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1、基因工程的基本操作工具第一页，讲稿共四十七页哦第二页，讲稿共四十七页哦基因工程的理论铺垫基因工程的理论铺垫n n艾弗里：证明是遗传物质艾弗里：证明是遗传物质n n沃森和克里克：阐明双螺旋结构沃森和克里克：阐明双螺旋结构n n尼伦贝格：破译遗传密码尼伦贝格：破译遗传密码1973年年:美美科恩：将两种不同来源的分子进行体科恩：将两种不同来源的分子进行体外重组，并首次实现了在大肠杆菌中的表达，创立了定外重组，并首次实现了在大肠杆菌中的表达，创立了定向改造生物的新技术向改造生物的新技术基因工程基因工程 1944 19531960 1966第三页，讲稿共四十七页哦第一节 基因工程主要内容：（1）基因工程
2、的概念（2）基因操作的工具（3）基因操作的基本步 骤第四页，讲稿共四十七页哦.基因工程的概念基因工程的概念这种技术是在生物这种技术是在生物体外体外，通过对，通过对DNA分子进行人工分子进行人工“剪切剪切”和和“拼接拼接”，对生物的基因进行改造，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出内表达，产生出人类所需要的基因产人类所需要的基因产物物。第五页，讲稿共四十七页哦概念的把握概念的把握基因工程的别名基因工程的别名操作环境操作环境操作对象操作对象操作水平操作水平基本过程基本过程结
3、果结果特点特点本质本质基因拼接技术或基因拼接技术或DNADNA重组技术重组技术生物体外生物体外基因基因DNADNA分子水平分子水平人类需要的基因产物人类需要的基因产物剪切剪切 拼接拼接导入导入 表达表达打破种的界限，定向改造生物打破种的界限，定向改造生物基因重组基因重组第七页，讲稿共四十七页哦实例：用大肠杆菌生产人的胰岛素实例：用大肠杆菌生产人的胰岛素操作步骤：将操作步骤：将人的胰岛素基因（人的胰岛素基因（目的基因目的基因）转移到转移到大肠杆菌（大肠杆菌（受体细胞受体细胞）中，通中，通过微生物的发酵使大肠杆菌表达人的过微生物的发酵使大肠杆菌表达人的胰岛素基因，从而胰岛素基因，从而获得人的胰岛素
4、获得人的胰岛素（结果结果）。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向改造然后放到另一种生物的细胞里，定向改造生物的遗传性状。生物的遗传性状。第八页，讲稿共四十七页哦基因工程操作过程中基因工程操作过程中 常用的工具和酶有哪些？常用的工具和酶有哪些？各自的功能是什么？各自的功能是什么？看书：看书：P10-12第九页，讲稿共四十七页哦基因操作的工具基因操作的工具基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细
5、的工具是不行的。进行基接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具：因操作最少需要以下三种工具：、基因的剪刀、基因的剪刀限制性内切酶（限制酶）限制性内切酶（限制酶）一种限制酶一种限制酶只能只能识别识别一种一种特定的特定的核苷核苷酸酸序列序列，并在特定的，并在特定的位点位点上将上将DNADNA分子切分子切断。目前已发现的限断。目前已发现的限制酶有制酶有50000多种。多种。第十页，讲稿共四十七页哦第十一页，讲稿共四十七页哦重播重播第十二页，讲稿共四十七页哦切割位点切割位点实实质质；2个个磷磷酸酸二二酯酯键键的的断断裂裂 氢氢键键会会自自然然断断裂裂DNADNA被限制酶切
6、断后有两个被限制酶切断后有两个反向互补反向互补的的“黏性末黏性末端端”（单链的片段）（单链的片段）。被同一种限制酶切断的几个。被同一种限制酶切断的几个DNADNA具具有相同的黏性末端，能够通过互补进行配对。有相同的黏性末端，能够通过互补进行配对。磷磷酸酸二二酯酯键键切割位点切割位点第十三页，讲稿共四十七页哦看P10-11例题：-GAATTC-解答：切载体：切载体：切目的基因：切目的基因：-GAATTC-GAATTC-GAATTC-GAATTC-GAATTC-CTTAAG-CTTAAG-CTTAAG-G AATTC-G AATTC-G AATTC-CTTAA G-CTTAA G-CTTAA G-
7、(1），），5-GACGTC-3(2），），-AGGCCT-(3），），-AATT-切载体切载体 切目的基因切目的基因练一练：练一练：第十四页，讲稿共四十七页哦、基因的针线、基因的针线DNADNA连接酶连接酶连接酶的作用是：将连接酶的作用是：将互补配对的两个互补配对的两个黏性末端黏性末端连接起来，使之成为一个完整的连接起来，使之成为一个完整的DNADNA分子。分子。第十五页，讲稿共四十七页哦重重播播、基因的针线、基因的针线DNADNA连接酶连接酶连接酶的作用是：将连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末互补配对的两个黏性末端连接或平口末端端连接或平口末端起来，使之成为一个完整的起来，使之成为一个
8、完整的DNADNA分子。分子。实质：（氢键容易结合）实质：（氢键容易结合）催化形成磷酸催化形成磷酸二酯键。二酯键。第十六页，讲稿共四十七页哦AATTGCCTTAAG第十七页，讲稿共四十七页哦“分子缝合针分子缝合针”DNA连接酶连接酶两者都是将两者都是将双链双链DNA片段片段“缝合缝合”起来，恢复被限起来，恢复被限制酶切开的两个核苷之间的磷酸二酯键。制酶切开的两个核苷之间的磷酸二酯键。但但Ecoli DNA连接酶只能连接酶只能“缝合缝合”黏性末端不能黏性末端不能“缝合缝合”平末端；平末端；而而T4 4 DNA连接酶既能连接酶既能“缝合缝合”黏性末端又能黏性末端又能“缝缝合合”平末端。平末端。根据
9、来源不同可分为根据来源不同可分为:Ecoli DNA连接酶连接酶 T4 DNA连接酶连接酶在性质上两者在性质上两者 异同点：异同点：第十八页，讲稿共四十七页哦DNA连接酶与连接酶与DNA聚合酶是一回聚合酶是一回事吗？为什么？事吗？为什么？不是一回事不是一回事 相同点：都形成磷酸二酯键相同点：都形成磷酸二酯键不同点：不同点：1）DNA聚合酶只能将聚合酶只能将单个核苷酸单个核苷酸加到已有加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而而DNA连接酶是在连接酶是在两个两个DNA片段片段之间形成之间形成磷酸二酯键磷酸二酯键2）DNA聚合酶需要以一条聚合酶需要以一条DNA链为模板；
10、链为模板；而而DNA连接酶不需要模板。连接酶不需要模板。第十九页，讲稿共四十七页哦3 3、基因的运输工具、基因的运输工具运载体运载体要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将目的基因送入细胞的工具就是运载体。目的基因送入细胞的工具就是运载体。运载体必须同时满足运载体必须同时满足三个要求：三个要求：具有多个限具有多个限制酶切点；制酶切点；能在宿主细能在宿主细胞内稳定保存并复制表达；胞内稳定保存并复制表达；具有标记基因具有标记基因。常用的载体有质
11、粒、常用的载体有质粒、噬菌体、动植物病毒等；噬菌体、动植物病毒等；最早用的载体是一种环状最早用的载体是一种环状DNADNA质粒。质粒。目目的的基基因因插插入入位位点点第二十一页，讲稿共四十七页哦基因操作的工具一一.“分子手术刀分子手术刀:限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶来源来源:主要来自原核生物主要来自原核生物作用作用:将外来的将外来的DNA切断切断结果结果:产生黏性末端或产生黏性末端或 平末端平末端二二.“分子缝合针分子缝合针”:DNA连接酶连接酶分类分类:Ecoli DNA连接和连接和T4 DNA连接酶连接酶 作用作用:把黏性末端之间的缝隙把黏性末端之间的缝隙“缝合缝合”起来起来三三.“分
12、子运输车分子运输车”:基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体种类种类:质粒、噬菌体、动植物病毒等质粒、噬菌体、动植物病毒等条件条件:自我复制、限制酶切点、标记基因、自我复制、限制酶切点、标记基因、安全的、大小应适合安全的、大小应适合第二十二页，讲稿共四十七页哦n n1.以下说法正确的是以下说法正确的是 （）n n A、所有的限制酶只能识别一种特定的核、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列苷酸序列n n B、质粒是基因工程中唯一的运载体、质粒是基因工程中唯一的运载体 n n C、运载体必须具备的条件之一是：具有、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接多个限制
13、酶切点，以便与外源基因连接n n D、DNA连接酶使黏性末段的碱基之间形连接酶使黏性末段的碱基之间形成氢键成氢键C第二十三页，讲稿共四十七页哦n n2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是不属于质粒被选为基因运载体的理由是n n A、能复制、能复制 （）n n B、有多个限制酶切点、有多个限制酶切点 n n C、具有标记基因、具有标记基因n n D、它是环状、它是环状DNAD第二十四页，讲稿共四十七页哦n n3.有关基因工程的叙述中，错误的是（有关基因工程的叙述中，错误的是（）n n A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性状，培育生物新品种性状，培育生物新品
14、种n n B、重组、重组DNA的形成在细胞内完成的形成在细胞内完成n n C、目的基因须由运载体导入受体细胞、目的基因须由运载体导入受体细胞n n D、质粒都可作为运载体、质粒都可作为运载体B D第二十五页，讲稿共四十七页哦4 4、下列关于限制酶的说法正确的是、下列关于限制酶的说法正确的是A A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少B B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C C、不同的限制酶切割、不同的限制酶切割DNADNA后都会形成黏性末端后都会形成黏性末端D D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成
15、的氢键、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键B 第二十六页，讲稿共四十七页哦n n5、关于限制酶的说法中，正确的是（、关于限制酶的说法中，正确的是（）n nA、限制酶是一种酶，只识别、限制酶是一种酶，只识别GAATTCGAATTC碱基序列碱基序列碱基序列碱基序列B、EcoRI切割的是切割的是GA之间的氢键之间的氢键之间的氢键之间的氢键n nC C限制酶一般不切割自身的限制酶一般不切割自身的DNADNA分子，只切割外源分子，只切割外源分子，只切割外源分子，只切割外源DNAn nD D限制酶只存在于原核生物中限制酶只存在于原核生物中限制酶只存在于原核生物中限制酶只存在于原核生物中n n6、DNA
16、连接酶催化的反应是连接酶催化的反应是连接酶催化的反应是连接酶催化的反应是()n nADNADNA复制时母链与子链之间形成氢键复制时母链与子链之间形成氢键复制时母链与子链之间形成氢键复制时母链与子链之间形成氢键 n nB B黏性末端碱基之间形成氢键黏性末端碱基之间形成氢键n nC两个两个DNADNA片段黏性末端之间的缝隙的连接片段黏性末端之间的缝隙的连接 D DA、B B、C都不正确都不正确都不正确都不正确CD第二十七页，讲稿共四十七页哦n n7 7、作为基因的运输工具、作为基因的运输工具载体，必须具备的条件及理由载体，必须具备的条件及理由载体，必须具备的条件及理由载体，必须具备的条件及理由是是
17、是是()n nA A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因供大量的目的基因供大量的目的基因供大量的目的基因n nB B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达n nC具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件n nD D、能够在宿主细胞
18、中复制并稳定保存，以便于进行筛选、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选n n8 8、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是 n n能自主复制能自主复制不能自主复制不能自主复制结构很小结构很小 是蛋白是蛋白质质 是环状是环状RNA是环状是环状是环状是环状DNA能能能能“友好友好友好友好”地地地地“借居借居借居借居”n n A A、B B、n n C C DCA第二十八页，讲稿共四十七页哦n n9、在受体细胞中能检测出目的基因是因为、在受体细胞中能检测出目的基因是因为、在受体细胞中能检测出目的基因是因为、在受体细胞中能检测出目的基因是因为(
19、)()n nA A、目的基因上有标记、目的基因上有标记 n nB B、质粒具有某些标记基因、质粒具有某些标记基因、质粒具有某些标记基因、质粒具有某些标记基因n nC C、重组质粒能够复制、重组质粒能够复制 D以上都不正确以上都不正确n n10、关于质粒的叙述正确的是、关于质粒的叙述正确的是、关于质粒的叙述正确的是、关于质粒的叙述正确的是()()n nA、质粒是能够自我复制的环状、质粒是能够自我复制的环状、质粒是能够自我复制的环状、质粒是能够自我复制的环状DNA分子分子分子分子 n nB B、质粒是唯一的载体、质粒是唯一的载体n nC、重组质粒是目的基因、重组质粒是目的基因 D D、质粒可在宿主
20、外单独复制、质粒可在宿主外单独复制BA第二十九页，讲稿共四十七页哦n n1111、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是n nA A、B、C、Dn n1212、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是 (1)限制酶限制酶限制酶限制酶(2)(2)连接酶连接酶连接酶连接酶(3)(3)解旋酶解旋酶(4)(4)还原酶还原酶还原酶还原酶n nA
21、A、(1)(2)(3)B(1)(2)(3)B、(1)(2)(4)(1)(2)(4)n nC、(1)(2)D、(1)(3)(1)(3)BC第三十页，讲稿共四十七页哦n n1313、以下是两种限制酶切割后形成的、以下是两种限制酶切割后形成的、以下是两种限制酶切割后形成的、以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，分片段，分片段，分片段，分析回答问题。析回答问题。析回答问题。析回答问题。n n(1)(1)其中其中和和是由一种限制酶切割是由一种限制酶切割是由一种限制酶切割是由一种限制酶切割形成的形成的形成的形成的 末端，两者要重组成一个末端，两者要重组成一个末端，两者要重组成一个末端，两者要重组成一个D
22、NADNA分子，所分子，所用用DNADNA连接酶通常是连接酶通常是连接酶通常是连接酶通常是。n n(2)(2)和和和和是由另一种限是由另一种限是由另一种限是由另一种限制酶切割形成的制酶切割形成的制酶切割形成的制酶切割形成的末端，两者要形成重末端，两者要形成重末端，两者要形成重末端，两者要形成重组组组组DNA片段，所用片段，所用DNA连接酶通常是连接酶通常是连接酶通常是连接酶通常是。平平 T4DNA连接酶连接酶 黏性黏性 Ecoli DNA连接酶连接酶第三十一页，讲稿共四十七页哦基基因因克克隆隆操操作作第三十二页，讲稿共四十七页哦基因工程的操作步骤有哪些？基因工程的操作步骤有哪些？各个步骤如何进
23、行？各个步骤如何进行？看书看书P12第三十三页，讲稿共四十七页哦目前被较广泛提取使用目前被较广泛提取使用的目的基因有：的目的基因有：苏云苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。抗病基因等。基因操作的基本步骤基因操作的基本步骤(一）提取目的基因一）提取目的基因将需要的基因从将需要的基因从供体供体生物生物的的细胞细胞内提取出来。内提取出来。供体生物细胞供体生物细胞取出取出DNADNA用限制酶剪去用限制酶剪去多余部分多余部分目的基因目的基因限制酶限制酶第三十四页，讲稿共四十七页哦提取目的基因的
24、方法提取目的基因的方法直接分离基因直接分离基因(从基因文库中获取）从基因文库中获取）鸟枪法鸟枪法将供体生物的将供体生物的DNADNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。该法最大的该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。且不能将真核生物的基因转移到原核生物
25、中去。人工合成基因法人工合成基因法有两种方法：有两种方法：直接合成法直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNARNA核苷酸顺序，再据此推算出基因核苷酸顺序，再据此推算出基因DNADNA的脱氧核苷的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。第三十五页，讲稿共四十七页哦DNADNA合成仪合成仪（3 3）利用）利用PCRPCR技术扩增目的技术扩增目的基因基因 P14逆转录法逆转录法：以信使：以信使RNARNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成氧核苷酸合成合成DNA
26、(DNA(基因基因)。第三十六页，讲稿共四十七页哦质粒质粒DNADNA分子分子限制酶处理限制酶处理一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNADNA连接酶连接酶重组重组DNADNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）同一种同一种(二二)目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合4.4.4.4.过程过程过程过程:第三十七页，讲稿共四十七页哦(三三)将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞转化转化 方法方法将目的基因导入将目的基因导入植物植物细胞细胞将目的基因导入将目的基因导入动物动物细胞细胞将目的基因导入将目的基因导入微生物细胞微生物细胞农杆菌转化法农杆菌
27、转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态细胞感受态细胞目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受受体细胞内维持体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达第三十八页，讲稿共四十七页哦(四四)目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定检查是否成功检查是否成功检查是否成功检查是否成功检测检测鉴定鉴定检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴
28、定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子杂交分子杂交分子杂交分子杂交抗原抗体杂交抗原抗体杂交第三十九页，讲稿共四十七页哦从苏云金芽苞杆菌中提取抗从苏云金芽苞杆菌中提取抗虫基因虫基因从土壤农杆菌中提取带有从土壤农杆菌中提取带有选择性标记的质粒选择性标记的质粒同一种限制酶同一种限制酶处理处理抗虫基因与质粒结合形成重抗虫基因与质粒结合形成重组质粒组质粒将重组质粒导入土壤农杆菌将重组质粒导入土壤农杆菌筛选筛选将土壤农杆菌与棉花细将土壤农杆菌与棉花细胞混合培养胞混合培养侵侵染染重组质粒将抗虫基因导入重组质粒将抗虫基因导入棉花细胞并整合到棉花的棉花细胞并整合到棉花的DNA
29、上上植物组织培养植物组织培养获得抗虫棉获得抗虫棉抗虫棉的培育流程图：抗虫棉的培育流程图：-P13积极思维积极思维第四十页，讲稿共四十七页哦第四十一页，讲稿共四十七页哦1）基因工程依据的遗传学原理是（）基因工程依据的遗传学原理是（）A基因突变基因突变 B基因重组基因重组 C染色体变异染色体变异 DDNA复制复制练习练习B第四十二页，讲稿共四十七页哦2）以下说法正确的是）以下说法正确的是 （）A、所所有有的的限限制制酶酶只只能能识识别别一一种种特特定定的的核核苷苷酸序列酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运运载载体体必必须须具具备备的的条条件件之之一一是是：
30、具具有有多多个限制酶切点，以便与外源基因连接个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来、基因控制的性状都能在后代表现出来C C练习练习第四十三页，讲稿共四十七页哦3）不属于质粒被选为基因运载体的理由是）不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制、能复制 （）B、有多个限制酶切点、有多个限制酶切点 C、具有标记基因、具有标记基因 D、它是环状、它是环状DNAD D练习练习第四十四页，讲稿共四十七页哦4）有关基因工程的叙述中，错误的是（）有关基因工程的叙述中，错误的是（）A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶可用
31、于目的基因的获取限制性内切酶可用于目的基因的获取 C、目的基因须由运载体导入受体细胞、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶人工合成目的基因不用限制性内切酶A A练习练习第四十五页，讲稿共四十七页哦5）有关基因工程的叙述正确的是）有关基因工程的叙述正确的是 （）A、限制酶只在获得目的基因时才用、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体、质粒都可作为运载体 D、只只要要把把目目的的基基因因导导入入受受体体细细胞胞就就会会产产生生相相应的蛋白质应的蛋白质D D练习练习第四十六页，讲稿共四十七页哦6）基基因因工工程程是是在在DNA分分子子水水平平上上进进行行设设计计施施工工的的。在在基基因因操操作作的的基基本本步步骤骤中中，不不进进行行碱碱基基互补配对的步骤是互补配对的步骤是 （）A、人工合成目的基因、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达C C练习练习第四十七页，讲稿共四十七页哦