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1、目录目录1小麦淀粉粉酒精发发酵工艺艺2摘要2关键词21 材料，试试剂，药药品和仪仪器 21.1材材料 21.2试试剂 21.3药药品 31.4主主要仪器器 32 实验方法法与步骤骤 32.1实实验方法法 32.2实实验工艺艺流程 32.3具具体实验验步骤 42.3.1 拌拌料42.3.2 蒸蒸煮糊化化42.3.3 糖糖化42.3.4 发发酵43 分析项目目与方法法步骤 63.1发发酵液中中还原糖糖含量的的测定 63.2发发酵成熟熟醪液中中酸度的的测定 73.3发发酵成熟熟醪液中中酒精度度的测定定 74 实验结果果与分析析 85 实验总结结 116 心得体会会 127 参考文献献 12小麦粉清清
2、夜酒精精发酵工工艺摘要：该该实验通通过四水水平三因因素正交交实验，得得到了再再小麦淀淀粉酒精精发酵过过程中，添添加不同同接种量量、不同同液化酶酶和糖化化酶量等等条件下下发酵的的最优条条件，酒酒精学名名乙醇，是是由碳、氢氢、氧三三种元素素组成的的有机化化合物，分分子式：C2HH5OHH，相对对分子量量为466。酒精生产产工业化化始于十十九世纪纪，至今今已有百百余年的的历史。在在能源紧紧缺的今今天，酒酒精将以以新能源源的角色色来代替替其他化化学能源源，缓和和世界能能源危机机。因此此，掌握握和改进进酒精发发酵的生生产工艺艺是非常常必要的的。酒精精生产的的方法有有两种，即即化学合合成法和和微生物物发酵
3、法法，而工工业生产产以微生生物发酵酵法为主主，就是是采用微微生物酵母母菌在无无氧条件件下，将将糖转化化为乙醇醇的生产产方式。而而影响酒酒精发酵酵的因素素很多，其其中的氮氮源和淀淀粉的糖糖化程度度是对酒酒精发酵酵的影响响至关重重要的，因因为氮源源和还原原性糖食食酵母菌菌生长和和繁殖的的必要物物质，直直接酵母母菌的生生长质量量和数量量，从而而影响了了酒精发发酵的出出酒率和和淀粉的的利用率率。关键词：小麦淀淀粉 酒精精发酵 酵母母菌 还原原性糖1. 材料 试剂 药品品和仪器器1.1材材料菌种：酿酒酵酵母原料：小麦面面粉酶制剂剂：-淀粉粉酶（8850uu/g），糖糖化酶（3300000u/g）1.2试
4、试剂斐林试试剂 甲液液：称取取40gg硫酸铜铜（CuuSo445H22O），用用水溶解解并稀释释至10000mml。 乙液液：称取取2000g酒石石酸钾钠钠，1550g氢氢氧化钠钠，用水水溶解并并稀释至至10000mll。20%氢氧化化钠溶液液 称取取2000g氢氧氧化钠，用用水溶解解并稀释释至10000mml。2%盐盐酸溶液液 量取取4.55毫升浓浓盐酸，用用95.5毫升升水稀释释。1%次次甲基蓝蓝溶液 称取取1g次次甲基蓝蓝，加水水1000毫升，加加热溶解解，储存存于棕色色瓶中。0.22%标准准葡萄糖糖溶液 准确确称取22g无水水葡萄糖糖（预先先在10001055烘干），用用水溶解解，加5
5、5ml浓浓盐酸，用用水定容容至10000mml。0.11%标准准葡萄糖糖溶液 准确确称取11g无水水葡萄糖糖（预先先在10001055烘干），用用水溶解解，加55ml浓浓盐酸，用用水定容容至10000mml。1.3药药品硫酸铜 磷酸酸二氢钾钾 酵酵母膏 氢氢氧化钠钠酒石酸钾钾钠 无无水葡萄萄糖 可溶性性淀粉 浓盐盐酸 次甲基蓝蓝1.4主主要仪器器恒温水浴浴锅 电子天天平 蒸馏装装置 酒精计计恒温培养养箱 高压灭灭菌锅 电炉 鼓鼓风干燥燥箱 温度度计 三角瓶瓶 铁架台台 烧烧杯2. 试验方法法与聚2.1实实验方法法： 将将小麦粉粉按1：4.00的料水水比在一一个容器器中揉洗洗出淀粉粉，搅匀匀，在
6、1100水浴锅锅中糊化化1h，放放入水浴浴锅前加加入-淀粉粉酶（88u/gg干面粉粉重量）而而后在1100灭菌锅锅中再液液化900minn，取出出后冷至至60，加入入糖化酶酶（1550g/g干面面粉重量量），水水浴保温温30mmin，在在无菌条条件下，按按正交实实验表，每每瓶2440mll的量将将糖化液液分装于于灭过菌菌的5000mll三角瓶瓶中。加加入不等等量的活活化过的的酵母，封封装好后后放入恒恒温箱中中，进行行发酵。发发酵完全全后，测测出酒精精含量，计计算淀粉粉利用率率，找出出最优条条件。2.2实实验工艺艺流程小麦面粉-淀粉酶 蒸煮糊化（100 1h）糖化酶 糖化（60 30min）酒母
7、活化 分装发酵 前24h 30 24h后34蒸馏测定酒精 分析 计算找出最优条件2.3具具体实验验步骤2.3.1拌料料 称取取 1kkg 面面粉和 40000mll水，在在干锅内内搅拌均均匀，（由由于每个个三角瓶瓶内需装装2400ml料料液，即即料水比比为1：4.00。正交交实验共共需166份料液液。2.3.2蒸煮煮糖化 将搅拌拌好的料料液，加加入不等等量的aa-淀粉粉酶（ 6、88、100、122）在1100水浴锅锅中糊化化60mmin。2.3.3糖化化将糊化好好的料液液温度降降至600，加入入不等量量糖化酶酶（ 55、6、77、8）。在在水浴锅锅中保温温30mmin。取取出后再再分别加加入
8、酵母母膏5gg磷酸二二氢钾33g，灭灭菌后备备用。2.3.4发酵酵2.3.4.11具体步步骤： （11）原菌菌种：将将菌种在在恒温水水浴锅中中30活化115miin。 （2）大大三角瓶瓶培养：将活化化的菌种种，在无无菌条件件下，整整体接入入大三角角瓶（5500mml）内内，摇匀匀，封口口。放在在恒温培培养箱中中进行培培养，温温度，224h：2830，488h：33234。 （3）称称重：每每隔122h称一一次瓶重重，发酵酵48hh后每隔隔2h称称一次，记记录每次次的瓶重重。2.3.4.22设计正正交实验验表： （11）三种种因素：淀粉酶酶量，糖糖化酶量量，接种种量。 三三种因素素的用量量表如下
9、下： 因素水平Aa-淀粉粉酶（gg）B糖化酶(g)C酵母菌(g)1650.52861.031071.541282.0（2）设设计正交交试验表表格因素(列列号)试验号A-淀粉粉酶(gg)B糖化酶(g)C酵母菌(g)11111121222231333341444452123462214372341282432193134210324311133124123421313414231442314154324116441323.项目目与方法法步骤3.1发发酵液中中还原糖糖含量的的测定： （1）裴裴林试剂剂的标定定： 吸取取裴林试试剂甲、乙乙液各55ml，置置入2550mll三角瓶瓶中，加加1000ml水
10、水，并从从滴定管管中加入入约200ml00.1%标准葡葡萄糖溶溶液，（其其量应控控制在后后滴定使使消耗00.2%标准葡葡萄糖溶溶液在11ml以以内）。摇摇匀，置置于电炉炉上加热热至沸腾腾立即以以45秒一一滴的速速度继续续用0.1%标标准葡萄萄糖溶液液，滴定定至蓝色色消失，此此滴定操操作须在在1miin内完完成，总总耗糖量量为 vv0ml（2）定定糖： 预备实实验： 吸吸取裴林林试剂甲甲、乙液液各5mml置入入2500ml三三角瓶中中,准确确加入酒酒样稀释释溶液（吸吸取酒样样10mml，用用水定容容至2550mll，即将将酒样稀稀释255倍）55ml，加加水1000mll，然后后用滴定定管加入入
11、少量00.1%葡萄糖糖标准溶溶液，摇摇匀，于于电炉上上加热，当当沸腾开开始产生生第一个个气泡时时加入两两滴1%的次甲甲基蓝指指示剂，同同时记下下时间，保保持微沸沸2miin，继继续用00.1%葡萄糖糖标准溶溶液滴至至蓝色消消失，记记下总消消耗0.1%葡葡萄糖标标准溶液液ml数数（作为为正式实实验的参参考）。正式实验验： 吸取裴裴林试剂剂甲、乙乙液各55ml置置入2550mll三角瓶瓶中,准准确加入入酒样稀稀释溶液液5mll，加水水1000ml，然然后用滴滴定管加加入少量量0.11%葡萄萄糖标准准溶液，摇摇匀，于于电炉上上加热，当当沸腾开开始产生生第一个个气泡时时加入两两滴1%的次甲甲基蓝指指示
12、剂，同同时记下下时间，保保持微沸沸2miin，继继续用00.1%葡萄糖糖标准溶溶液滴至至蓝色消消失，记记下总消消耗0.1%葡葡萄糖标标准溶液液ml数数V1。（3）计计算还原糖式中：VV0-裴林试试剂标定定值(mml) V1-糖液液正式实实验消耗耗葡萄糖糖标准溶溶液的体体积（mml） CC-标准葡葡萄糖溶溶液浓度度（g/ml） VV-酒样体体积（mml） VV2-酒样稀稀释液的的定容体体积（mml）5-吸取酒酒样稀释释液的体体积（mml）100-换换算成1100mml酒样样中葡萄萄糖的含含量3.2发发酵成熟熟醪液中中酸度的的测定：(1)准准确吸取取酒样1100mml于2250mml的三三角瓶中中
13、，加11%酚酞酞指示剂剂2滴，摇摇匀，用用0.11moll/L氢氢氧化钠钠溶液滴滴至微红红，300S不褪褪色即为为终点。(2)计计算酸度(以以醋酸计计g/LL)=式中：CC-氢氢氧化钠钠溶液浓浓度（mmol/L）V-滴滴定消耗耗氢氧化化钠溶液液体积（mml）0.066-醋醋酸摩尔尔质量(kg/moll)100-酒样样体积（mml）3.3发发酵成熟熟醪液中中酒精度度的测定定： 取取1000ml的的发酵成成熟醪和和1000ml的的水，加加入5000mll的圆底底烧瓶中中，在电电炉上蒸蒸馏出1100mml的馏馏分，搅搅拌均匀匀后轻轻轻的放入入酒精计计，待稳稳定后，以以液面水水平线为为基准读读取酒精精
14、度读数数，同时时测量温温度，从从“酒精度度与温度度校正表表”求出该该温度下下的酒精精度。4.验结结果与分分析正交实验验的结果果总结如如下：瓶号空瓶重（g）发酵后重重（g）湿重变化化（g）酸度（g/ll）残还原糖糖(g/1100mml)酒精度实际酒精精度温度20酒酒精度1441.5421.020.551.92212.0059.020.009.02428.5408.819.771.49914.1159.519.559.63395.5375.020.551.0888.3009.521.009.34461.5442.019.551.90010.4409.019.559.15473.0453.020.0
15、01.42211.4458.017.008.56486.5467.519.002.14412.1159.020.558.97463.5441.122.441.6009.7008.520.008.58445.0426.518.550.98810.4408.020.008.09468.5449.019.551.78810.6609.018.559.277510477.5457.120.441.5669.3559.518.009.877511450.0439.110.991.14411.4459.021.008.812457.0437.119.991.4559.8558.019.008.213467
16、.0441.026.000.96612.2259.020.009.014467.0448.118.991.38810.8859.019.009.215466.0444.621.441.2009.95510.0020.0010.0016469.0448.021.001.18811.6658.019.558.1正交实验验的结果果的极差差分析因素(列列号)试验号A-淀粉粉(g)B糖化酶(g)C酵母菌(g)空白空白实验结果果酸度残还原糖糖酒精度11(6)1(5)1(0.5)111.92212.0059.021(6)2(6)2(1.0)221.49914.1159.631(6)3(7)3(1.5)331
17、.0888.3009.341(6)4(8)4(2.0)441.90010.4409.152(8)1(5)2(1.0)341.42211.4458.562(8)2(6)1(0.5)432.14412.1158.972(8)3(7)4(2.0)121.6009.7008.582(8)4(8)3(1.5)210.98810.4408.093(100)1(5)3(1.5)421.78810.6609.2775103(100)2(6)4(2.0)311.5669.3559.8775113(100)3(7)1(0.5)241.14411.4458.8123(100)4(8)2(1.0)131.4559.8
18、558.2134(122)1(5)4(2.0)230.96612.2259.0144(122)2(6)3(1.5)141.38810.8859.2154(122)3(7)2(1.0)411.2009.95510.00164(122)4(8)1(0.5)321.18811.6658.1酸度K16.3996.0886.3886.3555.666T=23.18K26.1446.5775.5664.5776.055K35.9335.0225.2225.2445.633K44.7225.5116.0227.0225.8441.6001.5221.6001.5991.4221.5441.6441.3991
19、.1441.5111.4881.2661.3111.3111.4111.1881.3881.5111.7661.466R0.4220.3880.299优水平A4B3C3优组合ABC残还原糖K144.9946.3354442.44541.775T=1744.555K243.7746.5545.4448.22546.11K341.22539.4440.11540.77542.555K444.7742.334543.1144.11511.22311.5591110.66110.44410.99311.66311.33512.00611.55310.3319.85510.00410.11910.664
20、11.11810.55811.22510.77811.004R0.9221.7881.311优水平A3B3C3优组合BCAK13735.8834.8834.9936.99K233.9937.6636.3335.4435.55酒精度K336.22036.6635.8835.8835.44T=1433.4K436.3333.4436.5537.3335.669.2558.9448.78.7339.2338.4889.3999.0888.8558.8889.0559.1558.9558.9558.8559.0888.3559.1339.3338.9R0.7771.0440.433优水平A1B2C2优
21、组合BAC方差分析析：1、 相对酸度度的方差差分析列出方差差分析表表如下：变异来源源dfSSS2FF0.005A30.4111.3771.1F0.005(33,155)=33.299B30.3440.11130.9004C30.19970.06660.5228e60.93330.1556e151.8880.1225总和151.888由此可见见因素AA、B、CC均不显显著。2、 相对残还还原糖的的方差分分析列出方差差分析表表如下：变异来源源dfSSS2FF0.005A32.1110.70.355F0.005(33,155)=33.299B38.8332.9441.499C34.3221.4440
22、.733e614.3382.4e1529.6641.9776总和1529.664由此可见见因素AA、B、CC均不显显著。3、 相对酒精精度的方方差分析析列出方差差分析表表如下：变异来源源dfSSS2FF0.005A31.38850.4661.866F0.005(33,155)=33.299B33.4331.1444.611*C30.45550.1550.611e61.1330.199e152.9770.24475总和156.4由此可见见因素AA、C不不显著，因因素B不不显著。5.实验验总结：本实验三三个指标标中酸度度和还原原糖量越越低越好好，酒精精度越高高越好。在在酒精度度的显著著性实验验中，
23、因因素B显显著，通通过对酒酒精度的的极差分分析，确确定最优优水平为为B2，对因因素A、CC，水平平改变对对实验结结果几乎乎无影响响，从经经济角度度考虑应应选A、CC。如果果条件允允许，应应探讨加加入-淀粉粉酶和酵酵母菌量量更低时时，实验验结果的的变化情情况，确确定出蕞蕞经济合合理的加加-淀粉粉酶和加加酵母量量。6.心得得体会：此次专业业实验对对我来说说是苦多多于甜，但但是学到到了很多很很多的的的东西，同同时不仅仅可以巩巩固了以以前所学学过的知知识，而而且学到到了很多多在书本本上所没没有学到到过的知知识。通通过这次次专业实实验使我我懂得了了理论与与实际相相结合是是很重要要的，只只有理论论知识是是
24、远远不不够的，只只有把所所学的理理论知识识与实践践相结合合起来，从从理论中中得出结结论，才才能真正正为社会会服务，从从而提高高自己的的实际动动手能力力和独立立思考的的能力。在实验的过程中我也明白了自己的不足，自己对仪器虽说都明白其工作原理，但是要做到熟练操作确实很困难，例如在摇床培养中，要保证培养足够的时间和摇床转速以确保菌种有最适的培养环境。 7.参考考文献（1） 马赞华.编著.酒精高高效清洁洁生产新新工艺.北京：化学工工业出版版社，220033.4（2） 工业发酵酵分析，天天津轻工工业学院院，大连连轻工业业学院等等编著。北北京：中中国轻工工业出版版社，220044.9（3） 周敬宜编编著。酒酒精生产产技术问问答。四四川：四四川科学学技术出出版社，220033.6（4） 薛刚，郭郭书贤主主编：优优化试验验设计及及统计分分析法：武汉：湖北人人民出版版社20004.9（5） 郭书贤，刘刘凤霞主主编：生生物化学学试验技技术;武武汉：湖湖北人民民出版社社20004.9922