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1、传染性法氏囊病卵黄抗体效价的测定第1页,本讲稿共13页掌握鸡传染性法氏囊病卵黄抗体效价的测定方法实训目标第2页,本讲稿共13页氯化钠、琼脂粉、培养皿、打孔器、酒精灯、鸡蛋、96孔血凝板、微量移液器、烧杯、带盖瓷盘、注射器、生理盐水、蒸馏水、标准抗原等仪器设备第3页,本讲稿共13页方法步骤(一)1%琼脂平板制备(二)稀释卵黄(三)加样(四)反应第4页,本讲稿共13页(一)(一)1%琼脂平板制备琼脂平板制备 1.制板:用810%氯化钠溶液配制1%琼脂溶液,电炉加热使之充分溶化后,倒入直径90 mm培养皿,制成厚度为2.53mm琼脂平板;平置,在室温下冷却凝固后打孔。第5页,本讲稿共13页2.打孔:
2、在琼脂板上按7孔一组的梅花形打孔(中间1孔,周围6孔),孔径5mm,孔距25mm,将孔内的琼脂用8号针头斜面向上轻轻将琼脂挑出,勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。一般打孔两组。第6页,本讲稿共13页3.封底:用酒精灯轻烤平皿底部至微烫,封闭孔底部,以防侧漏。第7页,本讲稿共13页4.编号:在平皿底用蜡笔编号,第一组编号16,第二组编号712。第8页,本讲稿共13页(二)稀释卵黄(二)稀释卵黄 先用微量移液器在96孔血凝板加生理盐水,每孔50微升,共加112孔;再于第一孔加50微升卵黄,倍比稀释至12孔。第9页,本讲稿共13页(三)加样(三)加样 中央孔加入传染性法氏囊病病毒标准抗原,加样量以“满而不溢”为原则。用微量移液器小心的将96孔血凝板中不同浓度卵黄液小心加至琼扩板的周边孔上,血凝板孔号与琼扩板孔号要一一对应,加样从低浓度开始加样,每加一个浓度,吸嘴尽量喷干净 第10页,本讲稿共13页(四)反应(四)反应 将琼扩板静置12min,加盖、倒置入湿盒中,放入37的温箱中2448h。第11页,本讲稿共13页(五)结果判断(五)结果判断2448h后,观察出现白色沉淀线的卵黄稀释度,即是IBD抗体效价。第12页,本讲稿共13页课后作业课后作业1.写出实习报告;2.掌握IBD卵黄抗体的检测方法。第13页,本讲稿共13页