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1、维生素胶丸中维生素的含量测定第1页，共18页，编辑于2022年，星期二 维生素维生素A的结构为具有一个共轭多烯醇侧链的环的结构为具有一个共轭多烯醇侧链的环己烷，由于其中有多个不饱和键，性质不稳定，易己烷，由于其中有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，并且被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，并且其对酸不稳定。其醋酸酯比维生素其对酸不稳定。其醋酸酯比维生素A稳定，临床使用稳定，临床使用一般将本品或棕榈酸酯溶于植物油中应用。因此，维生一般将本品或棕榈酸酯溶于植物油中应用。因此，维生素素A及其制剂除需密封在凉暗处保存外，还需充氮或加及其制剂除需密封在凉暗处保存外，还
2、需充氮或加入合适的抗氧剂。入合适的抗氧剂。维生素维生素A与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚能任意混与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。合，在乙醇中微溶，在水中不溶。第2页，共18页，编辑于2022年，星期二一、实验目的一、实验目的二、主要仪器和试剂二、主要仪器和试剂 紫外分光光度仪，紫外分光光度仪，100ml容量瓶，烧杯若干个，容量瓶，烧杯若干个，维生素维生素A胶丸（规格胶丸（规格2.5万单位万单位/粒）环己烷，乙醚粒）环己烷，乙醚 掌握掌握UV三点校正法的原理和维生素三点校正法的原理和维生素A含量含量测定的方法。测定的方法。第3页，共18页，编辑于2022年，星期二三
3、、实验原理三、实验原理 本法是在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算本法是在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算吸收度吸收度A校正值后，再计算含量，故本法称为校正值后，再计算含量，故本法称为“三点校正法三点校正法”。该原理主要基于：该原理主要基于：（1）杂质的无关吸收在杂质的无关吸收在310nm340nm的波长范围内的波长范围内 几乎呈一条直线，且随波长的增长吸收度下降。几乎呈一条直线，且随波长的增长吸收度下降。（2）物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸）物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸 收曲线上，各波长处的吸收度是维生素收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸与杂
4、质吸 收度的代数和，因而吸收曲线也是二者的叠加。收度的代数和，因而吸收曲线也是二者的叠加。第4页，共18页，编辑于2022年，星期二（一）胶丸内容物平均重量的测定（一）胶丸内容物平均重量的测定四、实验过程四、实验过程 取胶丸取胶丸20粒，精密称定，用注射将内容物抽出，粒，精密称定，用注射将内容物抽出，再用刀片切开丸壳，用乙醚逐个洗涤丸壳三次，置再用刀片切开丸壳，用乙醚逐个洗涤丸壳三次，置50 ml烧杯中，再用乙醚浸洗烧杯中，再用乙醚浸洗12次，置通风处，使乙醚次，置通风处，使乙醚挥散，精密称定，算出每丸内容物的平均重量。挥散，精密称定，算出每丸内容物的平均重量。第5页，共18页，编辑于2022
5、年，星期二四、实验过程四、实验过程（二）供试品溶液的制备与测定（二）供试品溶液的制备与测定 取维生素取维生素AD胶丸内容物适量，精密称定，用环己烷胶丸内容物适量，精密称定，用环己烷溶解并定量稀释成每溶解并定量稀释成每1 mL中含中含915单位的溶液。按照分单位的溶液。按照分光光度法，测定其吸收峰的波长，并在下列各波长处测定光光度法，测定其吸收峰的波长，并在下列各波长处测定吸收度。计算各吸收度与波长吸收度。计算各吸收度与波长328 nm处吸收度的比值和波处吸收度的比值和波长长328 nm处的处的E1%1cm值。值。第一法第一法第6页，共18页，编辑于2022年，星期二计算计算 求求 ：由：由 A
6、=CL，求得求得 =A/（CL）。）。求效价（求效价（IU/g）：效价系指每克供试品中所含）：效价系指每克供试品中所含维生素维生素A的国际单位数（的国际单位数（IU/g）。）。即即IU/g=1900。求维生素求维生素A占标示量的百分含量：占标示量的百分含量：标示量标示量%=（AD1900W100%）/（W100L标示量）标示量）100%。第7页，共18页，编辑于2022年，星期二A值的选择值的选择首先计算吸收度比值（即首先计算吸收度比值（即Ai/A328）如果最大吸收波长在如果最大吸收波长在326nm329nm之间，并分之间，并分别计算别计算5个波长下的差值，均不得超过个波长下的差值，均不得超
7、过0.02时，则不时，则不用校正公式计算吸收度，而直接用用校正公式计算吸收度，而直接用328nm处测得的吸处测得的吸收度收度A328求得。求得。如果最大吸收波长在如果最大吸收波长在326nm329nm之间，并之间，并分别计算分别计算5个波长下的差值，如有一个或几个超过个波长下的差值，如有一个或几个超过0.02，这时应按以下方法判断：，这时应按以下方法判断：第8页，共18页，编辑于2022年，星期二 若若A328（校正）（校正）与与A328的吸收度相差不超过的吸收度相差不超过3.0%，则不用校正，则不用校正吸收度，仍以未经校正的吸收度，仍以未经校正的A328求得求得 。若若A328（校正）（校正
8、）与与A328的吸收度相差在的吸收度相差在-15%-3%之间，则以之间，则以A328（校正）（校正）得得 。若若A328（校正）（校正）与与A328的吸收度相差小于的吸收度相差小于-15%或大于或大于+3%，则，则不能用本法测定，而应用第二法（皂化法）测定含量。不能用本法测定，而应用第二法（皂化法）测定含量。如果最大吸收波长不在如果最大吸收波长不在326nm329nm之间，也不能用本法之间，也不能用本法测定，而应用第二法（皂化法）测定含量。测定，而应用第二法（皂化法）测定含量。第一法校正公式：第一法校正公式：A328(校正校正)=3.52(2A328-A316-A340)第9页，共18页，编辑
9、于2022年，星期二维生素维生素A吸收度差值吸收度差值第10页，共18页，编辑于2022年，星期二由扫描结果得最大吸收波长为由扫描结果得最大吸收波长为327.7nm（326329nm）各个差值均不超过各个差值均不超过0.02，不需用校正公式。故直接用，不需用校正公式。故直接用A328进进行计算。行计算。（328）=A328/（100ms/D）=0.746/(1000.0048/100)=155.42效价效价=1900=155.421900=295298标示量标示量%=(AD1900W)/(W100L标示量标示量)100%=(0.74610019000.08714)/(0.0048 100125
10、000)100%=102.9%第11页，共18页，编辑于2022年，星期二二法：二法：方法：精密称取一定量供试品，加氢氧化钾乙醇溶液后煮沸回流，方法：精密称取一定量供试品，加氢氧化钾乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最得到的皂化液再经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每后用异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素中含维生素A为为915单位的溶单位的溶液，在液，在300、310、325、334波长处测定吸光度，并确定最大波长处测定吸光度，并确定最大吸收波长。计算同第一法，换算因子为吸收波长。计算同第一法，换算因子为183
11、0。二法校正公式：二法校正公式：A325（校正）（校正）=6.815A3252.5553104.260A334第12页，共18页，编辑于2022年，星期二讨讨 论：论：1、维生素、维生素A具有紫外吸收特征，在具有紫外吸收特征，在325nm328nm的的范围内有最大吸收；并且，它能与三氯化锑试剂作用，范围内有最大吸收；并且，它能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。故可利用这些性质对其进行鉴别和产生不稳定的蓝色。故可利用这些性质对其进行鉴别和含量测定。含量测定。2、维生素、维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；维生素式法（即代数法）
12、推导而来；维生素A醇的吸收度醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称校正公式是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）定位法）推导而来。推导而来。第13页，共18页，编辑于2022年，星期二3、在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波、在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此，在测定前务必要校正波长，并可用全反式维生因此，在测定前务必要校正波长，并可用全反式维生素素A进行测定，比较测定结果和比值是否
13、与对照品相进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品符合，以进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品应不得少于两份。应不得少于两份。第14页，共18页，编辑于2022年，星期二4、本组在对维生素、本组在对维生素A含量测定实验中出现过一些问题。第含量测定实验中出现过一些问题。第一次用一法测定结果不符合规定，按照要求应该用二法测一次用一法测定结果不符合规定，按照要求应该用二法测定。但分析原因后，我们重新做了一遍，用一法测定取得定。但分析原因后，我们重新做了一遍，用一法测定取得了较好结果，所给维生素了较好结果，所给维生素A含量符合规定。含量符合规定。我们发
14、现第一次实验失败的原因是：我们发现第一次实验失败的原因是：紫外分光光度计出现了紫外分光光度计出现了问题，波长不准确，从而导致在相应波长下测得的吸收度不准问题，波长不准确，从而导致在相应波长下测得的吸收度不准确。可见仪器波长的准确与否在实验中是致关重要的。确。可见仪器波长的准确与否在实验中是致关重要的。整个整个操作过程没有进行暗室操作，在光照下暴露了较长时间，而维操作过程没有进行暗室操作，在光照下暴露了较长时间，而维生素生素A不稳定，见光易变质，所以导致测定含量不准。不稳定，见光易变质，所以导致测定含量不准。第15页，共18页，编辑于2022年，星期二另外，在操作中应注意：另外，在操作中应注意：
15、在含量测定时胶壳要尽量洗干净，避免内容物残留，在含量测定时胶壳要尽量洗干净，避免内容物残留，使粒重尽量准确。使粒重尽量准确。由于所取的样品量非常小，所以用于收集样品的小由于所取的样品量非常小，所以用于收集样品的小烧杯一定要用溶剂洗涤多次并合并入容量瓶中，容量烧杯一定要用溶剂洗涤多次并合并入容量瓶中，容量瓶口也要冲洗使样品全部转入。瓶口也要冲洗使样品全部转入。在测定不同波长下的吸收度时每一次都要用空白液进行在测定不同波长下的吸收度时每一次都要用空白液进行调零。调零。第16页，共18页，编辑于2022年，星期二 按下列操作步骤制备供试品溶液，请计算应取胶丸按下列操作步骤制备供试品溶液，请计算应取胶丸内容物多少内容物多少g？（已知胶丸内容物平均重量为？（已知胶丸内容物平均重量为W）精密）精密称取胶丸内容物称取胶丸内容物X g，置，置100 ml量瓶中，加环己烷稀量瓶中，加环己烷稀释至刻度，摇匀，在精密量取释至刻度，摇匀，在精密量取2 ml，置另一，置另一25 ml量瓶量瓶中，加环己烷稀释至刻度，摇匀，即得（中，加环己烷稀释至刻度，摇匀，即得（915单位单位mL-1）。）。思考题思考题第17页，共18页，编辑于2022年，星期二第18页，共18页，编辑于2022年，星期二