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1、关于动物细胞融合与单克隆抗关于动物细胞融合与单克隆抗体体(2)第1页，讲稿共28张，创作于星期日(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交植物体细胞杂交第2页，讲稿共28张，创作于星期日问题：问题：什么是什么是动物细胞融合？动物细胞融合？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？它相当于植物体细胞杂交过程的哪一步？它们的它们的过程、基本原理、诱导融合方法和意义过程、基本原理、诱导融合方法和意义是否相同？是否相同？（一）动物（一）动物细胞细胞融合融合第3页，讲稿共28张，创作于星期日1 1、什么是抗体？、什么是抗体？单克隆抗体单克隆抗体的制备的制备回顾回顾2 2、抗体的分布？、抗体的分布？抗体
2、是机体受抗原刺激后产生的、并能抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。能的球蛋白。主要分布在血清中。主要分布在血清中。第4页，讲稿共28张，创作于星期日第5页，讲稿共28张，创作于星期日抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法该法制备抗体的特点：该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。的特异性差、灵敏度低。第6页，讲稿共28张，创作于星期日第7页，讲稿共28张，创作于星期日 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞可以产生
3、多细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个达百万种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只分泌一种化学性质单细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念什么是克隆？什么是克隆？“克隆克隆”从英文从英文“clone”“clone”音译而来，是指从一个音译而来，是指从一个共同祖先，通过共同祖先，通过无性繁殖无性繁殖的方法产生出来的一群的方法产生出来的一群遗传遗传特性相同特性相同的的DNADNA分子，细胞或个体。分子，
4、细胞或个体。第8页，讲稿共28张，创作于星期日实验目的实验目的:制备单克隆抗体制备单克隆抗体.实验原理：实验原理：实验过程：实验过程：19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验第9页，讲稿共28张，创作于星期日单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备 请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？字母按正确顺序连接起来。顺序是？第10页，讲稿共28张，创作于星期日第11页，讲稿共28张，创作于星期日单克隆抗体的突出优点：单克隆抗体的突出优点：特异性强、灵敏度高、纯度高、产量大容易标化
5、生产特异性强、灵敏度高、纯度高、产量大容易标化生产 克隆单个杂交瘤细胞，可制备克隆单个杂交瘤细胞，可制备抗一种抗原决定抗一种抗原决定簇的簇的特异单克隆抗体。特异单克隆抗体。原理：细胞膜的流动性原理：细胞膜的流动性、细胞增殖、细胞增殖第12页，讲稿共28张，创作于星期日单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速第13页，讲稿共28张，创作于星期日运载药物运载药物(“生物导弹生物导弹”单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头)治疗疾病治疗疾病第14页，讲稿共28张，创作于星期日细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞的全
6、能性膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞增殖增殖酶解法去壁酶解法去壁小鼠免疫处理小鼠免疫处理、细胞分散、细胞分散物理法化学法物理法化学法物理、化学、生物法物理、化学、生物法原生质体的制备原生质体的制备融合亲本细胞的准备融合亲本细胞的准备原生质体的融合原生质体的融合与筛选与筛选动物细胞融合与动物细胞融合与两次筛选两次筛选杂种细胞的形成与培养杂种细胞的形成与培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养产特定抗体的杂交瘤细胞培养杂种植株的鉴定杂种植株的鉴定单克隆抗体的分离提纯单克隆抗体的分离提纯单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防 获得具优良性状的杂种植株获得具优良性状的杂种植株第15页，
7、讲稿共28张，创作于星期日1 1、单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基（嘧啶的培养基（HAT）中无法生长；而小鼠脾细胞是）中无法生长；而小鼠脾细胞是正常细胞，在正常细胞，在HAT培养基上可正常存活。用聚乙二醇诱培养基上可正常存活。用聚乙二醇诱导细胞融合后，经过数代培养，最终可在导细胞融合后，经过数代培养，最终可在HAT培养基上培养基上存活并能产生单克隆抗体的细胞是存活并能产生单克隆抗体的细胞是 （）A A骨髓瘤细胞之间形成的融合细骨髓瘤细胞之间形成的融
8、合细胞胞 B脾细胞之间形成的融合细胞脾细胞之间形成的融合细胞C C骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞 D脾细胞脾细胞第16页，讲稿共28张，创作于星期日2 2研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A A利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞B B以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C C抗癌物质在克隆细胞中大量合成抗癌物质在克隆细胞中大量合成D D单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合3 3科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得
9、到杂交细科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是是 （）A A经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B B不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C C经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D D不经过免疫的不经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞第17页，讲稿共28张，创作于星期日5.5.实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性实际操作中如何经过两次筛选获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞？抗体的杂交瘤细胞？第18页，讲稿共28张，创作于星期日有限稀释法有限稀释法稀释多
10、次稀释多次稀释稀释将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法将培养皿孔内的上清液取出，检测抗体。常用的方法有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。有：酶联免疫吸附试验和免疫荧光测定。第19页，讲稿共28张，创作于星期日单克隆抗体与多克隆抗体单克隆抗体与多克隆抗体第20页，讲稿共28张，创作于星期日提示提示1 1：对一种效应：对一种效应B B细胞进行细胞培养可行吗？细胞进行细胞培养可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：问题：如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备第21页，讲稿共28张，创作
11、于星期日注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 21.注射抗原的目的是注射抗原的目的是什么？什么？第22页，讲稿共28张，创作于星期日注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 22.诱导细胞融合的手诱导细胞融合的手段有哪些？段有哪些？第23页，讲稿共28张，创作于星期日
12、注射抗原注射抗原效应效应B B细胞细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合多种杂多种杂交细胞交细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法克隆化克隆化单克隆单克隆抗体抗体 筛选筛选2 23.若细胞两两融合后，有几若细胞两两融合后，有几种融合情况？种融合情况？第24页，讲稿共28张，创作于星期日4.单克隆抗体单克隆抗体制备过程步骤制备过程步骤第25页，讲稿共28张，创作于星期日效应效应B B细胞细胞B B淋巴细胞淋巴细胞注射抗原注射抗原骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞融合融合B B-B-B细胞细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞瘤瘤-瘤细胞瘤细胞选择性培养基选择性培养基 筛选筛选1 1多种杂交瘤细
13、胞多种杂交瘤细胞符合要求的杂交瘤符合要求的杂交瘤细胞细胞抗原抗原-抗体抗体杂交法杂交法 筛选筛选2 2克隆化克隆化体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：既可以产生特异性抗体，既可以产生特异性抗体，又可以大量增殖又可以大量增殖第26页，讲稿共28张，创作于星期日 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞可以细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只分泌一种化细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，
14、必须用单个学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单单:单个细胞单个细胞 克隆克隆:无性繁殖无性繁殖单克隆单克隆抗体抗体:单个细胞克隆产生的单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性化学性质单一特异性强强的抗体的抗体什么是克隆？什么是克隆？“克隆克隆”从英文从英文“clone”“clone”音译而来，是指从一个共同祖音译而来，是指从一个共同祖先，通过先，通过无性繁殖无性繁殖的方法产生出来的一群的方法产生出来的一群遗传特性相遗传特性相同同的的DNADNA分子，细胞或个体。分子，细胞或个体。第27页，讲稿共28张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看9/30/2022第28页，讲稿共28张，创作于星期日