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1、关于实验四血凝和血凝抑制试验第一页，讲稿共十七页哦一、实验目的一、实验目的 掌掌握握血血凝凝和和血血凝凝抑抑制制试试验验的的原原理理，以以及及使使用用该该试试验验测测定定血血清清抗抗体体水水平平的的操操作作步步骤骤和和结果判定方法。结果判定方法。第二页，讲稿共十七页哦二、实验原理二、实验原理（一）血凝试验（一）血凝试验（HA）有有些些病病毒毒能能够够促促使使某某些些动动物物（如如鸡鸡、鹅鹅、豚豚鼠鼠、绵绵羊羊）和和人人的的红红细细胞胞发发生生凝凝集集，这这就就是是红红细细胞胞凝凝集集现象，称做现象，称做血凝试验血凝试验。病病毒毒凝凝集集红红细细胞胞是是一一种种较较为为普普遍遍的的现现象象，可可
2、以以作作为病毒鉴定的一个指标。为病毒鉴定的一个指标。第三页，讲稿共十七页哦HA试验的原理图试验的原理图第四页，讲稿共十七页哦病病毒毒血血凝凝素素与与完完整整成成熟熟的的病病毒毒颗颗粒粒结结合合较较密密切切，不不经经特特殊殊化化学学方方法法处处理理不不能能分分开开。例例如如流流感感、腮腮腺腺炎炎、新新城城疫疫等等病病毒毒，病病毒毒游离下来后，红细胞不能再次被凝集。游离下来后，红细胞不能再次被凝集。病毒凝集红细胞病毒凝集红细胞可以分为可以分为3 3种类型种类型第五页，讲稿共十七页哦病病毒毒血血凝凝素素与与完完整整成成熟熟的的病病毒毒颗颗粒粒易易于于分分开开，血血凝凝素素呈呈游游离离状状态态，例例如
3、如天天花花、牛牛痘痘、鼠痘等病毒，它们的凝集现象是可逆的。鼠痘等病毒，它们的凝集现象是可逆的。象象各各种种脑脑炎炎病病毒毒、口口蹄蹄疫疫病病毒毒等等，凝凝集集红红细细胞胞的的条条件件很很严严格格，对对红红细细胞胞的的种种类类有有很很严严格格的的选选择择，同同时时还还要要掌掌握握反反应应的的pHpH和和温温度等。度等。第六页，讲稿共十七页哦（二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（HI）当当病病毒毒悬悬液液中中加加入入特特异异性性抗抗体体时时，这这种种红红细细胞胞凝凝集集的的现现象象就就被被抑抑制制，称称做做红红细细胞凝集抑制试验，也叫胞凝集抑制试验，也叫血凝抑制试验血凝抑制试验。第七页，讲稿共十七
4、页哦HI试验的原理图试验的原理图第八页，讲稿共十七页哦三、试验材料三、试验材料1.鸡鸡新新城城疫疫病病毒毒：鸡鸡新新城城疫疫弱弱毒毒株株（Lasota）接接种种鸡鸡胚胚、收获尿囊液制备。收获尿囊液制备。2.鸡鸡红红细细胞胞：采采集集健健康康鸡鸡血血液液，以以阿阿氏氏液液抗抗凝凝，以以生生理理盐盐水水洗洗涤涤35次次，将将血血浆浆、白白细细胞胞等等充充分分洗洗去去，用用生理盐水配置成生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。红细胞悬液使用。3.0.85%生理盐水。生理盐水。4.被检血清，采自被检鸡的血清。被检血清，采自被检鸡的血清。第九页，讲稿共十七页哦四、操作步骤四、操作步骤（一）血凝试验（一）血凝试
5、验（HA）1.在血凝板第一排的在血凝板第一排的112孔加入孔加入50l生理盐水。生理盐水。2.在在第第1孔孔中中加加入入50l病病毒毒抗抗原原，反反复复吸吸取取混混匀匀后后吸吸50l到到第第2孔孔，如如此此倍倍比比稀稀释释直直到到第第10孔孔，混混匀后弃匀后弃50l；最后两孔（；最后两孔（11、12）为细胞对照。）为细胞对照。第十页，讲稿共十七页哦3.将将1%的的红红细细胞胞轻轻轻轻摇摇动动混混匀匀，在在112孔孔中中每每孔孔加入加入50l。4.手工震荡，手工震荡，37静置静置30min后观察结果。后观察结果。5.结果观察（结果观察（血凝价是血凝价是1：？：？）。）。第十一页，讲稿共十七页哦1
6、:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 C C 以以50%的的红红细细胞胞发发生生凝凝集集的的病病毒毒悬悬液液的的最最高高稀稀释释度度作作为血凝价的终点，即为血凝价的终点，即一个血凝单位一个血凝单位。第十二页，讲稿共十七页哦（二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（HI）1.在血凝板的在血凝板的112孔加入孔加入50l生理盐水，最后一孔加生理盐水，最后一孔加100l。2.第第1孔加入待检血清孔加入待检血清50l，混匀后吸，混匀后吸50l至第至第2孔，孔，倍比倍比稀释稀释直至第直至第10孔，混匀后弃孔，混匀后弃50l。3.从从111孔，每孔
7、加稀释好的孔，每孔加稀释好的50l 4 4个血凝单位个血凝单位的病毒悬的病毒悬液液。如果血凝价为如果血凝价为1:21:28 8，那么，那么4 4个血凝单位就是个血凝单位就是1:21:26 6第十三页，讲稿共十七页哦4.将将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在的红细胞轻轻摇动混匀，在112孔中每孔加孔中每孔加入入50l。5.手工震荡，在手工震荡，在37静置静置30min后观察结果。后观察结果。6.结果判定（血凝抑制价是结果判定（血凝抑制价是1：？，被检血清为阴：？，被检血清为阴/阳性）。阳性）。第十四页，讲稿共十七页哦HA试验试验HI试验试验第十五页，讲稿共十七页哦HAHI细胞对照第十六页，讲稿共十七页哦感谢大家观看第十七页，讲稿共十七页哦