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1、关于动物细胞融合与单克隆抗体(3)第1页，讲稿共34张，创作于星期日 20022002年年月日，月日，两场筹备了两场筹备了1010年的年的“太空太空婚礼婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞植物细胞“新新人人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细胞叶肉细胞原生质体原生质体，动动物细胞物细胞“新人新人”是小鼠是小鼠B B淋巴细胞淋巴细胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞，两，两批新人同时在批新人同时在“产房产房”电融合仪内孕育新生命。电融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批一段时间后，我国首批”太空娃娃太空娃娃”终于顺利诞生。终于顺利诞生。对照实验结果表明，细胞
2、融合率大大提高。对照实验结果表明，细胞融合率大大提高。STS“太空婚礼太空婚礼”第2页，讲稿共34张，创作于星期日神舟放飞强国梦神舟放飞强国梦第3页，讲稿共34张，创作于星期日“太空婚礼”科研项目一：“太空婚礼”科研项目二：你你能主持能主持“太空婚礼太空婚礼”中的中的科研项目吗？科研项目吗？挑战自我挑战自我植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术第4页，讲稿共34张，创作于星期日(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图第5页，讲稿共34张，创作于星期日“太空婚礼太空婚礼”植物科研项目计划书植物科研项目计划书项目项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交原理
3、原理融合前处理融合前处理促融方法促融方法用途用途过过程程第一步第一步第二步第二步第三步第三步第四步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞的全能性酶解法去壁酶解法去壁物理法化学法物理法化学法原生质体的制备原生质体的制备原生质体的融合原生质体的融合与筛选与筛选杂种细胞的形成与培养杂种细胞的形成与培养杂种植株的鉴定与筛选杂种植株的鉴定与筛选克服远缘杂交不亲和获得具优良性状克服远缘杂交不亲和获得具优良性状的杂种植株的杂种植株第6页，讲稿共34张，创作于星期日同核体同核体同核体同核体异核体（杂交细胞）异核体（杂交细胞）人工诱导人工诱导还有还有3个个3个以上细胞的融合个以上细胞的融合-筛选
4、筛选第7页，讲稿共34张，创作于星期日物理法物理法 的融合效率较高的融合效率较高,且且对细胞对细胞（原生质体）（原生质体）的伤的伤害小害小,易操作、控制和观易操作、控制和观察。察。太空中处于失重状态，太空中处于失重状态，不同种细胞不同种细胞（原生质体）（原生质体）更容易亲近；更容易亲近；为什么在太空中细胞（原生为什么在太空中细胞（原生质体）融合率会大大上升？质体）融合率会大大上升？为什么选用物理法诱导？为什么选用物理法诱导？第8页，讲稿共34张，创作于星期日请同学们阅读课本请同学们阅读课本P52动物细胞融合内容动物细胞融合内容问题：问题：什么是什么是动物细胞融合？它相当动物细胞融合？它相当于植
5、物体细胞杂交过程的哪一步？于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的它们的过程、基本原理、诱导融合方法和意义是过程、基本原理、诱导融合方法和意义是否相同？否相同？第9页，讲稿共34张，创作于星期日1.11.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法动物细胞融合过程、原理与诱导方法 为什么灭活的为什么灭活的病毒能作诱导剂病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染性保留融合活性保留融合活性第10页，讲稿共34张，创作于星期日1.11.1动物细胞融合过程、原理与诱导方法动物细胞融合过程、原理与诱导方法第11页，讲稿共34张，创作于星期日鼠鼠B淋巴细胞淋巴细胞鼠骨髓瘤细胞鼠骨髓瘤细胞人工诱导人工诱导1.21.2动物
6、动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交瘤细胞杂交瘤细胞 动物细胞融合（动物细胞融合（技术技术）：是指（）：是指（在在一定的条件下一定的条件下）两个或多个细胞融合）两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。形成一个单核细胞的过程。第12页，讲稿共34张，创作于星期日1.31.3动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用第13页，讲稿共34张，创作于星期日问题：问题：抗体由什么细抗体由什么细胞产生？其化学本质是胞产生？其化学本质是什么？与抗原作用的特什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？点？主要分布在哪里？2.1单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念第14页，讲稿共34张，创作于星期日 一
7、个天然抗原物质可有多种和多个决定簇一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。教材中所说的抗。教材中所说的抗原分子刺激淋巴细胞，说的也就是原分子刺激淋巴细胞，说的也就是抗原决定簇抗原决定簇刺激刺激B B淋巴细胞，淋巴细胞，使其分裂分化出使其分裂分化出特异性的效应特异性的效应B B细胞细胞，分泌分泌特异性抗体。特异性抗体。第15页，讲稿共34张，创作于星期日抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法从从血血清清中中分分离离抗抗体体该法制备抗体的特点：该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。的特异性差、灵敏度低。多多种种效效应应B细细胞胞动动物物体体内内多多种种抗
8、抗体体抗抗原原 第16页，讲稿共34张，创作于星期日读下面一段文字资料，读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞可以产细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只分泌一种化学细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。2.1单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单单:单个细胞单个
9、细胞 克隆克隆:无性繁殖无性繁殖单克隆单克隆抗体抗体:单个细胞克隆产生的单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性化学性质单一特异性强强的抗体的抗体第17页，讲稿共34张，创作于星期日提示提示1 1：对：对B B细胞进行细胞培养可行吗？细胞进行细胞培养可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示提示3 3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？哪些可能的设计思路？问题：问题：如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？2.2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备第18页，讲稿共34张，创
10、作于星期日一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆抗单克隆抗体体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞又能大量繁殖的细胞第19页，讲稿共34张，创作于星期日实验目的实验目的:制备单克隆抗体制备单克隆抗体.实验原理：实验原理：实验过程：实验过程：19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验第20页，讲稿共34张，创作于星期日2.2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制
11、备 看书上看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？按正确顺序连接起来。顺序是？第21页，讲稿共34张，创作于星期日描述单克隆抗描述单克隆抗体制备过程步体制备过程步骤骤第22页，讲稿共34张，创作于星期日注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗体专一抗体检测检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选
12、筛选2 21.注射抗原的目的注射抗原的目的是什么？是什么？第23页，讲稿共34张，创作于星期日注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 22.诱导细胞融合的手诱导细胞融合的手段有哪些？段有哪些？第24页，讲稿共34张，创作于星期日注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂交多种杂交细胞细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆抗单克隆抗体
13、体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 23.若细胞两两融合后，有若细胞两两融合后，有几种融合情况？几种融合情况？第25页，讲稿共34张，创作于星期日注射抗原注射抗原B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1专一抗专一抗体检测体检测克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体有限稀释法培养有限稀释法培养 筛选筛选2 24.第一次筛选出的杂交瘤细胞第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？抗体检测？第26页，讲稿共34张，创作于星期日5.5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性实际操
14、作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞？抗体的杂交瘤细胞？第27页，讲稿共34张，创作于星期日有限稀释法有限稀释法稀释多次稀释多次稀释稀释将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。第28页，讲稿共34张，创作于星期日问题：问题：单克隆抗体的突出优点是什么？单克隆抗体的突出优点是什么？特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 克隆单个杂交瘤细胞，可制备克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原决定抗一种抗原决定簇的簇的特异单克隆抗体。特异单克隆抗体。第29页，讲稿共34张
15、，创作于星期日2.3单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速第30页，讲稿共34张，创作于星期日运载药物运载药物(“生物导弹生物导弹”单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头)治疗疾病治疗疾病第31页，讲稿共34张，创作于星期日现在你能主持现在你能主持“太空婚礼太空婚礼”动物科研项目了吗？动物科研项目了吗？比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备原理原理融合前处理融合前处理促融方法促融方法用途用途过过程程第一步第一步第二步第二步第三步第三步第四步第四步细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的
16、流动性、细胞的全能性膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞增殖增殖酶解法去壁酶解法去壁小鼠免疫处理小鼠免疫处理、细胞分散、细胞分散物理法化学法物理法化学法物理、化学、生物法物理、化学、生物法原生质体的制备原生质体的制备融合亲本细胞的准备融合亲本细胞的准备原生质体的融合原生质体的融合与筛选与筛选动物细胞融合与动物细胞融合与两次筛选两次筛选杂种细胞的形成与培养杂种细胞的形成与培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养杂种植株的鉴定杂种植株的鉴定单克隆抗体的分离提纯单克隆抗体的分离提纯单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防 获得具优良性状的杂种植株获得具优良性状的杂种植株第32页，讲稿共34张，创作于星期日课后作业 通过报刊、杂志、互联网或其他媒体搜集资料，了解细胞融合技术与单克隆抗体的新进展，就自己感兴趣的领域，自定选题，写一篇综述报告。参考选题：1、1984年诺贝尔生理学或医学奖2、单克隆抗体的种类；3、单克隆抗体与疾病诊断；4、生物导弹；第33页，讲稿共34张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看9/30/2022第34页，讲稿共34张，创作于星期日