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1、指导原则则编号【ZH】GPT3-1药物非临临床依赖赖性研究究技术指导导原则二七七年九月目录一、概述述11二、基本本原则22（一）实实验管理理22（二）具具体问题题具体分分析22（三）整整体性22（四）试试验设计计22三、基本本内容22（一）适适用范围围22（二）受受试物331、中药药、天然然药物32、化学学药物3（三）试试验系统统441、选择择试验系系统的依依据42、实验验动物443、离体体试验系系统4（四）给给药剂量量44（五）给给药途径径55（六）对对照组55（七）试试验要求求551、神经经药理学学试验52、躯体体依赖性性试验63、精神神依赖性性试验774、体外外依赖性性试验8（八）依依赖
2、性研研究项目目的选择择9（九）依依赖性研研究的阶阶段性9（十）结结果分析析与评价价99四、参考考文献110五、附录录11（一）躯躯体依赖赖性试验验111、小鼠鼠跳跃试试验（催催促戒断断试验）112、大鼠鼠体重减减轻试验验（自然然或催促促戒断试试验）113、大鼠鼠替代试试验（替替代试验验、交叉叉躯体依依赖性试试验）124、大鼠鼠攻击试试验（自自然或催催促戒断断试验）135、戒断断症状的的记分评评定（自自然或催催促戒断断试验）144（二）精精神依赖赖性试验验141、自身身给药试试验142、大鼠鼠药物辨辨别试验验 1163、条件件位置偏偏爱试验验 116- 17 -药物非临临床依赖赖性研究究技术指指
3、导原则则一、概述述药物依赖赖性是指指药物长长期与机机体相互互作用，使使机体在在生理机机能、生生化过程程和/或或形态学学发生特特异性、代偿性性和适应性改变的的特性，停停止用药药可导致致机体的的不适和和/或心心理上的的渴求。依依赖性可可分为躯躯体依赖赖性和精精神依赖赖性。躯躯体依赖赖性主要要是机体体对长期期使用依依赖性药药物所产产生的一一种适应应状态，包包括耐受受性和停停药后的的戒断症症状。精精神依赖赖性是药药物对中中枢神经经系统作作用所产产生的一一种特殊殊的精神神效应，表表现为对对药物的的强烈渴渴求和强强迫性觅觅药行为为。依赖赖性倾向向可以在在动物或或人体的的药物研研究过程程中反映映出来。躯体依
4、赖赖与精神神依赖可可能同时时存在，也也可能有有分离，如如兴奋剂剂通常表表现为精精神依赖赖，躯体体戒断症症状并不不明显。耐受性和和敏感性性（敏化化）是中中枢神经经系统适适应性改改变的两种不不同表现现形式。耐耐受性是是指反复复使用某某种药物物以后，机体对药物的敏感性降低，需增大剂量才能产生原有的效应。与耐受性相反，敏化是指在反复使用药物以后，机体对药物的敏感性提高，药物的效应增强。成瘾药物敏化现象表现为行为反应和自主性觅药动机增强。目前已知知可产生生依赖性性的化合合物主要要有阿片片类、可可卡因、苯苯丙胺类类、大麻麻类、苯苯二氮卓卓类和巴巴比妥类类及某些些甾体激激素类等等。本指导原原则的目目的，是是
5、为在药药物研发发过程中中进行动动物潜在在依赖性性研究时时提供技技术指导导。非临临床药物物依赖性性研究可可为临床床提供药药物依赖性倾倾向的信信息，获获得的非非临床试试验数据据有利于于指导临临床研究究和合理理用药，警示滥用用倾向。本技术指指导原则则适用于于中药、天天然药物物和化学学药等新新药的依依赖性研研究。二、基本本原则（一）实实验管理理依赖性研研究是药药物非临临床安全全性研究究的一部部分，根根据中中华人民民共和国国药品管管理法，必必须执行行“药物非非临床研研究质量量管理规规范”。（二）具具体问题题具体分分析中药、天天然药物物和化学学药等的的情况复复杂，本本文所提提及的内内容不可可能涵盖盖所有中
6、中药、天天然药物物和化学学药依赖赖性试验验的全部部内容，依依赖性研研究应遵遵循“具体问问题具体体分析”的原则则。（三）整整体性药物的研研发是一一个连续续的、渐渐进的系系统工程程，依赖赖性试验验是药物物开发的的一个有有机组成成部分。依依赖性研研究应结结合该受受试物的的药学、药药动学、药药效学、一一般药理理学及毒毒理学试试验结果果综合分分析与评评价。（四）试试验设计计试验设计计应符合合随机、对对照、盲盲法和可重复复性的原原则。三、基本本内容（一）适适用范围围1、与已已知具有有潜在依依赖性化化合物结结构相似似的新的的化合物物；2、作用用于中枢枢神经系系统，产产生明显显的镇痛痛、镇静静、催眠眠及兴奋奋
7、作用的的药物；3、复方方中含有有已知较较强依赖赖性成分分的药物物；4、直接接或间接接作用于于中枢阿阿片受体体、大麻麻受体、多巴胺受体、去甲肾上腺素受体、5-羟色胺受体、N-胆碱受体、-氨基丁酸受体、苯二氮卓受体等受体的药物；5、已知知代谢物物中有依依赖性成成份；6、拟用用于戒毒毒的药物物；7、原认认为不具具依赖性性，而在在临床研研究或临临床应用用中发现现有依赖赖性倾向向的药物物。（二）受受试物1、中药药、天然然药物依赖性试试验拟用用受试物物应能充充分代表表拟临床床试验受受试物或或拟上市市药品，因因此该受受试物应应采用制制备工艺艺稳定、符符合临床床试用质质量标准准规定的的样品，并并附有研研制单位
8、位的自检检报告。一一般采用用中试样样品，并并注明受受试物的的名称、来来源、批批号、含含量（或或规格）、保保存条件件及配制制方法等等。如不不采用中中试样品品，应有有充分的的理由。如如果由于于给药容容量或给给药方法法限制，可可采用原原料药进进行试验验。试验验中所用用溶媒和和/或辅辅料应标标明批号号、规格格及生产产厂家。2、化学学药物依赖性试试验的受受试物应应采用制制备工艺艺稳定、符符合临床床试用质质量标准准规定的的样品，并并注明受受试物的的名称、来来源、批批号、含含量（或或规格）、保保存条件件及配制制方法等等，并附附有研制制单位的的自检报报告。所所用辅料料、溶媒媒等应标标明批号号、规格格和生产产厂
9、家，并并符合试试验要求求。（三）试试验系统统1、选择择试验系系统的依依据为了获得得科学有有效的依依赖性信信息，应应选择最最适合的的动物模模型或其其他试验验系统。选选择试验验系统的的因素包包括试验验系统的的药效学学反应，如如敏感性性、特异异性和重重现性；受试物物的背景景资料，如如药效学学、药代代动力学学等特点；试验动动物的种种属、品品系、性性别和年年龄等。如如果选择择特殊的的试验系系统，应应说明原原因。2、实验验动物常用实验验动物包包括小鼠鼠、大鼠鼠、猴等等，一般情情况下选选用雄性性动物，必必要时增增加雌性性动物。通通常选用用大、小小鼠，对对于高度度怀疑具具有致依依赖性潜潜能的药药物，而而啮齿类
10、类动物试试验结果果为阴性性，则应应选择灵灵长类动动物。动动物应符符合国家家有关规规定的等等级要求求。3、离体体试验系系统离体试验验系统可可用于支支持性研研究（如如研究药药物的活活性特点点和作用用机理）。常常用离体体试验系系统主要要包括：离体器器官、组织、细细胞、亚亚细胞器器、受体体、离子子通道和和酶等。（四）给给药剂量量依赖性研研究应在在一个较较宽的剂剂量范围围内进行行，可根根据不同同的试验验方法和和目的选选择不同同的给药药剂量。一一般采用用主要药药效EDD50的倍倍数递增增或最小小有效剂剂量的倍倍数递增增，同时时结合药药物的溶溶解性、毒毒性及对对运动功功能、学学习能力力和记忆忆能力的的影响来
11、来设计剂量量。每个个试验至至少应设设三个剂剂量组。（五）给给药途径径原则上给给药途径径应和临临床一致致，尽可可能增加加静脉给给药途径径。由于于模型的的选择或或者考虑虑到以后后可能的的非临床床滥用的的不同给给药途径径，也可可考虑增增加其他他给药途途径。（六）对对照组应设立阳阳性对照照和溶媒媒对照组组，如受受试物需需采用特特殊的溶溶媒溶解解，还应应增设空空白对照照。如果果受试物物为较纯纯的单一一化合物物，与其母核结构构类似的的化合物物具有明明显的依依赖性，则则还应选选择此化化合物为为阳性对对照药。（七）试试验要求求药物依赖赖性研究究一般包包括神经经药理学学试验、躯躯体依赖赖性试验验和精神神依赖性性
12、试验三三部分内内容。1、神经经药理学学试验如有早期期的体外外依赖性性试验，所所获阳性性试验结结果还应应通过体体内研究究来进一一步确认认（除11.1的情况况外）。可可利用神神经药理理学方法法，对行为学效效应和神神经递质质进行测定定，初步步判断受受试物有有无依赖赖性倾向向，这些些内容可可通过药药效学试试验、一一般药理理学试验验或毒理理学试验验进行观观察，具具体方法法不再列列出。11一一般情况况下，充充分揭示示药物的的药理特特性之后后，还需需要进行行进一步步潜在躯躯体依赖赖性和精精神依赖赖性的研研究。同同时出现现下述三三种情况况除外：（1）在在有效浓浓度范围围内，药药物与依依赖性相相关的分分子靶点点
13、无相互互作用，或或者虽然然观察到到药物与与相关靶靶点的结结合，但但这种结结合不会会引起相相应的功功能变化化。（2）体体内研究究结果未未显示出出潜在依依赖性。（3）未未发现此此药物具具有可能能与依赖赖有关的的新的作作用机制制。12当当潜在依依赖性的的类别和和程度已已经从体体外试验验中充分分暴露出出来（例例如一个个完全受体激激动剂），就就不需再再进行进进一步的的研究。13如如果发现现此药物物有可能能与依赖赖有关的的新的作作用机制制，则需需要作进进一步的的研究。2、躯体体依赖性性试验各种有依依赖潜力力的药物物产生躯躯体依赖赖症状不不同，没没有理想想的反映映躯体依依赖性的的单一指指标，所所以需要要多种
14、指指标来综综合评价价。生理理指标可可采用体体重、体体温、呼呼吸、摄摄食量等等；在行行为学试试验中，可可采用反反映运动动功能、学学习能力力、记忆忆能力和和动机行行为改变变的指标标。指标标选择的的标准为为：适宜宜在给药药前、给给药期间间和给药药后进行行动态观观察，从从而有利利于描述述机体产产生的耐耐受及敏敏化的程程度、特特征及发发展过程程。21方方法评价药物物躯体依依赖性的的一般试验验方法有有三种：自然戒戒断试验验、催促促戒断试试验、替替代试验验。无论论是自然然戒断还还是催促促戒断，动动物都会会出现一一系列程程度不同同的表现现，但不是是所有戒戒断症状状在一个个受试动动物身上上都能出出现。由由于每种
15、种方法观观察的指指标都不不相同，可可结合药药效学、一一般药理理学表现现选择适适当的方方法。结结合我国国的具体体情况，可可以采用用：小鼠自然然戒断试试验小鼠催促促戒断试试验大鼠自然然戒断试试验大鼠催促促戒断试试验大鼠替代代试验小鼠替代代试验猴自然戒戒断试验验猴催促戒戒断试验验也可采用用其他的的方法，但但需加以以说明。22戒戒断反应应观察主主要注意意事项a.给药药剂量、频频率和周周期应该该使动物物产生神神经适应应性反应应。b.戒断断反应的的观察应应该有足足够时间间和频度度，并且且注意给给药前后后的自身身比较。c自然然戒断和和催促戒戒断两种种方式都都需进行行，但可可在不同同动物模模型上进进行。d.尽
16、可可能采用用仪器检检测的客客观指标标。e.有依依赖性的的药物在在戒断后后往往表表现出反反跳现象象（急性性药理学学作用相相反的症症状），在选选择观察察指标时时加以注注意。3、精神神依赖性性试验具有精神神依赖性性的药物物能促使使用药者者周期性性或连续续性地出现现感受欣欣快效应应的用药药渴求，但但这是一种主观观体验，只只能间接接用药物物所导致致的动物物行为改改变来反映。常常选用的的方法有有：自身身给药试试验、药药物辨别别试验、条条件性位位置偏爱爱试验、行行为敏化化试验。31方方法猴自身给给药试验验大鼠自身身给药试试验大鼠条件件性位置置偏爱试试验小鼠条件件性位置置偏爱试试验大鼠药物物辨别试试验小鼠行为
17、为敏化试试验大鼠行为为敏化试试验也可采用用其他的的方法，但但需加以以说明。32精精神依赖赖性研究究主要注注意事项项：c.在自自身给药药试验中中需要注注意药物物毒副作作用相关关的无应应答期（动动物表现现出觅药药行为之之前的一一段时间间）、增增加剂量量的时间间点和替替代的程程序。d.自身身给药试试验中，尽尽可能结结合躯体体依赖性性试验结结果，设设计合适适的剂量量，并至至少变换换三次剂剂量。e.在条条件性位位置偏爱爱实验中中应使用用平衡的的实验设设计，避避免动物物天然倾倾向性影影响。4、体外外依赖性性试验（八）依依赖性研研究项目目的选择择为了获得得足够的的药物依依赖性信信息，药药物依赖赖性研究究内容
18、的的选择需需要参考考药效学学、一般般药理学学及其他他毒理学学试验结结果，同同时至少少应进行行躯体依依赖性试试验（自自然戒断断和催促促戒断）和一项精神依赖性试验。有强烈精神活性并拟用于改变精神神经活动的药物，应有灵长类动物试验数据。（九）依依赖性研研究的阶阶段性1、对于于可能存存在依赖赖性的单单一化合合物：体内神经经药理学学研究应应该在期临床床试验前前完成。在在早期非非临床或或临床研研究中观观察到的的安全性性信息可可以为进进一步非非临床依依赖性研研究提供供参考。更更进一步步的躯体体依赖性性和精神神依赖性性试验观观察应在在期临床床试验开开始前完完成。必必要时需需进行体体外试验验和依赖赖性的机机理探
19、讨讨。2、对于于中药有有效部位位或中药药复方制制剂：中药有效效部位或或中药复复方制剂剂成份复复杂，作作用靶点点多，体体外试验验结果参参考意义义有限。体体内神经经药理学学研究结结果对于于判断是是否具有有依赖性性有一定定的意义义，但其其结果的的评价往往往有较较大的难难度和局局限。体体内依赖赖性试验验应作为为中药有有效部位位或中药药复方制制剂依赖赖性考察察的主要要方法。对于需进进行药物物依赖性性研究的的中药有有效部位位或中药药复方制制剂，应应在期临床床开始前前提供全全面的体体内依赖赖性试验验的相关关数据。（十）结结果分析析与评价价在对所得得到的非非临床试试验数据据进行分分析与评评价时，一一般应从从以
20、下几几方面进进行考虑虑：1、统计计学差异异与生物物学差异异的问题题。统计计学差异异可判断断受试物物对考察察的试验验结果是是否存在在影响，但但由于样样本数的的限制，有有时可能能掩盖真真正的生生物学差差异，故故样本数数应足够够充分，同同时，还还应注意意对每个个样本试试验结果果进行分分析。对对于统计计学上的的差异，还还应结合合动物的的正常反反应加以以分析。2、阳性性药的选选择。尽尽可能选选择结构构相似和和/或作作用机理理相似的的合适阳阳性药。3、对动动物异常常行为出出现的时时间、持持续时间间及作用用强度的的观察。4、所选选择的动动物是否否合适，模模型是否否可靠。5、分析析所选择择指标的的灵敏性性、特
21、异异性和可可靠性。6、对具具体试验验结果进进行评估估及整体体评估。7、比较较产生依依赖性的的剂量与与有效剂剂量、中中毒剂量量的关系系。8、分析析是否存存在耐受受性，及及耐受与与依赖的的关系。9、根据据药物拟拟定的适适应症、有有效性，综综合分析析继续进行行临床研研究的可可行性。总之，在在对药物物潜在依依赖性风风险评估估中，应应充分利利用所有有的非临临床研究究数据，并并结合药药学、药药理学和和临床研研究信息息，进行行科学客客观的分分析和综综合评价价，以判判断是否否具有潜潜在依赖赖性。四、参考考文献药物依赖赖性试验验，新药药（西药药）临床床前研究究指导原原则汇编编（药学学、药理理学、毒毒理学）。中中
22、华人民民共和国国卫生部部药政局局，19993:2199-2221药物依赖赖性试验验，徐叔叔云主编编，药理理实验方方法学，第第三版，人人民卫生生出版社社。北京京，20002：2511-2558GuiddeliineoonthheNoon-CClinnicaalInnvesstiggatiionoofDeepenndenncePPoteentiialoofMeediccinaalPrroduuctss.EMMEA,20006五、附录录（一）躯躯体依赖赖性试验验1、小鼠鼠跳跃试试验（催催促戒断断试验）(1)原原理：短短期内重重复大剂剂量给药药，然后后注射阿阿片受体体拮抗剂剂，如受受试物属属于阿片片类
23、药物物，则动动物发生生跳跃反反应，跳跳跃次数数可反应应依赖性性程度。(2)动动物：健健康小鼠鼠。(3)实实验步骤骤：药物物剂量常常按递增增法，有有时也配配合采用用恒量法法，给药药总量可可按镇痛痛ED550的倍倍数计算算。连续续给药数数天（根根据药物物镇痛作作用的强强弱确定定给药时时间），末末次药后后2h（以以吗啡为为例）腹腹腔注射射纳络酮酮，观察察30mmin内内的跳跃跃动物数数及跳跃跃次数，还还可观察察1h内内的小鼠鼠体重减减轻程度度。2、大鼠鼠体重减减轻试验验（自然然或催促促戒断试试验）(1)原原理：阿阿片类药药物的戒戒断症状状出现后后，大鼠鼠体重减减轻，但但非阿片片类镇痛痛药和镇镇静催眠
24、眠药则无无明显作作用。阿阿片类戒戒断后大大鼠体重重急剧下下降，以以戒断后后24-48hh最明显显，是考考察阿片片类身体体依赖性性的较好好指标。(2)动动物：健健康大鼠鼠。(3)实实验步骤骤：自然然戒断试试验每天天早、晚晚相同时时间测定定大鼠体体重，每每次测重重后按体体重给药药，每天天2次，连连续给药药数周。剂剂量根据据LD550和EED500及给药药途径制制定。末末次给药药后每隔隔一定时时间测量量体重11次，比比较停药药后不同同时间的的体重变变化。（按按体重给给药，每每天2-3次，连连续给药药4周。剂剂量根据据LD550和EED500及给药药途径制制定。原原则低剂剂量应高高于药效效学有效效剂量
25、，高高剂量应应尽可能能高，但但不能出出现毒性性反应。末末次药后后每天测测量体重重2-33次（与与给药次次数相同同），计计算平均均值，比比较停药药前后不不同时间间的体重重变化。催催促戒断断试验以以剂量递递增法给给药，连连续给药药1周，末末次药后后2h注注射拮抗抗剂，在在2h内内每隔330miin测量量体重11次，比比较体重重下降百百分率。也也可同时时观察大大鼠给药药后行为为变化和和体温及及自发活活动的变变化情况况，并以以第1次次给药至至反复给给药1周周内为重重要。(4)结结果评价价：如戒戒断后大大鼠体重重急剧下下降，则则反应受受试药具具有身体体依赖性性。3、大鼠鼠替代试试验（替替代试验验、交叉叉
26、躯体依赖赖性试验验）(1)原原理：阿阿片类药药物都有有基本相相同的药药理作用用，给动动物阿片片类药物物并使之之产生身身体依赖赖性后停停药，代代之以受受试药，观观察动物物是否发发生戒断断症状。(2)动动物：健健康大鼠鼠。(3)实实验步骤骤：掺食食法连续续给以吗吗啡使动动物产生生身体依依赖性，55天后以以生理盐盐水、吗吗啡或不不同剂量量受试药药代替，每每8h给给药1次次，连续续6次。替替代前（基基础值）及及替代后后每隔44h测定定体重11次，计计算各组组大鼠的的体重变变化，比比较替代代药物组组和吗啡啡依赖组组之间的的差异。(4)结结果评价价：按等等效镇痛痛ED550的倍倍数计，比比较达到到同样替替
27、代程度度的受试试药的剂剂量和吗吗啡的剂剂量，可可以确定定受试药药物的身身体依赖赖性潜力力的强弱弱程度。对对体内代代谢迅速速、皮下下给药不不易形成成依赖性性的药物物，用掺掺食法诱诱发依赖赖性可以以获得较较明确的的结果。4、大鼠鼠攻击试试验（自自然或催催促戒断断试验）(1)原原理：大大鼠对阿阿片类药药物形成成依赖性性后停药药或用拮拮抗剂催催促，可可发生戒戒断症状状，易与与同笼大大鼠发生生相互攻攻击（一一般停药药后722h最明明显，224h时时极不明明显；具具有间断断性的特特点，可可连续几几小时甚甚至几天天）。(2)动动物：健健康大鼠鼠。（3)实实验步骤骤：按递递增剂量量给药，连连续数天天，如有有依
28、赖性性，则停停药后大大鼠出现现体重减减轻、摇摇体、眼眼睑下垂垂及扭体体等戒断断症状；此时如如将大鼠鼠同居一一笼，则则出现嘶嘶叫、对对阵和相相互攻击击现象，甚甚至受伤伤致死。一一般于停停药后第第3天进进行试验验（将动动物同居居一笼），观观察1hh，记录录对阵时时程和嘶嘶叫，以以及攻击击和互咬咬次数。(4)结结果评价价：本试试验可反反应吗啡啡成瘾后后脑内多多巴胺能能神经系系统的功功能。停停药后戒戒断症状状是多巴巴胺功能能亢进的的表现，多多巴胺受受体激动动剂可增增强攻击击反应。所所以注意意排除药药物对多多巴胺功功能的干干扰所产产生的假假阳性或或假阴性性。5、戒断断症状的的记分评评定（自自然或催催促戒
29、断断试验）(1)原原理：动动物长期期获得阿阿片类药药物后，其其中枢神神经系统统能产生生一种适适应状态态，停药药或注射射拮抗剂剂后机体体出现一一系列生生理干扰扰现象即即戒断症症状。对对这些戒戒断症状状的轻重重程度进进行综合合评分即即可判断断药物的的身体依依赖性潜潜力。(2)动动物：常常用大鼠鼠和猴。其其中阿片片类药物物在猴上上的依赖赖性表现现与人较较接近，戒戒断症状状比较明明显且易易于观察察。(3)实实验步骤骤：按剂剂量递增增法并配配合恒量量法给药药，也可可用拮抗抗剂纳络络酮催促促戒断。自自然戒断断或催促促戒断后后观察一一系列戒戒断症状状，根据据戒断症症状的严严重程度度和持续续时间进进行综合合评
30、分。(4)结结果评价价：戒断症状状的综合合评分目目前尚无无统一标标准，可可对戒断断症状进进行全面面综合评评分，也也可对其其中主要要戒断症症状进行行综合评评分。猴猴戒断症症状可分分为轻、中中、重、极极重4个个等级，每每一等级级的评分分可根据据症状种种类的多多少和出出现的频频率定分分，但不不能大于于级差分分值。依赖性潜潜力的大大小可依依据等效效依赖性性剂量来来判断，即即产生近近似依赖赖状态的的剂量来来判定，也也可按相相同的等等效镇痛痛ED550的倍倍数剂量量来比较较。本方法同同时也可可进行替替代试验验。可在在自然或或催促戒戒断试验验中观察察。附录（二二）精神神依赖性性试验1、自身身给药试试验(1)
31、原原理：药药物的精精神依赖赖性可产产生对该该药的渴渴求，对对觅药行行为和用用药行为为具有强强化效应应。本试试验模拟拟人的行行为，通通过压杆杆方式来来获得药药物，反反映药物物的强化化效应，可可信度较较高且可可进行定定量比较较。(2)动动物：常常用大鼠鼠和猴。(3)实实验步骤骤：动物麻醉醉后无菌菌条件下下行静脉脉插管并并用马甲甲背心固固定，连连接弹簧簧保护套套及转轴轴，弹簧簧套内硅硅胶管与与插管相相连，转转轴使动动物在笼笼内能自自由活动动，转轴轴另一端端与恒速速注射泵泵及储药药系统相相连。术术后常规规抗感染染，恢复复4-77天后进进行踏板板训练，使使动物形形成稳定定的自身身给药行行为。试试验过程程
32、中注意意保持套套管畅通通。如药药物具有有强化效效应，动动物经过过短期训训练后产产生稳定定的自身身给药行行为，能能自动踩踩压踏板板接通注注药装置置将药物物注入体体内。(4)结结果评价价：通过观察察是否形形成自身身给药行行为来判判断药物物是否具具有强化化效应；由于动动物个体体差异较较大，建建议将每每只动物物自身给给药前后后踏板次次数变化化的百分分率进行行组间统统计。本试验中中也可同同时进行行替代试试验。通过更换换受试药药的剂量量，比较较它们在在等效EED500倍数剂剂量条件件下的踏踏板次数数或比较较产生类类似踏板板模式的的药物剂剂量，即即可反映映受试药药的精神神依赖性性的强度度。本试验设设计适用用
33、于静脉脉给药，实实验中应应注意药药物稳定定性和配配药时间间的关系系。如受受试药为为口服给给药，则则不需进进行手术术，而仅仅将每次次踏板的的反应变变为给一一次口服服制剂即即可。2、大鼠鼠药物辨辨别试验验(1)原原理：依依赖性药药物使人人产生的的情绪效效应如欣欣快、满满足感等等，属于于主观性性效应。具具有主观观性效应应的药物物可以控控制动物物的行为为反应，使使之产生生辨别行行为效应应。本试试验可准准确判断断受试药药是否属属于阿片片类药物物，以及及产生精精神依赖赖性潜力力大小。(2)动动物：常常用大鼠鼠。(3)实实验步骤骤：利用辨别别试验箱箱和训练练程序训训练动物物正确压压杆，然然后通过过辨别训训练
34、训练练动物产产生稳定定准确地地辨别吗吗啡和生生理盐水水的能力力。最后后进行替替代试验验，以不不同剂量量吗啡和和受试药药进行替替代，观观察压杆杆正确率率与剂量量之间的的关系，做做出剂量量-效应应曲线，求求得药物物辨别刺刺激的半半数有效效剂量（EED500，值越越小精神神依赖性性潜力越越大）。(4)结结果评价价：药物辨别别刺激EED500值越小小反映精精神依赖赖性潜力力越大；如替代代药物不不产生训训练药物物反应，则则说明该该药不属属于吗啡啡类药物物。本试试验不适适用于阿阿片类拮拮抗剂。由由于药物物辨别刺刺激并非非完全基基于药物物滥用产产生，因因此在评评价药物物精神依依赖性潜潜力方面面不如自自身给药
35、药试验可可信，但但在药物物主观效效应强度度的定量量比较方方面有其其优越性性。由于于动物训训练周期期较长（一一般3-4个月月），试试验中要要注意耐耐受性的的产生。3、条件件位置偏偏爱试验验(1)原原理：根根据巴甫甫洛夫的的条件反反射学说说，如果果把奖赏赏刺激与与某个特特定的非非奖赏性性条件刺刺激如某某特定环环境反复复练习之之后，后后者便可可获得奖奖赏特性性。反复复几次将将动物给给药后放放在一个个特定的的环境中中，如药药物具有有奖赏效效应，则则特定环环境就会会具有了了奖赏效效应的特特性，动动物在不不给药的的情况下下依然有有对此特特定环境境的偏爱爱。(2)动动物：常常用雄性性大鼠或或小鼠。(3)实实
36、验步骤骤：试验装置置为黑、白白两个互互通的盒盒子，中中间有可可活动的的隔板隔隔开。动动物每天天上午、下下午（或或隔天）分分别给受受试药和和生理盐盐水各一一次，给给生理盐盐水后将将动物放放入一侧侧盒子，给给药后动动物放入入另一侧侧盒子，每每次在盒盒中停留留30-40mmin，连连续训练练5天。第第6天在在固定时时间不给给药的情情况下将将动物放放在黑、白白盒之间间的活动动台上，同同时用隔隔板将黑黑、白盒盒半隔开开。以动动物爬到到盒底的的瞬间开开始计时时，记录录15mmin内内动物分分别在两两盒内停停留的时时间。(4)结结果评价价：如果动物物在一侧侧盒子内内停留时时间显著著延长，则则表明其其对伴药药盒产生生位置偏偏爱，该该受试药药具有偏偏爱效应应。以吗吗啡为阳阳性对照照药，比比较它们们在等效效ED550倍数数剂量条条件下的的偏爱效效应，或或比较产产生相似似位置偏偏爱效应应的药物物剂量，即即可反映映该受试试药的精精神依赖赖性潜力力的强度度。本试验的的准确性性取决于于训练次次数和每每天训练练的时间间。训练练次数越越多，条条件联系系越牢固固；时间间过短则则条件联联系不牢牢固，时时间过长长则离散散度增大大。