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1、分子生物物学习题集刘小烛编编20088-100-299第一部分分 必做做题第一章1、用同同位素标标记氨基基酸和核核苷酸，噬噬菌体侵侵染细菌菌的实验验结论是是什么？说明了了什么？2、写出出DNAA和RNNA的英英文全称称及中文文全称。 3、试述述“有其父父必有其其子”的生物物学本质质。4、写出出早期证证实DNNA是遗遗传物质质的实验验的主要要步骤。5、定义义DNAA重组技技术和基基因工程程技术。6、叙述述分子生生物学的的主要研研究内容容。第二章1、真核核生物染染色体的的组成。2、DNNA的1、2和高级级结构。3、DNNA的复复制方式式。4、原核核生物DDNA的的复制特特点。5、简述述细胞通通过什
2、么么修复系系统对DDNA损损伤进行行修复。6、所学学的转座座子及其其种类。第三章1、什么么是编码码链，什什么是模模板链？2、简述述转录的的概念及及基本过过程。3、大肠肠杆菌RRNA聚聚合酶有有那些组组成成分分。4、叙述述封闭、开开放及三三元复合合物。5、简述述因子的的作用。6、Prribnnow boxx及保守守序列。上上升突变变，下降降突变。7、原核核生物和和真核生生物mRRNA的的区别。第四章 1、tRRNA在在组织和和机构上上有哪些些特点？2、核糖糖体有哪哪些活性性中心？3、链霉霉素为什什么能抑抑制蛋白白质的合合成？4、什么么是信号号肽？它它在序列列组成上上有哪些些特点？有什么么功能？5
3、、蛋白白质有哪哪些翻译译后的加加工修饰饰？第五章1、PCCR的意意思、原原理和步步骤。2、已知知一个ccDNAA的3的部分分序列，请请设计实实验流程程得到该该基因的的全长ccDNAA。3、叙述述Souutheern bloottiing的的基本步步骤。4、提取取真核生生物总RRNA的的检测标标准。5、简述述碱变性性法提取取质粒DDNA的的原理及及方法。6、简述述凝胶电电泳分离离DNAA的要点点。第六章1、简述述乳糖操操纵子的的调控模模型。2、画出出色氨酸酸操纵子子模型并并清楚调调控机理理。第七章1、说明明外显子子、内含含子在一一个基因因中结构构特征。2、增强强子是什什么？阐阐述其作作用机制制。
4、3、叙述述顺式作作用元件件。4、叙述述反式作作用因子子。第八章1、简述述人类基基因组计计划的意意义。2、叙述述大肠杆杆菌基因因组和真真核生物物基因组组的区别别。3、什么么是蛋白白质组学学？参考题 综合习习题及答答案习题一一、填空空题：1. 一一个完整整的体外外DNAA重组技技术主要要包括（获获取目的的基因）、（将将目的基基因进行行必要的的改造）、（选选择和修修饰克隆隆载体）（将将目的基基因与载载体连接接获得含含有目的的基因的的重组载载体）（重重组载体体导入宿宿主细胞胞）和（筛筛选出含含重组DDNA的的细胞）六六个步骤骤。2.基因因工程技技术的目目的是（获获得足够够的DNNA片段段以分析析基因的
5、的结构）、（将将获得的的基因用用于发展展农业、林林业、畜畜牧业和和医学）；基因工工程技术术的意义义是（改改造生命命）、（创创造新生生命）。3. 限限制性核核酸内切切酶的作作用特点点是（识识别位点点的DNNA序列列呈二重重旋转对对称（即即具有迥迥文结构构）、（切切割DNNA均产产生含55-磷酸酸和3-羟基基的末端端）、（错错位切割割产生具具有5-或3-突出出的粘性性末端；而沿对对称轴切切割双链链DNAA产生平平头末端端，也称称钝性末末端）、（少少数不同同的限制制酶可识识别和切切割相同同的位点点）。4. ppBR3322质质粒载体体的优点点是（分分子量较较小，其其长度为为43663bpp因而易易于
6、纯化化和防止止纯化过过程中链链的断裂裂）和（具具有两种种抗生素素抗性基基因可作作为转化化子的筛筛选标志志）。5. 噬菌体体基因组组的特点点是（功功能相关关的基因因排列在在一起）和和（噬菌菌体的成成熟需要要经过包包装）。6. 构构建cDDNA文文库的主主要步骤骤是（总总RNAA提取及及mRNNA制备备）、（ccDNAA文库第第一链的的合成）（ccDNAA文库第第二链的的合成）、（ccDNAA片断与与载体连连接）（噬噬菌体的的包装及及转染）（ccDNAA文库的的扩增和和保存）。7.DNNA切除除修复需需要的酶酶有（核核酸内切切酶）（DDNA聚聚合酶II）（DDNA连连接酶）8.大肠肠杆菌乳乳糖操纵
7、纵子调节节基因编编码的蛋蛋白质是是个（阻阻碍蛋白白），它它与（操操作基因因）结合合。阻止止（结构构基因转转录），当当有（乳乳糖）存存在时，（诱诱导物与与阻遏蛋蛋白的合合位与结结合）使使之变构构失去活活性，从从而使（结结构基因因）得以以转录。9.一个个转录单单位一般般应包括括（RNNA聚合合酶结合合）序列列，（DDNA模模板）序序列和（转转录终止止区的特特定DNNA）序序列。前前者也叫叫（启动动子），后后者叫（终终止位点点）。10.原原核细胞胞中各种种RNAA是催化化（一种种酶催化化3种RRNA）生生成的，而而真核细细胞基因因的转录录分别由由（3）种种RNAA聚合酶酶催化，其其中rRRNA基基因
8、由（RRNA聚聚合酶II）转录录，hnnRNAA基因由由（RNNA聚合合酶III）转录录，各类类小分子子量RNNA则是是（RNNA的转转录加工工）的产产物。、二、判断断题1、生物物越高度度，基因因组越庞庞大，基基因数目目就越多多。（ ）2、真核核生物结结构基因因都是单单拷贝，rrRNAA基因为为多拷贝贝。（ ）3、同基基因是一一类结构构上完全全相同，表表达产物物功能也也相同的的一组基基因。（ ）4、真核核细胞基基因转录录产物为为单顺反反子。（ ）5、原核核细胞基基因转录录产物为为多顺反反子。（ ）6、真核核生物基基因组中中不编码码的区域域多于编编码的区区域。（ ）7、卫星星DNAA实际上上是出
9、现现在非编编码区的的串联重重复序列列。（ ）8、串联联重复序序列是形形成卫星星DNAA 的基基础。（ ）9、所有有真核生生物基因因组中都都有卫星DDNA。（ ）10、高高度重复复序列在在真核生生物细胞胞基因组组中重复复出现可可达1006次以以上。（ ）11、中中度重复复序列的的长度和和拷贝数数很不均均一。（ ）12、短短分散片片段重复复顺序的的平均长长度约为为35000-550000bp。（ ）13、长长分散片片段重复复顺序的的平均长长度约为为3000bp。（ ）14、中中度重复复序列大大多不编编码蛋白白质。（ ）15、高高度重复复序列中中有一些些可编码码蛋白质质。（ ）16、中中度重复复顺序
10、一一般具有有种特异异性。（ ）17、每每种组蛋蛋白的基基因在同同一种生生物中拷拷贝数是是相同的的。（ ）18、不不同生物物中组蛋蛋白基因因在基因因组中的的排列不不一样。（ ）19、端端粒是所所有生物物染色体体末端的的一种特特殊结构构。（ ）20、以以RNAA为模版版合成出出的DNNA链叫叫负股链链。（ ）21、颠颠换是指指原为嘧嘧啶突变变后变为为嘌呤。（ ）22、置置换是指指原为嘧嘧啶突变变后变为为嘌呤。（ ）23、重重组修复复也叫复复制后的的修复。（ ）24、原原核细胞胞和真核核细胞中中许多mmRNAA都是多多顺反子子转录产产物。（ ）25、限限制性内内切酶切切割的DDNA片片段都具具有粘性
11、性末端。（ ）26、原原核生物物中mRRNA一一般不需需要转录录后加工工。（ ）27、增增强子并并没有启启动子活活性，却却具有增增强启动动子活性性转录起起始的效效能。（ ）28、在在双向复复制中一一条链按按53的方向向合成，另另一条链链按35的方向向合成。（ ）29、原原核细胞胞和真核核细胞复复制在多多个位点点同时起起始进行行。（ ）30、真真核细胞胞的基因因是不连连续的，转转录出来来的所有有RNAA都必须须经过加加工。（ ）31、生生物DNNA分子子的大小小等于基基因的总总和。（ ）32、所所有多肽肽链经核核糖体翻翻译出来来即有正正常生理理功能。（ ）33、核核糖体是是蛋白质质和rRRNA构
12、构成的功功能复合合体。（ ）34、机机体的各各种细胞胞中含有有相同的的遗传信信息，所所以有相相同的表表达，（ ）35、在在负控诱诱导系统统中，阻阻遏蛋白白不与效效应物结结合时，结结构基因因不转录录。（ ）36、在在负控阻阻遏系统统中，阻阻遏蛋白白不与效效应物结结合时，结结构基因因不转录录。（ ）37、CCAP结结合在启启动子上上时，能能促进RRNA聚聚合酶与与启动子子结合，促促进转录录。（ ）38、CCAP首首先与ccAMPP形成复复合物才才能与启启动子结结合。（ ）39、RRBS是是指mRRNA起起始密码码AUGG前的一一段非翻翻译区。（ ）40、反反义RNNA由反反义基因因转录而而来。（
13、）41、转转录后基基因沉默默被称为为RNAAi。（ ）42、细细胞中蛋蛋白质合合成旺盛盛时，mmRNAA链上核核糖体数数量就多多，pooly（AA）也较较长。（ ）43、限限制性核核酸内切切酶是原原核生物物所特有有的酶。（ ）44、只只有型限制制性核酸酸内切酶酶在分子子生物学学中被应应用。（ ）45、CCOS区区是指噬菌体体粘性末末端构成成的区域域。（ ）53、基基因扩增增是指某某些基因因的拷贝贝数大量量增加的的现象。（ ）54、基基因重排排是DNNA水平平调控的的重要方方式之一一。（ ）55、所所有核酸酸的合成成都是以以碱基配配对为基基础的。（ ）56、甲甲基化程程度与基基因的表表达一般般呈
14、反比比关系。（ ）57、基基因的甲甲基化程程度愈高高，其表表达则降降低。（ ）58、去去除组蛋蛋白基因因转录活活性降低低。（ ）59、常常染色质质:结构构松散，基基因不表表达。（ ）60、异异染色质质:结构构紧密，基基因表达达。（ ）61、有有基因表表达活性性的染色色质DNNA对DDNasse更敏感感。（ ）62、真真核生物物基因调调控主要要也是在在转录水水平上进进行的。（ ）三、选择择题：1. 原原核生物物基因组组中的复复制起始始点有（ A ）A1个个 BB2个个 C多个 DD10000个个以上2真核核生物基基因组中中的复制制起始点点有（ D ）A1个个 BB2个个 C多个 DD10000个
15、个以上3. 真真核生物物基因之之间的间间隔区与与基因组组大小（ C ） A有有关 B无无关 C成正比比 E成反比比.卫星星DNAA的长度度一般为为 ( A ) AA5-10bbp B3300bbp C1100bbp D5500-10000bpp. 在在大肠杆杆菌细胞胞中DNNA复制制的保真真性主要要是下列列哪个酶酶的作用用（ CC ）ADNNA聚合合酶 BDNAA聚合酶酶 CDNAA聚合酶酶 DDNAA连接酶酶. 既既有内切切酶活力力，又有有连接酶酶活力的的是( A )A拓扑扑异构酶酶 BBDNNA聚合合酶 C解螺旋旋酶 DDDNNA连接接酶7. 转转录过程程中遗传传信息的的转递方方向是( A
16、 )ADNNARNAA BBRNNADNAA CDNAADNAA DDRNNARNAA8. hhnRNNA是( B )A存在在于细胞胞核内的的tRNNA前体体 B. 存在在于细胞胞核内的的mRNNA前体体C. 存存在于细细胞核内内的rRRNA前前体 DD.存在在于细胞胞核内的的snRRNA前前体9. 以以RNAA为模板板合成DDNA的的酶是（ D ）ADNNA聚合合酶 BBDNNA聚合合酶 CRRNA聚聚合酶 D反转录录酶10. 蛋白质质的生物物合成中中肽链延延伸方向向是（ B ）A5，3， B从N端到C端 C3，5， D从C端到N端11. 蛋白质质翻译后后的加工工主要包包括（ D ）。A氨基
17、基酸侧链链修饰 BB水解解修饰C二硫硫键的形形成D 上述各各种修饰饰都包括括12. 操纵子子调控系系统属于于哪一种种水平的的调控（ B ）A复制制水平的的调节 B.转转录水平平的调节节 C翻译水水平的调调节 D。转转录后加加工的调调控13. 与乳糖糖操纵子子操纵基基因结合合的物质质是（ C ）ARNNA聚合合酶 BBDNNA聚合合酶 C阻遏蛋蛋白 DD诱导导物14、参参与线粒粒体DNNA复制制的酶是是（ DD ） AApool Bpoll Cpoll Dppol15、参参与领头头链DNNA复制制的酶是是（ BB ） AApool Bpoll Cpoll Dppol16、端端粒酶是是一种 ( C
18、C )A逆转转录酶 BRNAA聚合酶酶 CDDNA聚聚合酶 DDDNA酶酶17. 含稀有有碱基最最多的RRNA是是（ DD ）AmRRNA B、rrRNAA CC5SS-rRRNA DDtRRNA18. 大肠杆杆菌DNNA连接接酶需要要下列哪哪一种辅辅助因子子？（ C ）AFAAD作为为电子受受体BNNADPP+作为为磷酸供供体CNAAD+形形成活性性腺苷酰酰酶 DNADD+作为为电子受受体19. 真核生生物RNNA聚合合酶I催催化转录录的产物物是（ B ）AmRRNA B45SS-rRRNA C5S-rRNNA DDtRRNA20. 魔斑是是指（ A ）ApppGppp BccAMPP Cc
19、GMMP DD7mmGpppp21. CAPP复合体体与操纵纵子结合合的部位位是（ A ）A启动动子 B操纵基基因 CC结构构基因 DD调节节基因22. 基因的的甲基化化修饰一一般发生生在（ A ）ACppGBAApG CGGpT DTTpG23.有有基因表表达活性性的染色色质DNNA对下下列那个个酶敏感感性增加加？（ A ）ADNNasee BBDNNA ppol CDDNA pollD. Rnaase H24. 真核生生物的RRNA聚聚合酶识识别的是是（ AA ）A启动动子 B增增强子 CTF-DNAA复合体体 DRRF25. 在分子子生物学学中被应应用的限限制性核核酸内切切酶是（ B ）
20、A型型 BB型 C型 D以上都都没用26. 限制性性核酸内内切酶错错位切割割产生（ A ）A粘性性末端B平平头末端端 C33-磷酸酸D5-羟基基27.大大肠杆菌菌DNAA连接酶酶只能连连接（ A ）A粘性性末端B平平头末端端 C33-磷酸酸D5-羟基基28. pBRR3222是（ A ）A复制制型载体体B表表达型载载体 CC穿梭梭载体 D噬菌体体载体29、ppUC载载体是（ B ）A复制制型载体体B表表达型载载体 CC穿梭梭载体 D噬菌体体载体30. M133噬菌体体是（ A ）A单链链DNAA噬菌体体 B双双链DNNA噬菌菌体 CRNAA噬菌体体 DD都不不是四、名词词解释1高度度重复基基因
21、：高度重重复序列列在真核核生物细细胞基因因组中重重复出现现可达1106次以上上的DNNA序列列，称为为高度重重复序列列基因或或高度重重复序列列DNAA。这类类序列复复性速度度很快，在在人类基基因组占占20%。2断裂裂基因：一个基基因的核核苷酸序序列中因因插入了了与编码码氨基酸酸无关的的核苷酸酸序列，使使一个完完整的基基因分隔隔成不连连续的若若干区段段，称之之为断裂裂基因。3基因因组的概概念：细细胞或生生物体的的整套(单倍体体)遗传传物质，称称为基因因组。基基因组的的大小用用全部DDNA的的碱基对对总数表表示。4基因因：核酸酸分子中中遗传信信息的基基本单位位，是指指RNAA序列信信息及表表达这些
22、些信息所所必需的的全部核核苷酸序序列。5微卫卫星DNNA：重重复单位位序列最最短，只只有26bpp，串联联成簇，长长度5001000bpp，又称称为短串串联重复复序列。10卫卫星DNNA ：卫星DDNA实实际上是是出现在在非编码码区的串串联重复复序列。其其特点是是具有固固定的重重复单位位，该重重复单位位首尾相相连形成成重复序序列片段段，通常常存在于于间隔DDNA和和内含子子中。11基基因表达达：基因因表达是是指原核核生物和和真核生生物基因因组中特特定的结结构基因因所携带带的遗传传信息，经经过转录录、翻译译等一系系列过程程，合成成具有特特定的生生物学功功能的各各种蛋白白质。表表现出特特定的生生物
23、学效效应的全全过程。12增增强子：指位于于启动子子上游或或下游并并通过启启动子增增强邻近近基因转转录效率率的DNNA顺序序，增强强子本身身不具备备启动子子活性。13SSD序列列：与细细菌166S rrRNAA 3，端端互补的的序列。原原核生物物在起始始密码AAUG上上游方向向4-113个碱碱基之间间有一段段富含嘌嘌呤的序序列，其其一致序序列为AAGGAAGG，称称为Shhinee-Daalgaamo序序列（SSD序列列）14反反式作用用因子：反式作作用因子子是DNAA结合蛋蛋白，核核内蛋白白，可使使邻近基基因开放放（正调调控）或或关闭（负负调控）。是是一类细细胞核内内蛋白质质因子。在在结构上上
24、含有与与DNAA结合的的结构域域。15ccDNAA文库：以细胞胞的全部部mRNNA逆转转录合成成的cDDNA组组成的重重组克隆隆群体称称为cDDNA文文库。16. 基因家家簇：真真核细胞胞的基因因组中有有许多来来源相同同、结构构相似、功功能相关关的基因因常常按按功能成成套组合合，这样样的一套套基因称称为基因因家族或或多基因因家族17.逆逆转录：以RNNA为模模板合成成DNAA的过程程，这与与通常转转录过程程中遗传传信息从从DNAA到RNNA的方方向相反反，故称称为逆转转录作用用。18.光光修复：光复合合酶能特特异地和和嘧啶二二聚体结结合，在在可见光光下催化化光化合合反应，使使环丁烷烷环回复复到
25、两个个独立的的嘧啶，这这一过程程叫光复复合作用用。19.SSOS修修复：是是一种旁旁路系统统，为DDNA的的损伤所所诱导。其其修复的的结果是是导致突突变，是是倾向差差错的修修复。20.反反义RNNA：指指能与特特定mRRNA互互补结合合的RNNA片段段，反义义RNAA由反义义基因转转录而来来。天然然的具有有功能的的反义RRNA分分子一般般在2000个碱碱基以下下。21.锌锌指：指指含有一一段保守守氨基酸酸顺序的的蛋白质质与该蛋蛋白的辅辅基锌螫螫合而形形成的环环状结构构，分为为锌指、锌锌扭（ttwisst）和和锌簇（cclussterr）结构构；22基基因工程程：有目目的的通通过分子子克隆技技术
26、，人人为的操操作改造造基因，改改变生物物遗传性性状的系系列过程程。23、55AUGG：真核核mRNNA为模模板的翻翻译开始始与最靠靠近其55端的第第一个AAUG。习题二 一、填空空题1. 真真核生物物基因组组DNAA序列可可分为（高高度重复复序列）、（中中度重复复序列）和和（低度度重复序序列（单单拷贝序序列）。2.真核核生物基基因组高高度重复复序列包包括（反反向重复复序列）、（卫卫星DNNA）、（卫星DNA）和（微卫星DNA）四种。3. 真真核生物物基因组组高度重重复序列列的功能能是（参参与复制制水平的的调节）（参参与基因因表达的的调控）、（参参与转位位作用）、（与与进化有有关）（与与个体特特
27、征有关关）和（与与减数分分裂时染染色体配配对有关关）。4. AAlu家家族的功功能是（可可能参与与hnRRNA的的加工与与成熟）、（与与遗传重重组及染染色体不不稳定性性有关）、（有有形成ZZ-DNNA的能能力）和和（可能能具有转转录调节节作用）。5. 原原核生物物转录水水平调控控的方式式有（反反转录调调控）和和（正转转录调控控）两种种方式；前者又又可分为为（负控控诱导）和和（负控控阻遏）；后者可可分为（正正控诱导导）和（正正控阻遏遏）。6. 真真核生物物基因表表达调控控包括（DDNA水水平（既既基因组组水平）调调控）、（转转录水平平调控）、（转转录后水水平调控控）、（翻翻译水平平调控）和和（翻
28、译译后水平平调控）五五个层次次。7. 真真核生物物基因组组DNAA水平的的调控包包括（开开放型活活性染色色质）、（基基因扩增增）、（基基因重排排与变换换）、（DDNA甲甲基化）和和（基因因丢失）五五种方式式。8. 反反式作用用因子可可划分为为（通用用转录因因子）、（组组织特异异性转录录因子）和和（诱发发性反式式作用因因子）三三类。9.引起起DNAA变性的的因素有有（热变变性）、（酸酸碱变性性）和（化化学试剂剂变性）三三类。10. 变性DDNA具具有（溶溶液粘度度降低）、（溶溶液旋光光性发生生改变）和和（增色色效应或或高色效效应）性性质。111.影影响DNNA复性性的因素素有（温温度和时时间）、
29、（DDNA浓浓度）和和（DNNA序列列的复杂杂度）三三类。12. 影响杂杂交的因因素有（核核酸分子子的浓度度、长度度和复杂杂性）、（温温度）、（离离子强度度）、（杂杂交液中中的甲酰酰胺浓度度）和（杂杂交条件件的严谨谨性）。13. 原位杂杂交的特特点是（能能在成分分复杂的的组织中中进行单单一细胞胞的研究究）、（不不需从组组织或细细胞中提提取核酸酸，对含含量极低低的靶序序列灵敏敏度高）和和（能准准确反映映组织细细胞的相相互关系系及功能能状态）。14. 端粒的作用是（稳定染色体结构）、（防止染色体末端融合）、（保护染色体结构基因）和（避免遗传信息在复制过程中丢失）。15. 逆转录录酶是多多功能酶酶，
30、具有有（RNNA指导导的DNNA聚合合酶活性性）、（RRNA酶酶H（RRNasseH）活活性）、（DDNA指指导的DDNA聚聚合酶活活性）三三种功能能，但无无（35外外切酶活活性）作作用。16. DNAA的损伤伤、突变变类型有有（碱基基对的置置换）、（颠颠换）、（移移码突变变）、（二二聚体的的形成）和和（重排排）。17. 引起DDNA损损伤、突突变的因因素是（DDNA复复制的错错误）、（DDNA的的修复合合成）、（碱碱基的自自发突变变）、（物物理因素素）和（化化学因素素）。18. DNAA的损伤伤、修复复方式有有（光修修复）、（切切除修复复）、（重重组修复复）和（SSOS修修复）。19. 基因
31、诊诊断的基基本方法法有（核核酸分子子杂交）、（PPCR）、（SSSCPP（PCCR-SSSCPP）（限限制酶酶酶谱分析析）（DDNA序序列测定定）和（DDNA芯芯片技术术）。20.病病毒基因因组可由由（RNNA）或或（DNNA）组组成；细细菌基因因组由一一条（环环状双链链DNAA分子）组组成；真真核生物物基因组组由（DDNA）和和（蛋白白质）形形成（染染色体）。21原原核生物物基因表表达调控控的方式式有（转转录水平平调控）和和（翻译译水平的的调控）中中（转录录水平调调控）是是主要的的方式。22.操操纵子由由（结构构基因）、（操操纵基因因）和（启启动子）组组成；受受（调控控基因）产产物的调调控。
32、23顺顺式作用用元件按按功能可可划分为为（启动动子）、（增增强子）、（终终止子）和和（沉默默子衰衰减子）。24分分子克隆隆技术的的操作包包括（获获取目的的基因）、（将将目的基基因进行行必要的的改造）、（选选择和修修饰克隆隆载体）（将将目的基基因与载载体连接接获得含含有目的的基因的的重组载载体）（重重组载体体导入宿宿主细胞胞）和（筛筛选出含含重组DDNA的的细胞）等等四个基基本过程程。25限限制性内内切酶分分为（型）、（型）、（型）三种，其中只有（型）在基因工程操作中被应用。26. 限制性性内切酶酶识别（迥迥文）序序列； DNAA分子在在该酶切切割下可可产生（平平头末端端）、（具具有5-突出出）
33、或（3-突出的粘性末端）。27分分子克隆隆中常用用的工具具酶有（限限制性核核酸内切切酶）、（DDNA聚聚合酶）、（DDNA连连接酶）、（DDNA修修饰酶）。28分分子克隆隆中常用用的载体体有（质质粒载体体）、（噬噬菌体载载体）、（病病毒载体体）（粘粘粒载体体）和（酵酵母人工工染色体体载体）。29.目目的基因因制备的的常用方方法有（直直接从染染色体中中分离）、（ccDNAA文库法法）、（化化学合成成法制备备DNAA片段）、（基基因文库库法）。30.体体外重组组常用方方法有（粘粘性末端端连接法法）、（平平齐末端端连接法法）、（人人工接头头连接法法）（同同聚物加加尾法）和和（适配配子连接接法）。31
34、. 重组体体导入原原核生物物细胞中中的常用用方法有有（氯化化钙转化化法）和和（转染染法）；重组体体导入真真核生物物细胞中中的常用用方法有有（物理理方法）、（化化学法）和和（生物物法）。32.重重组体的的筛选方方法有（半乳糖苷酶系统筛选）、（表型筛选法）、（菌落快速裂解鉴定法）、（内切酶图谱鉴定）（聚合酶链反应筛选重组子）（菌落或噬菌斑原位杂交）。33. cDNNA文库库的构建建步骤是是（总RRNA提提取及mmRNAA制备）、（ccDNAA文库第第一链的的合成）（ccDNAA文库第第二链的的合成）、（ccDNAA片断与与载体连连接）（噬噬菌体的的包装及及转染）（ccDNAA文库的的扩增和和保存）
35、。34常常用的核核酸探针针包括（寡寡核苷酸酸探针）、（双双链探针针）和（单单链探针针）。35放放射性同同位素标标记常用用的标记记方法有有（缺口口平移法法）、（随随机引物物法）（末末端标记记法）（TT4 DDNA聚聚合酶标标记法）。36分分子克隆隆中常用用的非放放射性同同位素标标记物有有（生物物素）、（地地高辛）、（荧荧光素）等等；常用用的标记记方法有有（缺口口平移法法）、（随随机引物物法）（末末端标记记法）（TT4 DDNA聚聚合酶标标记法）。37核核酸杂交交技术可可分为（液液相杂交交）和（固固相杂交交）两种种类型；后者又又可分为为（膜上上印迹杂杂交）和和（细胞胞原位杂杂交）。38印印迹杂交交
36、中常用用的印迹迹方法有有（Soouthhernn 印迹迹杂交）、（NNorttherrn 印印迹法）、（斑斑点印迹迹杂交）（WWestternn 印迹迹法）；39PPCR技技术的基基本过程程是（高高温变性性）、（低低温退火火）、（中中温延伸伸）。40影影响PCCR的因因素有（引引物）、（模模板）、（耐耐热DNNA聚合合酶活性性和用量量）、（ddNTPP质量和和浓度）、（MMg离子子浓度）、（PPH）、（温温度）、（循循环次数数）。41. PCRR反应的的特点是是（特异异性强）、（灵灵敏度高高）、（简简便、快快速）、（对对标本的的纯度要要求低）。42. TaqqDNAA聚合酶酶是一种种（耐热热）
37、聚合合酶，具具有（55-3DNAA聚合酶酶活性）和和（5-3外切酶酶）活性性，有或或无（33-5外切酶酶活性）活活性。二、选择择题1.大肠肠杆菌DDNA连连接酶只只能连接接（ AA ）A粘性性末端B平平头末端端C3-磷酸酸D5-羟基基2. ppBR3322是是（ A ）A复制制型载体体B表表达型载载体 CC穿梭梭载体 D噬菌体体载体3、pUUC载体体是（ B ）A复制制型载体体B表表达型载载体 CC穿梭梭载体 D噬菌体体载体4. MM13噬噬菌体是是（ AA ）A单链链DNAA噬菌体体 B双双链DNNA噬菌菌体 CRNAA噬菌体体 DD都不不是三、问答答题1分子子克隆中中常用的的工具酶酶有哪些
38、些？各有有何用途途？ 11.限制制性内切切酶：11.DNNA重组组，2，构构建新质质粒，33，组建建DNAA物理图图谱 22.DNNA聚合合酶：制制备DNNA探针针 33，逆转转录酶：DNAA的序列列分析；用于各各种PCCR 44,DNNA链接接酶：11粘端DDNA或或DNAA切口间间的连接接 2，可可用于粘粘性未端端的连接接 55，DNNA修饰饰酶：改改变成修修饰DNNA的某某些基因因，如加加“尾巴”。2何谓谓载体？分子克克隆中常常用的载载体有哪哪些？理理想的载载体应具具备哪些些条件？ 载载体：指指能够将将外源性性DNAA片段引引入宿主主细胞并并能在宿宿主细胞胞中进行行自我复复制或最最终使外
39、外源性DDNA表表达的自自主DNNA。 常常用的载载体有：质粒、噬噬菌体、粘粘粒、病病毒、人人工染色色体 理理想载体体条件：1、在在宿主细细胞中有有自我复复制能力力 2、拷拷贝数多多 3、应应具有筛筛选标志志 4、有有RE切切割位点点 5、分分子量不不宜过大大 6、最最好配备备有调控控元件 7、载载体DNNA与宿宿主DNNA容易易分开3何谓谓PCRR？试述述PCRR基本技技术原理理和影响响因素。 PPCR是是一种体体外扩增增特异片片段的技技术，其其原理类类似DNNA的体体内扩增增。 它它包括：高温变变性（990-997C）低温温退火（44555C）中温温延伸（772度左左右）。变变性：待待扩增
40、的的DNAA模板加加热变形形成单链链；退火火：降低低温度，是是单链靶靶序列与与寡核苷苷酸引物物退火；延伸：在适当当条件下下，利用用DNAA聚合酶酶使引物物延伸，产产生新的的双链。这这三个基基本步骤骤重复循循环，导导致特异异的靶序序列的指指数扩增增。影响响PCRR反应五五要素：引物 TaqqDNAA聚合酶酶 Dnntp 模板和和二价MMg离子子4将目目的DNNA与载载体DNNA连接接起来的的方法有有哪些？并用文文或图表表示各种种连接过过程。 11、粘性性末端连连接法：以同一一种限制制性内切切酶切制制目的基基因和载载体DNNA获得得相同的的粘性互互补末端端，在一一定温度度下，两两者的粘粘性末端端互
41、补配配对，再再经DNNA连接接酶连接接。 22、平齐齐末端连连接法：以同一一种限制制性内切切酶切制制目的基基因和载载体DNNA，产产生平齐齐末端，在在高浓度度DNAA，大量量T4DDNA连连接酶存存在时，可可以直接接利用平平端将目目的基因因与载体体连接起起来 33、人工工接头连连接法：人工合合成的大大小约88到122个核苷苷酸，并并具有RRE识别别信点的的平齐末末端双链链寡核苷苷酸图文文序列通通过T44DNAA连接酶酶可与大大多数平平端DNNA连接接。用相相同限制制内切酶酶切割可可产生所所需粘性性末端 44、适配配子连接接法：人人工合成成具有一一个以上上限制酶酶识别位位点的短短序列，它它具有一
42、一个平端端，可与与其它DDNA平平端连接接，同时时还有某某种限制制酶的突突出端，可可与含互互补的限限制酶突突出端的的DNAA片段连连接用相相同限制制内切酶酶切割可可产生所所需粘性性末端5、同聚聚物加尾尾法：给给载体DDNA和和目的DDNA分分子末端端添加多多聚dAA和Dtt,形成成粘性末末端，进进而连接接。四、简述述题1原核核生物与与真核生生物基因因组结构构特点。原核特点点A有类核核结构B染色体体DNAA通常与与细胞膜膜相连C 具有有操纵子子结构D 结构构基因都都是单拷拷贝，rrRNAA基因为为多拷贝贝，基因因组DNNA中不不编码的的部分所所占比列列比真核核细胞基基因组少少得多(编码序序列为9
43、90%)。E 不出出现基因因重叠现现象F 具有有相同基基因，即即编码同同工酶的的基因。G DDNA分分子具有有各种功功能的识识别区域域H 具有有终止子子I 基因因组中只只有一个个复制起起始点：基因数数量少 体积小小J基因组组中存在在可移动动的DNNA序列列 包括括插入序序列和转转座子 也包括括质粒。真核生物物基因特特点：A真核生生物基因因组DNNA与蛋蛋白质结结合形成成染色体体，储存存于细胞胞核内，除除配子细细胞外，体体细胞被被的基因因组是双双份的（即即双倍体体）即有有两份同同源的基基因组。B真核细细胞是基基因转录录的产物物为单顺顺反子。一一个结构构基因经经过转录录生成一一个mRRNA分分字，
44、买买翻译生生成一条条多肽链链。C存在重重复序列列，可重重复次数数可达百百万次以以上D基因组组中不编编码的区区域多于于编码区区域E大部分分基因含含有内含含子，因因此 基基因是不不连续的的F基因组组远远大大于原核核生物的的基因组组，具有有许多复复制起始始点，而而每个复复制子的的长度较较小。G 真核核生物基基因之间间存在编编码空白白区或转转录的空空白区，称称为间隔隔区DNNA。基基因组愈愈大，间间隔区DDNA所所占的比比列也愈愈高。2原核核生物转转录水平平的调控控。(1) 转录水水平调控控类型：A 负转转录调控控：调节节基因的的产物是是阻止蛋蛋白，起起着阻止止结果基基因转录录的作用用。根据据其作用用特征又又可分为为负控诱诱导和负负控阻止止作用。