能量和半衰期。l3H、14C、35S、45Ca、32P、33P、131I、125I、99mTc等。等。l发射射 射射线的核素毒性都的核素毒性都较大，一般不用于示踪研究。大，一般不用于示踪研究。l单纯的的发射射 射射线的放射性核素，的放射性核素，
12、难于在乳胶中形成潜影，自于在乳胶中形成潜影，自显影效果差影效果差。第34页，此课件共69页哦核素半衰期-粒子最大的能粒子最大的能量（量（MeV）-粒子平均能量（粒子平均能量（MeV）3H14C32P35S45Ca59Fe89Sr125I131I12.33年年5730年年14.28天天87.4天天165天天44.6天天50.5天天60.2天天8.04天天0.01880.1551.710.1670.2580.461（51%）0.269（47%）1.4880.6070.0050.050.6950.0550.100.120.570.0037内内0.0227俄俄0.205放射自显影常用的放射性核素放射自
13、显影常用的放射性核素第35页，此课件共69页哦四 放射自显影的基本技术和方法l（一）主要（一）主要类型：型：l宏宏观自自显影：整体水平影：整体水平l光光镜自自显影：影：细胞水平胞水平l电镜自自显影：影：亚细胞水平胞水平第36页，此课件共69页哦l1、宏、宏观自自显影：影：l常用肉眼、放大常用肉眼、放大镜或低倍或低倍显微微镜观察察l用灰度或黑度用灰度或黑度对比来判断示踪比来判断示踪剂的部位和数的部位和数量量l优点是可以同点是可以同时观察各察各脏器、器、组织中放射性中放射性示踪示踪剂的分布，多用于小的分布，多用于小动物的整体物的整体标本，本，大大动物的物的脏器或肢体，以及各种器或肢体，以及各种电泳
14、泳谱、色、色谱和免疫沉淀板等的示踪研究。和免疫沉淀板等的示踪研究。第37页，此课件共69页哦第38页，此课件共69页哦第39页，此课件共69页哦小鼠小鼠头部的宏部的宏观自自显影影第40页，此课件共69页哦凝胶凝胶电泳的自泳的自显影影结果果第41页，此课件共69页哦核酸核酸电泳展开板的放射自泳展开板的放射自显影影第42页，此课件共69页哦l2、光、光镜自自显影：影：l以光学以光学显微微镜为工具工具进行行观察，以察，以镜下的下的银颗粒分布及数量来判断放射性核素示踪粒分布及数量来判断放射性核素示踪剂的的部位和数量。部位和数量。l镜下的下的银颗粒粒为黑色或深棕色的小黑色或深棕色的小圆点点l适用于冰适用
15、于冰冻组织切片、石蜡切片、石蜡组织切片，血切片，血细胞涂片、骨髓胞涂片、骨髓细胞涂片等胞涂片等标本的示踪研究。本的示踪研究。第43页，此课件共69页哦第44页，此课件共69页哦放射自显影检测寄生虫感染中的脾细胞放射自显影检测寄生虫感染中的脾细胞第45页，此课件共69页哦l3、电镜自自显影：影：l以以电子子显微微镜观察，以察，以电镜下下银颗粒的分布粒的分布及数量来判断。及数量来判断。l电镜下下电子子轨迹迹为蛇蛇样扭曲扭曲l适用于适用于细胞超微胞超微结构上的精确定位和定量构上的精确定位和定量第46页，此课件共69页哦第47页，此课件共69页哦蛇毒素与乙酰胆碱受体结合第48页，此课件共69页哦（二）
16、基本方法（二）基本方法1、基本步、基本步骤：l示踪示踪：向：向实验动物体内或离体物体内或离体标本上引入放射性核素本上引入放射性核素标记物。物。l标本制本制备：取生物：取生物标本并制本并制备成含放射性核素的切片、成含放射性核素的切片、涂片涂片l自自显影制影制备：暗室中在制：暗室中在制备的的标本上敷加感光材料。本上敷加感光材料。l曝射曝射：避光条件下核射：避光条件下核射线作用于感光乳胶。作用于感光乳胶。l照相照相处理理：显影、定影、水洗、干燥、染色、封固。影、定影、水洗、干燥、染色、封固。l阅读分析分析。第49页，此课件共69页哦2、示踪、示踪剂引入的方法引入的方法体内体内实验：可由静脉、皮下、肌
17、肉、腹腔：可由静脉、皮下、肌肉、腹腔注射或直接注射或直接脑内注射和灌胃等途径内注射和灌胃等途径给入放射入放射性性标记化合物。化合物。体外体外实验：可在培养瓶中：可在培养瓶中给入、或将示踪入、或将示踪剂直接加在切片上直接加在切片上进行行结合反合反应，洗去多余，洗去多余的示踪的示踪剂后再后再进行自行自显影影实验。第50页，此课件共69页哦l3、标本制本制备：l组织切片：切片：冰冰冻切片：切片：石蜡切片：石蜡切片：第51页，此课件共69页哦第52页，此课件共69页哦l整体整体动物切片：物切片：l专用整体用整体动物切片机上制成物切片机上制成第53页，此课件共69页哦第54页，此课件共69页哦l牙牙齿、
18、骨骼：制、骨骼：制备磨片磨片l体液、体液、细胞：制胞：制备涂片涂片l电镜标本：超薄切片机本：超薄切片机l其它：其它：电泳条、泳条、层析条等可干燥后使用析条等可干燥后使用第55页，此课件共69页哦l4、自、自显影片的制影片的制备方法：方法：l液体乳胶浸膜法：液体乳胶浸膜法：在在暗暗室室中中将将液液体体核核乳乳胶胶置置37 40水水浴浴融融化化，玻玻棒棒搅拌拌15min至至均均匀匀。将将载玻玻片片带标本本的的插插入入乳乳胶胶内内，浸浸沾沾乳乳胶胶，约0.5min后后缓慢慢匀匀速速地地垂垂直直提提出出。干干燥燥过夜夜。在在有有干干燥燥剂的的暗暗盒盒内内，密密封封置置4曝曝射射。然然后后显影影、定定影
19、影、染染色色、封封固固等等则在在自自显影影结束后束后进行。行。第56页，此课件共69页哦第57页，此课件共69页哦接触法：接触法：将将样品品摆放放在在合合适适的的载波波片片上上，取取与与载波波片片大大小小相相同同的的核核乳乳胶胶干干板板覆覆盖盖在在载波波片片上上，用用橡橡皮皮筋筋固固定定，外外面面包包上上黑黑纸，然然后后4度密封保存充分曝光。度密封保存充分曝光。注意：接触松注意：接触松紧要适当以免引起要适当以免引起挤压效效应第58页，此课件共69页哦接触法示意图接触法示意图第59页，此课件共69页哦湿湿贴法：法：暗暗室室中中将将冰冰冻切切片片直直接接贴在在干干板的乳胶面，冷板的乳胶面，冷冻干燥
20、后曝射。干燥后曝射。第60页，此课件共69页哦第61页，此课件共69页哦揭膜法：揭膜法：将将核核乳乳胶胶制制备成成核核乳乳胶胶揭揭膜膜，悬浮浮于于液液体体中中。用用固固定定好好样品品的的载波波片片在在液液体体中中捞取取揭揭膜膜，使使揭揭膜膜覆覆盖在盖在样品上。品上。第62页，此课件共69页哦第63页，此课件共69页哦l金属金属环法：法：电镜自自显影影在暗室内融化乳胶，按在暗室内融化乳胶，按说明明书要求稀要求稀释，降温至降温至25，用不，用不锈钢制成的金属制成的金属环（直（直径径4毫米）插入乳胶液中，毫米）插入乳胶液中，轻轻垂直提取，垂直提取，金属金属环上即形成上即形成单层乳胶膜。将乳胶膜。将环
21、套在套在载有有超薄切片的超薄切片的铺有火棉胶的有火棉胶的铜网上，网上，单层乳胶乳胶膜即覆盖在切片表面。曝射后膜即覆盖在切片表面。曝射后显影定影，干影定影，干燥后即可在燥后即可在电镜下下观察。察。第64页，此课件共69页哦第65页，此课件共69页哦l5、曝射、曝射l放射自放射自显影的曝光影的曝光时间与所使用的放射性核与所使用的放射性核素种素种类有关。有关。125I需要感光需要感光48小小时以上。以上。14C要数天几周。要数天几周。3H要要10天以上，天以上，12个月。个月。第66页，此课件共69页哦l6、显像像处理：理：l显影：影：18-20，2-4min2-4minl定影：定影：18-20，8
22、-15min8-15minl水洗：清除残余水洗：清除残余显影、定影影、定影剂，20min20min以上以上l7、干燥、染色和封固：、干燥、染色和封固：l干燥箱干燥干燥箱干燥l常常规苏木素木素-伊伊红染色染色l盖玻片封固盖玻片封固第67页，此课件共69页哦五、放射自显影的影响因素l（一）放射自显影的分辩力l指2个相邻的放射性核素分子在标本中仍能显示为2个颗粒的最短距离。第68页，此课件共69页哦l分辩力的影响因素l1、乳胶中银颗粒的大小和密度：颗粒越小，密度约高，分辩力越高l2、乳胶厚度：越厚，分辩力越低l3、样品厚度：样品越厚，分辩力越低l4、样品与乳胶间的间隙：间隙越大，分辩力越低第69页，此课件共69页哦