实验动物标准化.ppt

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1、实验动物标准化现在学习的是第1页，共102页实验动物标准化的研究内容一、实验动物微生物学的控制一、实验动物微生物学的控制二、实验动物遗传质量的控制二、实验动物遗传质量的控制三、实验动物环境的控制三、实验动物环境的控制四、实验动物营养的控制四、实验动物营养的控制现在学习的是第2页，共102页实验动物标准化的意义生物学实验研究的四个基本条件 Animal，Equipment，Information，Reagent，简称AEIR四要素 这4个要素在整个实验研究中具有同等重要的地位，不能忽略或偏废。事实上，实验实验动物质量往往成为制约性要素动物质量往往成为制约性要素，影响整个实验的质量和水平 使用标准

2、的实验动物并在标准的环境条件下进行实验是保证医学研究质量的重要条件现在学习的是第3页，共102页实验、工作人员的健康和生命的保证常见的人畜共患病：流行性出血热、狂犬病、猴B病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、利什曼原虫等现在学习的是第4页，共102页动物生产和繁殖的保证动物一旦染上传染病，则种群难以净化，一些烈性传染病如鼠痘、兔病毒性出血症等可导致动物全军覆没，造成巨大的经济损失。现在学习的是第5页，共102页实验结果准确性、规律性、重复性的保证隐性感染，不表现临床症状。但改变动物生物学参数，影响实验准确性、规律性、重复性。实验刺激下感染显性化，得病、死亡，实验终止。现在学习的是第6页，共102页

3、按工作程序实验动物标准化划分为：实验动物生产条件标准化实验动物质量标准化动物实验条件标准化 对应三种合格证现在学习的是第7页，共102页一、实验动物质量标准化一、实验动物质量标准化微生物质量标准化遗传学质量标准化 现在学习的是第8页，共102页 按微生物学控制标准，实验动物在我国分为四级 一级动物 普通动物 二级动物 清洁动物 三级动物 SPF动物 四级动物 无菌动物现在学习的是第9页，共102页实验动物遗传学质量的影响 动物实验结果的重复性取决于动物个体差异，而动物个体特征主要受遗传基因控制，故实验动物的遗传学质量对动物实验结果有重要影响。不同基因型动物，生物学特性有明显差异，对实验刺激有不

4、同反应。现在学习的是第10页，共102页vBALB/c对放射线比其他品系更为敏感。vC57BL/6肿瘤发生率低，A系高。vDMBA可致BALB/c产生白血病，对A系却产生皮肤溃疡vBALB/c和C3H小鼠对鼠伤寒沙门氏菌的敏感性存在显著差异vSHR为自发性高血压大鼠，心血管疾病发生率高 必须推广应用标准品系动物，防止各种品必须推广应用标准品系动物，防止各种品系动物发生遗传污染、基因型及生物学特性的系动物发生遗传污染、基因型及生物学特性的改变，保证动物的遗传质量改变，保证动物的遗传质量现在学习的是第11页，共102页1、实验动物的遗传背景是影响实验动物实验结果发生变异的主要因素2、同基因型动物：

5、品系内所有个体的遗传背景相同或相近。不同基因型动物：品系内所有个体的遗传背景具有较大的差异。3、实验动物遗传学质量控制是实验动物标准化的主要内容之一。从遗传学角度讲，实验动物是具有明确遗传背景并受严格遗传控制的遗传限定动物。根据其遗传特点不同，实验动物分为近交系、封闭群（远交群）和杂交一代动物。实验动物遗传控制基本概念现在学习的是第12页，共102页 4、在动物分类学中，“种种“（spcies)是动物分类的基本单位。而实验动物学品种(stock)、品系(strain)的概念超出了一般动物学分类的概念，把同一种动物中具有不同遗传特性的动物分成不同的品种、品系，它们各自有其品种品系的特征。品种品种

6、、品系品系才是实验动物分类的基本单位。现在学习的是第13页，共102页遗传限定的动物相同基因类型不同基因类型近交系封闭群同源突变近交系同源导入近交系分离近交系重组近交系杂交F1代远交种突变种品系品系品种品种现在学习的是第14页，共102页现在学习的是第15页，共102页5、实验动物品种品系应具备的四个基本条件：A:相似的外貌特征；B：独特的生物学特性；C：稳定的遗传性能；D：具有共同的遗传来源和一定的遗传结构。现在学习的是第16页，共102页交配制度是动物不同代之间以某种特定的交配方式相互发生联系，其预期的基因传递结果是通过遗传学和概率的知识来分析表达。交配型是不同基因型之间通过动物交配实现交

7、流的方式。分为：近交（Incross）、杂交（Cross）、间交（Intercross）和回交（Backcross）交配制度和交配型现在学习的是第17页，共102页近交（Inbreeding）：即近亲繁殖，是指血缘关系极为相近的个体之间或遗传组成极相似的个体之间进行的交配繁殖。杂交（crossing）：通过不同的基因型的个体之间的交配而取得某些双亲基因重新组合的个体的方法。回交（back cross）：子一代和两个亲本的任一个进行杂交的方法叫做回交。在育种工作中，常利用回交的方法来加强杂种个体中某一亲本的性状表现。间交：自交或称互交（Intercrosses）：亲代为两个杂合子交交配。现在学习

8、的是第18页，共102页概念：近交系动物也叫纯系动物，是相同基因类型动物中最主要的一种。它是经连续20代以上的全同胞兄妹或亲子交配培育而成，且品系内所有个体都可追溯到起源于20代或以后的一对共同祖先的遗传群体。从遗传上来说，近交系的培育是从群体多态杂合的遗传组成中，选择保留一小部分，淘汰其它大部分的一个过程。经过20代近交后，近交系的个体有98.6%的遗传位点是纯合的，因此个体间的遗传差异很小。然而，不同近交系之间由于近交而固定的基因不同，遗传差异很大。近交系 Inbred strain现在学习的是第19页，共102页 通常禽类和兔类等通常禽类和兔类等实验动物的血缘系数达到实验动物的血缘系数达

9、到8080以上时以上时(相当于亲兄妹交配相当于亲兄妹交配4 4代代)，即可称为近交系即可称为近交系现在学习的是第20页，共102页现在学习的是第21页，共102页近交系数（Coefficient of Inbreeding,F):即动物个体的基因组成中，纯合子基因的出现率。又可称为后代个体基因位点固定同一祖先基因的比率。血缘系数（Coefficient of Relationship，R）：是两个个体间的遗传学相似性。现在学习的是第22页，共102页优点：纯合性；同源性；均一性；长期的遗传稳定性；可分辨性；个体性；分布的广泛性；背景资料和数据较为完整缺点：近交系的主要缺点在于近交形成的近交衰退

10、现象，表现在其生活力和生育力降低，对外界环境的变化较为敏感，抗病和适应环境等能力减退。这就增加了近交系动物饲养繁殖的难度。现在学习的是第23页，共102页近交系动物的命名一般以大写英文字母命名，亦可以用大写英文字母加阿拉伯数字一般以大写英文字母命名，亦可以用大写英文字母加阿拉伯数字命名，符号应尽量简短。如命名，符号应尽量简短。如A A系，系，TA1TA1系等。系等。例如：C3h C3H CC3h C3H C3 3H HBalb/c,129,A,C57BL/6Balb/c,129,A,C57BL/6现在学习的是第24页，共102页近交系动物的特性1、基因纯合性 在一个近交系内所有动物的所有基因位

11、点都是纯合子、个体之间、祖代个体与后代个体之间都是纯合子。这样的个体与品系内任何一个动物交配所产生的后代，也应是纯合子。因此，同一近交系动物的基因是一致的，没有暗藏的隐性基因。2、同基因性 同一个近交品系中所有个体在遗传上是同源的，个体间极为相似，具有基本相同的遗传组成和遗传特点，也就是基因型相同。因此，同品系个体间可进行组织或肿瘤移植，也可用一只动物检测该品系的基因型。现在学习的是第25页，共102页3、表现型的均一性 同一近交系动物，在相同环境因素的作用下，由于同基因性，其表现型是均一的，如血型、组织型、体重、毛色、可遗传疾病的发病率、对药物的反应、甚至行为的类型等。因此,使用较少量的近交

12、系动物可达到生物统计需要的精密度。4、长期的遗传稳定性 近交系动物的基因高度纯合，坚持近亲交配则增加其在特定部位纯合子，减少了遗传变异，使动物的基因型可长期处于稳定状态，导致近交系动物长期遗传稳定性。近交系动物的遗传变异仅发生在少量残留杂合基因，或基因的突变，而这种机率非常低。近交系动物的特性现在学习的是第26页，共102页5、个体性 每个品系在遗传上都是独特的，有些品系可能发生一些疾病，成为研究人类疾病理想的模型。品系间的差别显示在量上，而不是在质上，在研究上非常有用：可在众多的近交系中，筛选出对某些因子敏感，和不敏感的品系，以达到不同的研究目的。近交系动物的特性现在学习的是第27页，共10

13、2页6、分布广泛性 近交系动物个体具备品系的全能性，任何个体均可携带该品系全部基因库，引种仅需1-2对动物。不少近交系动物已分布在世界各地，意味着：不同地区，不同国家的科学家有可能重复或验证已取得的理论和数据。近交系动物的特性现在学习的是第28页，共102页7、背景资料和数据完整性 近交系动物在培育和保种过程中都有详细记录，一些常用品系具有相当数量的背景资料；有大量文献记载了各种品系的生物学特性。这些有关品系的特征、寿命和自发性疾病等资料，对今后的研究工作的设计和动物实验结果的解释提供便利条件。8、可分辨性 每个近交系都有自己独特的生化标志基因。研究者在掌握了遗传质量监测方法后，通过建立品系的

14、遗传概貌，和定期的遗传检测，可以分辨混杂在一起的两个，或两以上外貌近似的品系动物。近交系动物的特性现在学习的是第29页，共102页 固定基因时，有害的隐性基因也会纯合，固定基因时，有害的隐性基因也会纯合，出现不利的性状出现不利的性状而造成育而造成育种失败；种失败；近交还可能导致多基因之间丧失平衡，从而使高度纯化的动物近交还可能导致多基因之间丧失平衡，从而使高度纯化的动物对对不良环境的调节适应能力降低；不良环境的调节适应能力降低；近交使动物失去为保持足够生物适合度所必需的最低水平的近交使动物失去为保持足够生物适合度所必需的最低水平的基因杂合性，从而基因杂合性，从而影响动物生长率，寿命，对疾病的感

15、受性，生活力，体力及繁殖能力。近亲交配的弊端现在学习的是第30页，共102页鉴于近交系动物具备上述特性，其应用首推遗传学研究，可消除杂合遗传背景的影响，以较少的动物取得可消除杂合遗传背景的影响，以较少的动物取得较一致的动物实验结果。较一致的动物实验结果。近交系动物在肿瘤研究工作中应用最广泛，被培养的品系也最多；对肿瘤的病因学、发病学、实验治疗和新抗癌药物的研究等都作出重大贡献。近交系的应用现在学习的是第31页，共102页在某些涉及组织细胞或肿瘤移植的实验中，个体间组织相容性一致与否，是实验成败的关键。因此，近交系动物成为不可缺少的实验动物。随着生物医学科学研究的发展，已培育成功各种人类疾病的随

16、着生物医学科学研究的发展，已培育成功各种人类疾病的动物模型，如：高血压大鼠、癫痫大鼠、糖尿病小鼠、白血动物模型，如：高血压大鼠、癫痫大鼠、糖尿病小鼠、白血病小鼠，白内障小鼠、先天性肌萎缩小鼠、免疫缺陷型小鼠病小鼠，白内障小鼠、先天性肌萎缩小鼠、免疫缺陷型小鼠等等。这些近交系动物家系清楚，取材方便，是进行基因连等等。这些近交系动物家系清楚，取材方便，是进行基因连锁分析，比较理想的实验材料。锁分析，比较理想的实验材料。近交系的应用现在学习的是第32页，共102页概念：Closed colony or outbred stock 以非近交交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从其外部引入新个体

17、的条件下，至少连续繁殖4代以上，称为一个封闭群，或叫远交群。封闭群（远交群）现在学习的是第33页，共102页封闭群可分为起源于近交系,但并不进行全同胞交配的维持群;和起源于非近交系,亦不进行全同胞交配的维持群两类。群体世代间近交系数上升率必须低于1%。这类动物和近交系不同，在动物群体内的个体之间，具有某种程度的遗传学差异。例如ddN小鼠，Wistar大鼠、我国各研究单位长期自行繁殖的KM小鼠、青紫兰兔、新西兰白兔、大耳白兔等均属此类。现在学习的是第34页，共102页1 1、基因库大，杂合率高、基因库大，杂合率高 封闭群是一种长期与外界隔离，雌雄个体间能够随即交配的动物群，其遗传组成比较接近自然

18、状态下的动物群体结构，具有类似于人类群体遗传异质性的遗传组成。其基因的杂合率较高，个体间的基因型不一致，因此，群体基因库较近交系大。封闭群动物的遗传学特性现在学习的是第35页，共102页2 2、群体基因频率基本保持稳定、群体基因频率基本保持稳定 封闭群动物不从其外部引入新基因，又坚持随机交配从而使群体在一定范围内保持相对稳定的遗传特征。群体基因频率可达到哈迪温伯格平衡，封闭群动物的遗传学特性现在学习的是第36页，共102页1908年提出，数学家哈迪（G.H.Hardy）和医生温伯格(W.Weinberg)分别提出关于基因频率稳定性的见解。在一个有性生殖的自然种群中，在符合以下5个条件的情况下，

19、各等各等位基因的频率和等位基因的基因型频率在一位基因的频率和等位基因的基因型频率在一代一代的遗传中是稳定不变的代一代的遗传中是稳定不变的：种群大；种群中个体间的交配是随机的；没有突变发生；没有新基因加入；没有自然选择。哈迪温伯格平衡现在学习的是第37页，共102页3、封闭群内的个体差异主要取决于其祖代起源 若封闭群祖代起源于同一个近交系动物，其遗传差异较小。而起源于非近交系的一般封闭群动物，其个体差异较大，且可携带隐性的有害基因，或致死基因，易于诱发突变。封闭群动物的遗传学特性现在学习的是第38页，共102页鉴于封闭群动物具备上述特性，在遗传学研究中，常作为选择实验的基础群体，供作某性状遗传力

20、的研究。封闭群动物的应用现在学习的是第39页，共102页封闭群动物的遗传组成具有很高的杂合性封闭群动物的遗传组成具有很高的杂合性其繁殖力和生活力较强其繁殖力和生活力较强其繁殖力和生活力较强其繁殖力和生活力较强表现为平均胎产仔数多，胎间隔短，仔鼠离乳率高，生表现为平均胎产仔数多，胎间隔短，仔鼠离乳率高，生长快，成熟早，抗病力强，寿命长长快，成熟早，抗病力强，寿命长；生产成本低，可大量供应生产成本低，可大量供应生产成本低，可大量供应生产成本低，可大量供应广泛用于各种预试验、学生教学和常规的药物筛选和广泛用于各种预试验、学生教学和常规的药物筛选和广泛用于各种预试验、学生教学和常规的药物筛选和广泛用于

21、各种预试验、学生教学和常规的药物筛选和毒性试验中。毒性试验中。毒性试验中。毒性试验中。现在学习的是第40页，共102页回交：一种实验动物与另一种不同遗传特性的近交系交配获得N1，N1带有1/2近交系的基因组成；N1再与该近交系交配得到N2，N2带有3/4近交系的基因组成。重组近交系和重组同类系 Recombinant inbred strain Recombinant congenic strain现在学习的是第41页，共102页如果就这样与近交系进行n次回交，按1-（1/2）n 的概率替换近交系的基因；经7-8次回交，将能得到大体上同近交系具有相同基因组成的新品系。重组近交系和重组同类系 R

22、ecombinant inbred strain Recombinant congenic strain现在学习的是第42页，共102页杂交就是将不同的群体或品系动物进行交配。假设近交系假设近交系A A的基因型为的基因型为A1/A1A1/A1，B1/B1B1/B1，C1/C1C1/C1；近交系；近交系B B的基因的基因型为型为A2/A2A2/A2，B2/B2B2/B2，C2/C2 C2/C2 。两种品系内的血缘系数两种品系内的血缘系数R=1R=1；而两种品系无共同的祖先；而两种品系无共同的祖先R=0R=0。重组近交系和重组同类系 Recombinant inbred strain Recomb

23、inant congenic strain现在学习的是第43页，共102页把这两种品系进行杂交，产生把这两种品系进行杂交，产生F1F1的基因型是均一的的基因型是均一的A1/A2A1/A2，B1/B2B1/B2，C1/C2C1/C2；个体各基因位点均是杂合型，又保持了个体遗；个体各基因位点均是杂合型，又保持了个体遗传均一性，即传均一性，即F1F1的各个体间血缘系数的各个体间血缘系数R=1R=1；还可能出现新的遗传特；还可能出现新的遗传特性。性。如近交系如近交系NZBNZB和和NZWNZW的的F1F1中发现了自身免疫性疾病鼠。中发现了自身免疫性疾病鼠。Recombinant inbred stra

24、in Recombinant congenic strain重组近交系和重组同类系 Recombinant inbred strain Recombinant congenic strain现在学习的是第44页，共102页重组近交系重组近交系：由两个近交系杂交后，经连续由两个近交系杂交后，经连续2020代以上兄妹交配育成代以上兄妹交配育成的近交系。的近交系。重组同类系：由两个近交系杂交后，子代与两个亲代中的一个近重组同类系：由两个近交系杂交后，子代与两个亲代中的一个近交系进行数次回交（通常回交交系进行数次回交（通常回交2 2次），再经无特殊基因选择的近亲次），再经无特殊基因选择的近亲交配而育成

25、的近交系。交配而育成的近交系。重组近交系和重组同类系 Recombinant inbred strain Recombinant congenic strain现在学习的是第45页，共102页重组近交系命名重组近交系命名:由两个亲代近交系的缩写名称中间加大写英文字母由两个亲代近交系的缩写名称中间加大写英文字母X X命名。由相命名。由相同双亲交配育成的一组近交系用阿拉伯数字予以区分。同双亲交配育成的一组近交系用阿拉伯数字予以区分。如：由如：由BALB/cBALB/c与与C57BL/6C57BL/6杂交育成的一组近交系分别命名为杂交育成的一组近交系分别命名为CXB1CXB1、CXB2CXB2。重组

26、近交系和重组同类系 Recombinant inbred strain Recombinant congenic strain现在学习的是第46页，共102页重组同类系命名：重组同类系命名：由两个亲代近交系的缩写名称中间加小写英文字母由两个亲代近交系的缩写名称中间加小写英文字母c c命名，其中命名，其中用作回交的亲代近交系（称受体近交系）在前，供体近交系在用作回交的亲代近交系（称受体近交系）在前，供体近交系在后。由相同双亲育成的一组同类系用阿拉伯数字予以区分。后。由相同双亲育成的一组同类系用阿拉伯数字予以区分。如：由如：由BALB/cBALB/c为受体近交系，以为受体近交系，以STSSTS为供

27、体近交系（为供体近交系（S S），经），经2 2代回代回交育成的一组重组同类系分别命名为交育成的一组重组同类系分别命名为CcS1CcS1、CcS2CcS2。重组近交系和重组同类系 Recombinant inbred strain Recombinant congenic strain现在学习的是第47页，共102页应用：应用：重组近交系是实验动物近十年来遗传学的最重要发展成果之一。重组近交系是实验动物近十年来遗传学的最重要发展成果之一。重组近交系是实验动物近十年来遗传学的最重要发展成果之一。重组近交系是实验动物近十年来遗传学的最重要发展成果之一。以两个无关的近交系进行杂交，产生以两个无关的近

28、交系进行杂交，产生以两个无关的近交系进行杂交，产生以两个无关的近交系进行杂交，产生F1F1F1F1后，再兄妹交配连续后，再兄妹交配连续后，再兄妹交配连续后，再兄妹交配连续20202020代以上育成一组代以上育成一组代以上育成一组代以上育成一组近交系。该组近交系既有其双亲品系的特性，又有重组后每个重组近交系的近交系。该组近交系既有其双亲品系的特性，又有重组后每个重组近交系的近交系。该组近交系既有其双亲品系的特性，又有重组后每个重组近交系的近交系。该组近交系既有其双亲品系的特性，又有重组后每个重组近交系的特性。特性。特性。特性。重组近交系已广泛应用于新的多态性基因位点和新的组织相容性位点的鉴定、多

29、重组近交系已广泛应用于新的多态性基因位点和新的组织相容性位点的鉴定、多态性位点的多效性及其连锁性的研究；态性位点的多效性及其连锁性的研究；还用于动物寿命、自发性和诱发性疾病的研究；还用于动物寿命、自发性和诱发性疾病的研究；以及生理学、药理学、形态学和行为学等方面的研究以及生理学、药理学、形态学和行为学等方面的研究以及生理学、药理学、形态学和行为学等方面的研究以及生理学、药理学、形态学和行为学等方面的研究重组近交系和重组同类系 Recombinant inbred strain Recombinant congenic strain现在学习的是第48页，共102页随着生物医学科研的发展及其需要，

30、目前世界上已培育成功数百种近交品系和封闭群动物，加上不同的亚系和新建的突变群，其种（品系）数量愈千。在各科研或教学单位的实验动物饲育繁殖部门，一般都保持几个或几十近交系。而在多个品系动物生产繁殖过程中，无法确保绝对不发生计划外杂交。实验动物遗传学质量控制 现在学习的是第49页，共102页有必要进行实验动物有必要进行实验动物的遗传质量控制的遗传质量控制 科研人员都希望证科研人员都希望证明各自所得到的品明各自所得到的品系动物的遗传背景系动物的遗传背景是符合标准的；是符合标准的；生产繁殖部门希生产繁殖部门希望确证：所提供望确证：所提供的实验动物符合的实验动物符合遗传控制的质量遗传控制的质量。实验动物

31、遗传学质量控制 现在学习的是第50页，共102页国际实验动物理事会提出了实验动物质量检测国际实验动物理事会提出了实验动物质量检测国际实验动物理事会提出了实验动物质量检测国际实验动物理事会提出了实验动物质量检测必须符合必须符合必须符合必须符合“4E4E原则原则原则原则”。准确准确准确准确 Exact Exact Exact Exact简便简便简便简便EasyEasyEasyEasy 有效有效EfficientEfficient 经济经济EconomicEconomicEconomicEconomic实验动物遗传学质量控制 现在学习的是第51页，共102页目前常用的检测方法目前常用的检测方法 生化

32、标志基因位点检测 皮肤移植 下颌骨形态学分析 毛色基 因交配测试等实验动物遗传学质量控制 现在学习的是第52页，共102页实验动物的遗传质量控制的意义实验动物的遗传质量控制的意义 每个品系（或种群）的遗传概貌；定期进行常规质量检测，证明被检动物质量是否符合遗传概貌；签发品系（种群）的合格证书。实验动物遗传学质量控制 现在学习的是第53页，共102页近交系遗传概貌是指一套生化标志基因位点,根据这些位点可确切无误地判定品系,并将其同其它近交品系,甚至可能只有1-2个位点不同的亚系区分开来。从理论上讲，遗传概貌应至少由每条染色体的从理论上讲，遗传概貌应至少由每条染色体的3 3个位点组成：个位点组成：

33、每条染色体着丝点相应的近端和远端各每条染色体着丝点相应的近端和远端各1 1个位点和中部个位点和中部1 1个位点。个位点。一旦确定了遗传概貌后，检测特定的染色体就能够完成近交系遗传质一旦确定了遗传概貌后，检测特定的染色体就能够完成近交系遗传质量的判定。量的判定。遗传概貌的确定现在学习的是第54页，共102页封闭群动物遗传概貌内容 繁殖数据 整体分析胎间隔 整体脂肪含量 成活新生数 整体干物质含量离乳仔数 血液学数据幼仔体重（2周龄）血红细胞计数淘汰种鼠特点 血白细胞计数形态测定数据 血红蛋白含量体长 血细胞比容体重 平均细胞容积11个下颌骨测量数据 尺骨长 现在学习的是第55页，共102页 在实

34、验动物国家标准哺乳类实验动物的遗传质量控制（GB14923-2001）中规定：对基础群，凡在子代留有种鼠的亲本动物都应进行检测；对生产群动物每年至少进行一次遗传质量检测，每次应采样6只。遗传质量检测方案的设计现在学习的是第56页，共102页生化标志基因位点测试法是一种得到广泛应用的灵敏的遗传质量检测方法，它能证实近交系和确定亚系间的遗传关系，具有较高的应用价值。该方法必须严格选择每一种显示同功酶的缓冲液，电泳的温度、时间、电压和电流的最佳值。使用这种方法需要一定的技术和设备。生化标志位点测试现在学习的是第57页，共102页实验证明动物具有接受或排斥所植皮肤的能力。每个近交系的全部个体在遗传上高

35、度纯合，所以，同品系的个体间能互相接受皮肤移植；而不同品系的个体间植皮就会互相排斥。皮肤移植也是的常用的遗传质量检测方法，在国家推荐标准（GB/T14927.2-2001）实验动物近交系小鼠大鼠皮肤移植法中，对该方法的基本操作步骤有详细的介绍和规定。皮肤移植现在学习的是第58页，共102页小鼠和大鼠的检测中普遍采用的是快速、有效的尾部皮肤移植法。植皮后至少观察100天，只有在100天以上植皮双方均不发生排斥，才能证实待测小鼠或大鼠的遗传纯合性。在对已知品系检测时，若急性排斥占手术例数30%，须重新考虑采样，以确认是技术性还是其他原因造成的结果。皮肤移植现在学习的是第59页，共102页供供供供

36、体体体体受受受受 体体体体移植结果移植结果移植结果移植结果近交系近交系近交系近交系同品系同性别同品系同性别同品系同性别同品系同性别接受接受接受接受近交系近交系近交系近交系不同品系不同品系不同品系不同品系排斥排斥排斥排斥近交系近交系近交系近交系本品系同其他品系杂交本品系同其他品系杂交本品系同其他品系杂交本品系同其他品系杂交F1F1F1F1接受接受接受接受近交系近交系近交系近交系同品系同品系同品系同品系接受接受接受接受近交系近交系近交系近交系同品系同品系同品系同品系排斥排斥排斥排斥杂交杂交杂交杂交F F F F1 1 1 1F1F1F1F1亲代品系亲代品系亲代品系亲代品系排斥排斥排斥排斥杂交杂交杂

37、交杂交F1F1F1F1杂交杂交杂交杂交F2F2F2F2接受接受接受接受杂交杂交杂交杂交F2F2F2F2杂交杂交杂交杂交F1F1F1F1排斥（少数排斥（少数排斥（少数排斥（少数接受）接受）接受）接受）实验动物皮肤移植规律实验动物皮肤移植规律现在学习的是第60页，共102页皮肤移植法优点：易掌握、高度灵敏、经济、不需昂贵设备、对植皮接果的排斥或接受容易判断。皮肤移植法不足：该方法费时：为检测非该方法费时：为检测非H-2H-2组织相容性基因的差异，需观察组织相容性基因的差异，需观察100100天后才能天后才能作出判断；饲养植皮动物需一定饲养空间；会出现一些系技术或其他非免疫因素植皮作出判断；饲养植皮

38、动物需一定饲养空间；会出现一些系技术或其他非免疫因素植皮实验失败。该方法不是鉴别新品系的理想方法。实验失败。该方法不是鉴别新品系的理想方法。皮肤移植现在学习的是第61页，共102页下颌骨形态是高度遗传的性状，由多态性位点确定。下颌骨的形态和大小在小鼠的近交系间存在明显差异，所以，下颌骨分析是一种合理的方法该方法是一种灵敏和有效的鉴别和检测亚系变异（源于遗传混杂和突变）的技术。正常环境因素及饲养管理对下颌骨形态几乎没有什么影响，50日龄后下颌骨基本上不再生长，其形态也不再发生变化。下颌骨形态学分析现在学习的是第62页，共102页检测前，制作测量用的标准直角坐标底板，在近交系核心群中随机取60日龄

39、以上的成年雄鼠，每次取样10只为1组，制备下颌骨标本后，在显微镜下，放大10倍测量在直角坐标底板上下颌骨11个形态特征参考点的距离下颌骨形态学分析现在学习的是第63页，共102页将所测量值的平均数作统计分析，利用判别函数确定下颌骨形态。如果测量值集中，则表明在被测小鼠间无显著的遗传差异。下颌骨形态分析是一种灵敏、经济、简便、可同时检验大量的遗传位点的遗传监测方法。若配以扫描机将下颌骨形态扫入电脑，经电脑测量其形态特征参考点的距离，并由电脑完成统计分析，既可减少人为误差，还可加快统计分析的速度。下颌骨形态学分析现在学习的是第64页，共102页小鼠毛色主要受A、B、C三个等位基因控制，它们分别在不

40、同的染色体上。cc基因是其他毛色基因的上位基因。白化小鼠cc等位基因是已知的，A，B是待测基因。毛色基因交配测试可把隐性的毛色基因显示出来。毛色基因交配测试现在学习的是第65页，共102页A-B-C：为野生色A-bbc：为桂皮色aaB-C：为黑色aabbC：为棕色毛色基因交配测试现在学习的是第66页，共102页根据遗传学原理，被测个体与已知复隐性基因个体交配，可以从F1的毛色判断待测小鼠基因型；如待测小鼠A、B位点是纯合的，则杂交F1的毛色只出现一种颜色。通常将60-70日龄待测小鼠雌鼠与已知毛色基因结构的DBA/2（aabbCC）雄鼠交配，根据杂交F1的毛色确定待测小鼠主要毛色基因型，鉴定是

41、否纯合。毛色基因交配测试现在学习的是第67页，共102页实验动物生产与实验条件的标准化是对干实验动物生产与实验条件的标准化是对干扰动物实验的周围环境因素进行控制扰动物实验的周围环境因素进行控制二、实验动物生产条件和动物实验条件二、实验动物生产条件和动物实验条件的标准化的标准化现在学习的是第68页，共102页环境因素包括：气候因素（温度、湿度、气流、风速）理化因素（换气、粉尘、臭味、噪音、照明）居住条件（笼具、垫料、房舍）营养因素（饲料、水）同种和异种动物之间的关系现在学习的是第69页，共102页实验动物营养控制饲料中蛋白质、脂肪、钙、磷、氨基酸、维生素等各类营养物质含量应符合各种实验动物品种品

42、系的生理需要，含有的有害物质及污染物质不能超过最大安全限量标准。清洁级及清洁以上级动物的饲料应作灭菌处理。现在学习的是第70页，共102页现在学习的是第71页，共102页现在学习的是第72页，共102页按微生物控制程度分类，实验动物的环境可分为开放系统屏障系统隔离系统开放环境：普通动物屏障环境：清洁动物，SPF动物 隔离环境：无菌动物现在学习的是第73页，共102页 屏障系统 隔离系统 开放系统现在学习的是第74页，共102页屏障环境特点：l恒温（2026）恒湿（4070）l足够的换气次数（1020次/小时）保证有害气体浓度降低到最小l正向梯度压差（2050)使屏障外污染源不能进入l万级空气洁

43、净度保证空气洁净l适合的动物照度和对时明暗交替（12h/12h)符合动物生活习性。隔离环境特点：百级空气洁净度 正向梯度压差（100150)换气次数（2050次/小时）人员不与动物直接接触现在学习的是第75页，共102页屏屏 障障 系系 统统现在学习的是第76页，共102页现在学习的是第77页，共102页现在学习的是第78页，共102页实验动物垫料实验动物垫料现在学习的是第79页，共102页屏屏 障障 系系 统统 IVCIndividually Ventilated Cages现在学习的是第80页，共102页IVC的特点IVC(Individually Ventilated Cages)是独立

44、通风笼盒的简称.它的特点是具有一定的密闭性,同时让经HEPA过滤器的洁净空气流入盒内,使盒内保持正压,减少了可能的感染来源,适合于饲养SPF级动物,以及一些免疫缺陷动物现在学习的是第81页，共102页屏屏 障障 系系 统统层流架层流架现在学习的是第82页，共102页隔隔 离离 系系 统统现在学习的是第83页，共102页隔离器的基本构造示意图隔离器的基本构造示意图隔离器的基本构造示意图隔离器的基本构造示意图现在学习的是第84页，共102页实验动物设施的监控实验动物设施的监控监控内容监控内容 温度温度 湿度湿度 压差压差 人员进出情况人员进出情况现在学习的是第85页，共102页环境级别和动物级别的

45、对应关系 动物级别 环境级别(洁净度，落下菌)普通动物 开放系统(_,30)清洁动物 屏障系统(万级，3)SPF动物 屏障系统(万级，3)无菌动物或悉生动物 隔离系统(百级，0)现在学习的是第86页，共102页现在学习的是第87页，共102页屏障系统管理屏障系统管理一、人流路线 现在学习的是第88页，共102页二、物流路线 现在学习的是第89页，共102页三、消毒与灭菌高压锅：121，0.11Mpa，30分钟 132，0.21Mpa，15分钟传递窗：紫外线，表面消毒，30分钟渡槽：0.1%新洁尔灭浸泡4小时Co60照射2%过氧乙酸喷雾高锰酸钾、福尔马林熏蒸现在学习的是第90页，共102页四、废

46、弃动物处理深埋或焚烧现在学习的是第91页，共102页引进动物进入清洁级屏障动物房从外面引进的动物必须有与其适用范围相符的实验动物生产许可证,同时必须附带动物的品系、性别、年龄等信息经实验动物中心工作人员审查后方可准备进入动物房现在学习的是第92页，共102页动物运输时必须有合格的包装箱,清洁级及以上动物包装箱必须以高效滤膜封闭窗口，包装箱以胶带封口，封口破损或滤膜破损者不得传入屏障系统。现在学习的是第93页，共102页将检查合格的动物包装箱在外准备间以70酒精棉球或5%碘伏仔细擦拭表面,将包装箱放入灭菌通道进行喷雾消毒或紫外线消毒 现在学习的是第94页，共102页在内准备间打开灭菌通道的门在门

47、口拆开包装箱轻轻提起鼠尾根部，放入准备好的盒子中，盖好盖子动物包装箱仍退回灭菌通道将刚装了动物的笼盒放在架子上并填写、悬挂卡片，加饲料，饮水从外准备间打开灭菌通道，取出动物包装箱。现在学习的是第95页，共102页注意:新引进动物应在单独房间，单独笼架饲养一段时间,待观察健康无病后再移入其它房间不得向屏障动物房内传入不符合相应的实验动物生产许可证的动物!现在学习的是第96页，共102页实验用品和器具进出清洁级屏障动物房用70%酒精或5%碘伏仔细擦拭消毒物品表面紫外灯照射15min 或直接喷雾消毒手术器械可经高压消毒或经消毒液中浸泡后在紫外灯下照射15min传入 小型仪器经灭菌通道喷雾消毒后传入现

48、在学习的是第97页，共102页IVC的使用要点对IVC中的动物进行的一切工作均在动物超净工作台中进行使用超净工作台前30分钟用70%酒精喷雾工作站内表面，同时放入经表面消毒的各种灭菌物料和实验用品，并打开紫外灯和风机 用70%酒精喷雾工作车、双手手套和IVC的外表面，将笼盒移入工作台后进行换窝，喂饲，喂水，实验等工作现在学习的是第98页，共102页物品进出SPF动物实验室所有物品在经过进入屏障系统时的一次消毒后,在进入超净工作台时必须经过酒精喷雾或紫外线照射15min再次消毒。实验用品和器具在实验结束后可经内准备间从传递窗或灭菌通道传出，也可经缓冲间出屏障系统现在学习的是第99页，共102页动物实验废弃物品的处理垫料等废弃物与动物笼盒一起从缓冲间出系统注射器等尖锐物品套上套子后再放入垃圾桶,以防刺伤工作人员屏障内无排水系统,液体废弃物请传出系统后再处理废弃的动物包装盒从灭菌通道出系统口罩、手套、帽子、鞋套为一次性物品,用过后就应丢弃,灭菌工作服可放在一更,中心工作人员会对其进行处理现在学习的是第100页，共102页现在学习的是第101页，共102页 实实验验动动物物管管理理机机构构 江苏省科学技术厅江苏省动物管理委员会院动物管理委员会南京大学医学院院实验动物中心研究课题组课题负责人实验技术人员实验动物现在学习的是第102页，共102页