《手性药物高效液相色谱拆分课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《手性药物高效液相色谱拆分课件.ppt（20页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、关于手性药物高效液相色谱拆分第1页，此课件共20页哦 手性药物的高效液相色谱拆分方手性药物的高效液相色谱拆分方法包括薄层色谱、气相色谱、液相色法包括薄层色谱、气相色谱、液相色谱、超临界流体色谱和电泳在内的几谱、超临界流体色谱和电泳在内的几乎所有色谱和准色谱手段都已应用于乎所有色谱和准色谱手段都已应用于对映体拆分。一般分为间接法与直接对映体拆分。一般分为间接法与直接法。法。第2页，此课件共20页哦直接法直接法n手性试剂衍生化法手性试剂衍生化法(CD F)间接法间接法n手性固定相手性固定相(C S P)拆分法拆分法n手性流动相手性流动相(C M P)拆分法拆分法第3页，此课件共20页哦 手性固定相
2、是由担体键合高光学纯度的手性异构体制作手性固定相是由担体键合高光学纯度的手性异构体制作而成，检测物在手性固定相表面形成非对映体对，根据其稳而成，检测物在手性固定相表面形成非对映体对，根据其稳定常数不同而获得分离。定常数不同而获得分离。用于色谱分离的手性固定相已经被大量研究，已有用于色谱分离的手性固定相已经被大量研究，已有100100多多种液相色谱固定相被商业化。目前所研究的高效液相色谱手种液相色谱固定相被商业化。目前所研究的高效液相色谱手性固定相有性固定相有 7 7大类。大类。其中主要应用的有：其中主要应用的有：PirklePirkle型型CSPCSP、环糊精、环糊精CSPCSP、多糖类、多糖
3、类CSPCSP、蛋白质、蛋白质CSP CSP。手性固定相手性固定相(C S P)拆分法拆分法第4页，此课件共20页哦CSP种类作用机理应用Pirkle型CSP 通过含末端羧基或异氰酸酯基手性前体与氨基键合硅胶进行缩合反应，分别形成含酰胺或脲型结构CSP 氨基酸、乙内酰脲、内酰脲、胺类、醇类及硫醇类药物对映体拆分环糊精CSP 环糊精的手性识别主要来自环内腔对芳烃或脂 肪烃类侧链的包容作用，以及环外壳上的羟基与药物对映体分子发生氢键作用一环糊精：适用于大多数药物一环糊精：适用于相对分子质 量小于200的药物一环糊精：适用于较大相对分 子质量药物多糖类CSP 主要来自氨基甲酸酯或酯的部位与被拆分物之
4、间形成氢键或偶极 偶极作用，或通过被拆分物分子进入纤维索网状腔，导致腔内立体环境的改变而实现 主要用于分离巴比妥类药物、麻醉药和抗抑郁药等蛋白质CSP 可识别药物对映体在蛋白质的结合位点而达到手性分离 可直接分离许多药物，如硫喷妥因、心得怡及阻滞剂等第5页，此课件共20页哦 优点：优点：分离时间短，而手性选择性和拆分能力分离时间短，而手性选择性和拆分能力高，多数药物在分离前都不需要进行衍生化反应，高，多数药物在分离前都不需要进行衍生化反应，分分离方法直接。离方法直接。局限性：局限性：色谱柱价格昂贵，部分固定相还存在稳色谱柱价格昂贵，部分固定相还存在稳定性差，柱容量低，柱强度差等缺点，且根据不同
5、手定性差，柱容量低，柱强度差等缺点，且根据不同手性药物的性质不同，选用的分析方法也不同。性药物的性质不同，选用的分析方法也不同。C S P 法优缺点法优缺点第6页，此课件共20页哦手性流动相手性流动相(C M P)拆分法拆分法 又称手性添加剂法，这种拆分法是在流动相中加又称手性添加剂法，这种拆分法是在流动相中加入手性试剂，利用手性试剂与各对映体结合的稳定常入手性试剂，利用手性试剂与各对映体结合的稳定常数不同，以及药物与结合物在固定相上分配系数的不数不同，以及药物与结合物在固定相上分配系数的不同来进行分离。同来进行分离。优点：优点：优点：优点：此法不需昂贵的手性柱，亦无须进行柱此法不需昂贵的手性
6、柱，亦无须进行柱前衍生，手性添加剂可视要求而更换，使用比较方前衍生，手性添加剂可视要求而更换，使用比较方便。便。其中主要应用的有：配体交换型手性添加剂、环糊其中主要应用的有：配体交换型手性添加剂、环糊精添加剂、手性离子对添加剂。精添加剂、手性离子对添加剂。第7页，此课件共20页哦手性试剂衍生化法手性试剂衍生化法(CD F)该法是药物对映体在分离前与高光学纯度衍生化试剂该法是药物对映体在分离前与高光学纯度衍生化试剂(C D(C D A)A)反应，反应，形成非对映体，形成非对映体，再进行色谱分离测定再进行色谱分离测定。该法要求手性试剂及反应产物在化学性质上和手性上该法要求手性试剂及反应产物在化学性
7、质上和手性上很稳定，在反应及色谱条件下，试剂、手性药物和反应产很稳定，在反应及色谱条件下，试剂、手性药物和反应产物不发生消旋化反应。手性试剂应具有紫外或荧光吸收等物不发生消旋化反应。手性试剂应具有紫外或荧光吸收等敏感结构，敏感结构，使生成物具有良好的可检测性。使生成物具有良好的可检测性。第8页，此课件共20页哦一些手性衍生化试剂和应用一些手性衍生化试剂和应用 第9页，此课件共20页哦 优点：优点：可使用已有的非手性同定相，可使用已有的非手性同定相，花费少，通过选用具有花费少，通过选用具有强烈紫外吸收或荧光吸收的手性试剂，强烈紫外吸收或荧光吸收的手性试剂，可提高检测敏感度，可提高检测敏感度，而而
8、且多数的衍生化试剂具有良好的对热及水的稳定性。且多数的衍生化试剂具有良好的对热及水的稳定性。局限性：局限性：局限性：局限性：是手性试剂需要有高的光学纯度，各对映体的衍生是手性试剂需要有高的光学纯度，各对映体的衍生化速率及平衡常数应一致，化速率及平衡常数应一致，要求衍生化反应迅速、要求衍生化反应迅速、彻底，彻底，否否则影响定量结果。衍生化和色谱分析过程中应不发生消旋化，则影响定量结果。衍生化和色谱分析过程中应不发生消旋化，外消旋药物需要有可被衍生化的基团，外消旋药物需要有可被衍生化的基团，此外衍生化法步骤较烦此外衍生化法步骤较烦琐，琐，衍生化试剂衍生化试剂 绝大多数毒性相当大，绝大多数毒性相当大
9、，而且该方法难以实现而且该方法难以实现分析的自动化。分析的自动化。CD F法优缺点法优缺点第10页，此课件共20页哦u色谱柱：色谱柱：2 5 0 4.6 m m i.d，(制备醋酸纤维素酯类液制备醋酸纤维素酯类液相色谱固定相，涂渍在修饰硅胶表面相色谱固定相，涂渍在修饰硅胶表面)，采用湿法自行装柱。采用湿法自行装柱。u色谱条件：以正己烷色谱条件：以正己烷 一异丙醇的混合溶液一异丙醇的混合溶液(体积比为体积比为9：1)作流动相，作流动相，流速为流速为 0.5 mL m i n，柱温，柱温3 0 ,紫紫外检测波长为外检测波长为2 5 4 n m。u柱性能评价：用流动相冲洗该色谱柱，柱性能评价：用流动
10、相冲洗该色谱柱，直到基线稳定直到基线稳定 以以 1，3，5叔叔 丁基苯测定死时间，丁基苯测定死时间，以苯测其理论以苯测其理论塔板数为塔板数为 2 2 9 6 9 m1。扑尔敏的拆分扑尔敏的拆分第11页，此课件共20页哦 药物扑尔敏溶解在流动相溶剂中，药物扑尔敏溶解在流动相溶剂中，配制的浓度为配制的浓度为3.2 mgmL。扑尔敏的结构示意图扑尔敏的结构示意图1所示。所示。第12页，此课件共20页哦在上述色谱条件下，分别以在上述色谱条件下，分别以0.4和和0.5uL的进样量进样分析的进样量进样分析第13页，此课件共20页哦结果表明：结果表明：此柱在分离药物扑尔敏时，随着进样量的增大，此柱在分离药物
11、扑尔敏时，随着进样量的增大，此柱有些过载，分离效果不佳。一般来说，在分离此柱有些过载，分离效果不佳。一般来说，在分离物进样过载的情况下，样品的分离效果较差，随着物进样过载的情况下，样品的分离效果较差，随着进样量的降低，样品的分离更充分。进样量的降低，样品的分离更充分。这是因为手性分离是这是因为手性分离是 一个吸附和分配的过程，一个吸附和分配的过程，在在进样量过载的情况下，进样量过载的情况下，没有足够的手性基团与分离物没有足够的手性基团与分离物进行作用进行作用，因而对映体的分离就不充分。因而对映体的分离就不充分。第14页，此课件共20页哦 雷诺嗪雷诺嗪的拆分的拆分u色谱柱：色谱柱：1 5 0 m
12、 m4.6 m m，用纤维素，用纤维素 三三 (3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯二甲基苯基氨基甲酸酯)湿法装柱。湿法装柱。u色谱条件：以纯甲醇作流动相，流速为色谱条件：以纯甲醇作流动相，流速为1 mLmin，紫外，紫外检测波长为检测波长为 2 5 4 n m。u分离效果：雷诺嗪对映体获得比较好的拆分效果，分离分离效果：雷诺嗪对映体获得比较好的拆分效果，分离度达到度达到 1.5 7 9，保留时间也比较短，保留时间也比较短，7m i n内即可拆分内即可拆分完毕。完毕。第15页，此课件共20页哦随着流速的下降，随着流速的下降，分离度逐渐升高。分离度逐渐升高。第16页，此课件共20页哦 通过控制流速、流动相等方法对雷诺嗪的通过控制流速、流动相等方法对雷诺嗪的拆分进行了下述研究。拆分进行了下述研究。通过虽然上法雷诺嗪得到非常好的拆分，通过虽然上法雷诺嗪得到非常好的拆分，但是拆分时间过短，容量因子但是拆分时间过短，容量因子k k太小太小(k1)(k1)，且，且无法根据需要调节。无法根据需要调节。于是考察醇类系统对雷诺嗪的手性分离的于是考察醇类系统对雷诺嗪的手性分离的影响。影响。第17页，此课件共20页哦第18页，此课件共20页哦第19页，此课件共20页哦感谢大家观看第20页，此课件共20页哦