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1、分光光度计第一页，讲稿共四十四页哦Basic UV-Vis Theory and Applications分光光度计的原理与应用第二页，讲稿共四十四页哦一、基本原理一、基本原理o利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱，利用此吸收光谱对物质进行定性定量分析和物质结构谱，利用此吸收光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法，称为分析的方法，称为分光光度法或分光光度法或分光光度技术，使用的分光光度技术，使用的仪器称为分光光度计。仪器称为分光光度计。o分光光度计灵敏度高，测定速度快，应用范围广，其分光光度计灵敏度高，测定速度快，应用范
2、围广，其中的紫外中的紫外/可见分光光度技术更是生物化学研究工作中必可见分光光度技术更是生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一。因此我们重点讨论紫外不可少的基本手段之一。因此我们重点讨论紫外/可见分可见分光光度法的基本原理、仪器构造及其在生化领域中的应用光光度法的基本原理、仪器构造及其在生化领域中的应用等。等。第三页，讲稿共四十四页哦电磁辐射的波长第四页，讲稿共四十四页哦电磁波波长的范围oRegion Wavelength(nm)oFar ultraviolet 10-200oNear ultraviolet 200-380oVisible 380-780oNear infrared 780-
3、3000oMiddle infrared 3000-30,000oFar infrared 3104-3105oMicrowave 3105-1109第五页，讲稿共四十四页哦Relationship between light absorption and color第六页，讲稿共四十四页哦电子跃迁类型与紫外吸收波长(nm)关系o电子跃迁类型 例子 紫外吸收波长范围o*CH 100150 nm o*(非共轭)CO 200 nm o*(共轭)CC 200300 nm on*CO 300 nm第七页，讲稿共四十四页哦Examples of transitions and resulting max
4、第八页，讲稿共四十四页哦o*跃迁：此类跃迁所需能量较小，吸跃迁：此类跃迁所需能量较小，吸收波长在紫外区的收波长在紫外区的200300 nm，不，不饱和烃、共轭烯烃及芳香烃均可发生这饱和烃、共轭烯烃及芳香烃均可发生这类跃迁，氨基酸、蛋白质与核酸均含有类跃迁，氨基酸、蛋白质与核酸均含有大量共轭双键，因而大量共轭双键，因而200300 nm的的紫外吸收测定，在生化实验技术中有极广紫外吸收测定，在生化实验技术中有极广泛的用途。泛的用途。第九页，讲稿共四十四页哦Commonly used solvents and their cut-off wavelengthsooSolvent Solvent 溶剂
5、溶剂溶剂溶剂Cut-off(nm)Cut-off(nm)ooIso-octane Iso-octane 辛烷辛烷辛烷辛烷202202ooEthyl alcohol Ethyl alcohol 乙醇乙醇乙醇乙醇205205ooCyclohexane Cyclohexane 环己烷环己烷环己烷环己烷200200ooAcetone Acetone 丙酮丙酮丙酮丙酮325325ooTetrachloroethylene Tetrachloroethylene 四氯乙烯四氯乙烯四氯乙烯四氯乙烯 290290ooBenzene Benzene 苯苯苯苯280280ooCarbon tetrachlorid
6、e Carbon tetrachloride 四氯化碳四氯化碳四氯化碳四氯化碳 265265ooChloroform Chloroform 氯仿氯仿氯仿氯仿245245ooEthyl ether Ethyl ether 乙醚乙醚乙醚乙醚220220ooIsopropyl alcohol Isopropyl alcohol 异丙醇异丙醇异丙醇异丙醇 210210ooMethyl alcohol Methyl alcohol 甲醇甲醇甲醇甲醇 210210第十页，讲稿共四十四页哦不同溶剂对酚紫外检测的影响不同溶剂对酚紫外检测的影响第十一页，讲稿共四十四页哦o若逐渐改变照射某物质的入射光的波长，并若
7、逐渐改变照射某物质的入射光的波长，并测定物质对各种波长光的吸收程度（吸光度测定物质对各种波长光的吸收程度（吸光度“A”或光密度或光密度“O.D”）或透射程度（透光）或透射程度（透光度度“T”），以波长），以波长作横坐标，作横坐标，“A”或或“T”为纵座标，画出连续的为纵座标，画出连续的“A”或或“T”曲线，即为该物质的吸收光谱曲线。曲线，即为该物质的吸收光谱曲线。第十二页，讲稿共四十四页哦吸收峰的命名o曲线上“A”处称最大吸收峰，它所对应的波长称最大吸收波长，以max表示。o曲线上“B”处有一谷，称最小吸收，它所对应的波长，所对应的波长，称最小吸收波长，以min 表示。o曲线上在最大吸收峰旁边
8、有一小峰“C”，称肩峰。o在吸收曲线的波长最短的一端，曲线上“D”处，吸收相当强，但不成峰形，此处称为末端吸收。第十三页，讲稿共四十四页哦omax是化合物中电子能级跃迁时吸收的特是化合物中电子能级跃迁时吸收的特征波长，不同物质有不同的最大吸收峰，所征波长，不同物质有不同的最大吸收峰，所以它对鉴定化合物极为重要。吸收光谱中，以它对鉴定化合物极为重要。吸收光谱中，max、min、肩峰以及整个吸收光谱的肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质，其特征随物质的结形状决定于物质的性质，其特征随物质的结构而异，所以是物质定性的依据。构而异，所以是物质定性的依据。o测定某物质的紫外吸收光谱的曲线，可与已测
9、定某物质的紫外吸收光谱的曲线，可与已知标准的紫外光谱图相对照，对照时须注意知标准的紫外光谱图相对照，对照时须注意测定的条件，如溶剂、浓度等。测定的条件，如溶剂、浓度等。第十四页，讲稿共四十四页哦o由于化合物紫外吸收峰较少，而且峰形都很宽，不象红外由于化合物紫外吸收峰较少，而且峰形都很宽，不象红外光谱有许多指纹峰，所以在用紫外吸收光谱进行化合物定光谱有许多指纹峰，所以在用紫外吸收光谱进行化合物定性鉴定时，应注意：化合物相同，其紫外光谱应完全相同；性鉴定时，应注意：化合物相同，其紫外光谱应完全相同；但是紫外光谱相同不一定化合物就相同，可能仅是存在某但是紫外光谱相同不一定化合物就相同，可能仅是存在某
10、些相同的发色团或基团，因此在鉴定时应与红外光谱相结些相同的发色团或基团，因此在鉴定时应与红外光谱相结合。合。o由于电子跃迁的同时也引起分子的转动和振动光谱，由于电子跃迁的同时也引起分子的转动和振动光谱，要把电子跃迁和分子振动、转动的跃迁完全分开是不要把电子跃迁和分子振动、转动的跃迁完全分开是不可能的，因此我们常见的紫外吸收光谱是由一个或几可能的，因此我们常见的紫外吸收光谱是由一个或几个宽的吸收谱带所组成。个宽的吸收谱带所组成。第十五页，讲稿共四十四页哦紫外光谱中常用的术语发色团、助色团、增色效应和减色效应。发色团、助色团、增色效应和减色效应。o发色团：凡是与饱和碳氢化合物连接能引起发色团：凡是
11、与饱和碳氢化合物连接能引起n*、*、n*等电子跃迁的基团称为发色团。例等电子跃迁的基团称为发色团。例如：如：CC、CO等。等。o助色团：助色团是一些具有非共价键的基团（如助色团：助色团是一些具有非共价键的基团（如OH、NH2、SH等）。这些基团在波长等）。这些基团在波长200 nm处没有处没有吸收，当它与发色团相连接时，使发色团的吸收带向长波吸收，当它与发色团相连接时，使发色团的吸收带向长波移动，称为移动，称为红移红移（或浅色效应），红移的同时吸收带的强（或浅色效应），红移的同时吸收带的强度增加。若助色团与发色团相连接，产生度增加。若助色团与发色团相连接，产生 n*跃迁，跃迁，使吸收波长向短波
12、移动，称为使吸收波长向短波移动，称为兰移兰移（或深色效应）。（或深色效应）。第十六页，讲稿共四十四页哦增色效应（增色效应（hyperchromic effect）o核酸变性或降解，使得核酸变性或降解，使得DNA或或RNA溶液对溶液对紫外光的吸收明显增加，即紫外光的吸收明显增加，即 值（吸光系数值（吸光系数或称消光系数）显著升高，此现象称为增色或称消光系数）显著升高，此现象称为增色效应。此效应是由于碱基之间电子相互作用效应。此效应是由于碱基之间电子相互作用的改变所致，通常在的改变所致，通常在260nm处测量。处测量。第十七页，讲稿共四十四页哦减色效应（减色效应（hypochromic effec
13、t）o在一定的条件下，变性的核酸又可以复性，在一定的条件下，变性的核酸又可以复性，此时此时值又明显减少，回复到原来的核酸分值又明显减少，回复到原来的核酸分子子值较低的水平，即此时值较低的水平，即此时DNA或或RNA溶溶液的紫外光吸收显著降低，此现象称为减色液的紫外光吸收显著降低，此现象称为减色效应，此效应也是由于碱基之间电子相互作效应，此效应也是由于碱基之间电子相互作用的变化所引起的，通常在用的变化所引起的，通常在260nm条件下条件下测量。测量。第十八页，讲稿共四十四页哦光吸收定律光吸收定律o朗伯朗伯比尔（比尔（Lambertbeer）光吸收定律：）光吸收定律：A-lgTb coA吸光度，又
14、称光密度吸光度，又称光密度“O.D”。oT透光度，透光度，TI/I。，。，I。为照射到吸收池上的为照射到吸收池上的光强，光强，I为透过吸收池的光强。为透过吸收池的光强。o摩尔吸光系数（摩尔吸光系数（Lmol-1cm-1）。）。ob样品光程（样品光程（cm），通常使用），通常使用1.0cm 的吸收池，的吸收池，b=1cm。oC样品浓度（样品浓度（mol/L）。）。吸光度吸光度A与物质的吸光系数与物质的吸光系数“”和物质的浓度和物质的浓度“C”成正比。成正比。第十九页，讲稿共四十四页哦检测计算溶液的摩尔浓度o例如：尿嘧啶核苷酸溶液用1cm石英吸收池测定 260nm处的吸光度为0.650，用同一吸收
15、池测定纯溶剂的吸光度为0.070，计算尿嘧啶溶液的摩尔浓度，已知其摩尔吸光系数=8.2103 M-1cm-1（Mmol/L)。o A bC A（溶剂加样品的吸光度）（溶剂的吸光度）o A0.6500.0700.580 b1cmo C=7.110-5 mol/L 第二十页，讲稿共四十四页哦二、分光光度计的组成和构造 1.组成：各种型号的紫外组成：各种型号的紫外/可见分光度计，不可见分光度计，不论是何种型式，基本上都由五部分组成：论是何种型式，基本上都由五部分组成：o光源：钨灯和氘光源：钨灯和氘(dao)灯灯o单色器（包括产生平行光和把光引向检测器单色器（包括产生平行光和把光引向检测器的光学系统）
16、；的光学系统）；o样品室；样品室；o接收检测放大系统；接收检测放大系统；o显示或记录器。显示或记录器。第二十一页，讲稿共四十四页哦 光源光源o理想光源的条件是：理想光源的条件是：能提供连续的辐射；能提供连续的辐射；光强度足够大；光强度足够大；在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；光谱范光谱范围宽；围宽；使用寿命长，价格低。使用寿命长，价格低。o用于可见光和近红外光区的光源是钨灯，现在最常用的是用于可见光和近红外光区的光源是钨灯，现在最常用的是卤钨灯（卤钨灯（Halogen lamp），即石英钨灯泡中充以卤素，以），即石英钨灯泡中充以卤素，以提高钨灯
17、的寿命。适用波长范围是提高钨灯的寿命。适用波长范围是3201100nm。由于能。由于能量输出的波动为电压波动的四次方倍，因此电源电压必须稳定。量输出的波动为电压波动的四次方倍，因此电源电压必须稳定。o用于紫外光区的是氘灯（用于紫外光区的是氘灯（Deuterium lamp），适用波长），适用波长范围是范围是195400nm，由于氘灯寿命有限，国产氘灯寿命，由于氘灯寿命有限，国产氘灯寿命仅五百小时左右，要注意节约灯时。仅五百小时左右，要注意节约灯时。第二十二页，讲稿共四十四页哦钨钨灯灯灯灯丝丝温温度度和和波波长长的的关关系系第二十三页，讲稿共四十四页哦 单色器单色器o单色器是分光光度计的心脏部分
18、，它的作用是把来自光源的单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部件混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部件和作用是：和作用是：入射狭缝入射狭缝限制杂散光进入。限制杂散光进入。色散元件色散元件即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光。即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光。准直镜准直镜把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。件的平等光聚焦于出射狭缝上。出射狭缝出射狭缝只让额定波只让额定波长的光射出单色器长的光射出单色器o转
19、动棱镜或光栅的波长盘，可以改变单色器出射光束的波长；转动棱镜或光栅的波长盘，可以改变单色器出射光束的波长；调节出入射狭缝隙的宽度，可以改变出射光束的带宽和单色调节出入射狭缝隙的宽度，可以改变出射光束的带宽和单色光的纯度。光的纯度。o光栅：光栅有透射光栅和反射光栅，实际应用的都是反射光栅，它又光栅：光栅有透射光栅和反射光栅，实际应用的都是反射光栅，它又可分为平面反射光栅（即通称的反射光栅或闪烁光栅）和凹面反射光可分为平面反射光栅（即通称的反射光栅或闪烁光栅）和凹面反射光栅两类，凹面反射光栅可以起色散元件和准直镜两个作用，使色散后栅两类，凹面反射光栅可以起色散元件和准直镜两个作用，使色散后的光束聚
20、焦于出射狭缝，得到锐线光谱。的光束聚焦于出射狭缝，得到锐线光谱。第二十四页，讲稿共四十四页哦狭缝、光谱频带宽度和分辨率狭缝、光谱频带宽度和分辨率o出射狭缝的宽度通常有两种表示方法：一为出射狭缝的宽度通常有两种表示方法：一为狭缝的实际宽度，以毫米（狭缝的实际宽度，以毫米（mm）表示，另）表示，另一种为光谱频带宽度，即指由出射狭缝射出一种为光谱频带宽度，即指由出射狭缝射出光束的光谱宽度，以毫微米光束的光谱宽度，以毫微米nm表示。例如，表示。例如，出射狭缝的宽度是出射狭缝的宽度是6nm，并不是说出射狭，并不是说出射狭缝的宽度是缝的宽度是6nm，而是指由此狭缝射出的，而是指由此狭缝射出的光具有光具有6
21、nm的光谱带宽。的光谱带宽。第二十五页，讲稿共四十四页哦o纯粹的单色光只是一种理想情况，分光光度计所能得到的纯粹的单色光只是一种理想情况，分光光度计所能得到的“单色光单色光”，实际上只是具有一定波长范围的谱带，狭缝，实际上只是具有一定波长范围的谱带，狭缝越宽，所包括的波长范围也愈宽。越宽，所包括的波长范围也愈宽。对单色光纯度来说，狭对单色光纯度来说，狭缝是愈窄愈好，但光的强度也就越弱，因此狭缝不能无限制缝是愈窄愈好，但光的强度也就越弱，因此狭缝不能无限制地小，狭缝的最小宽度取决于检测器能准确地进行测量的最地小，狭缝的最小宽度取决于检测器能准确地进行测量的最小光能量。目前达到的最小宽度为小光能量
22、。目前达到的最小宽度为0.1nm。o由于光栅分光其色散是线性的，所以只用一种狭缝宽度由于光栅分光其色散是线性的，所以只用一种狭缝宽度对各种波长的光的测量，其分辨率都相同，即狭缝宽度对各种波长的光的测量，其分辨率都相同，即狭缝宽度不必经常调节。只要光强能达到要求，应使用尽可能小不必经常调节。只要光强能达到要求，应使用尽可能小的狭缝宽度，以提高分辨率。的狭缝宽度，以提高分辨率。第二十六页，讲稿共四十四页哦 样品室样品室o包括池架、吸收池（即比色杯）以及各种可更换的附包括池架、吸收池（即比色杯）以及各种可更换的附件。池架有普通池架和恒温池架，恒温池架有水恒温件。池架有普通池架和恒温池架，恒温池架有水
23、恒温池架和电恒温池架。水恒温池架需用循环水恒温装置池架和电恒温池架。水恒温池架需用循环水恒温装置打入循环水保持池架恒温，控温精度为打入循环水保持池架恒温，控温精度为 0.1，电恒，电恒温池架十分昂贵，控温精度可达温池架十分昂贵，控温精度可达 0.05。o吸收池有光学玻璃杯和石英玻璃杯两种。光学玻璃杯因为普吸收池有光学玻璃杯和石英玻璃杯两种。光学玻璃杯因为普通光学玻璃吸收紫外光，因此只能用于可见光，适用波长范通光学玻璃吸收紫外光，因此只能用于可见光，适用波长范围是围是400nm2000nm。石英玻璃杯可透过紫外光、。石英玻璃杯可透过紫外光、可见光和红外光，可见光和红外光，是最常使用的吸收池，使用
24、波长范围是是最常使用的吸收池，使用波长范围是180nm3000nm。第二十七页，讲稿共四十四页哦吸收池使用注意事项吸收池使用注意事项o要彻底清洗，尤其是盛过蛋白质等溶液，干后形成一层膜，不要彻底清洗，尤其是盛过蛋白质等溶液，干后形成一层膜，不易洗去，通常杯子不用时可放在易洗去，通常杯子不用时可放在 1洗洁净液中浸泡，去污洗洁净液中浸泡，去污效果好，使用时用水冲洗干净，要求杯壁不挂水珠，还可效果好，使用时用水冲洗干净，要求杯壁不挂水珠，还可用绸布丝线或软塑料制作小刷子清洗。用绸布丝线或软塑料制作小刷子清洗。o严禁用手指触摸透光面，因指纹不易洗净。严禁用硬纸和严禁用手指触摸透光面，因指纹不易洗净。
25、严禁用硬纸和布擦拭透光面，只能使用镜头纸和绸布。布擦拭透光面，只能使用镜头纸和绸布。o严禁加热烘烤。急用干的杯子时，可用酒精荡洗后用冷风吹严禁加热烘烤。急用干的杯子时，可用酒精荡洗后用冷风吹干。决不可用超声波清洗器清洗。干。决不可用超声波清洗器清洗。o吸收池的校正：要固定参比杯和样品杯，可在杯的毛玻璃面上写上吸收池的校正：要固定参比杯和样品杯，可在杯的毛玻璃面上写上记号。用盛有参比液的参比杯和样品杯测定吸光度记号。用盛有参比液的参比杯和样品杯测定吸光度“A0”，样品，样品杯换上样品液后测定的吸光度为杯换上样品液后测定的吸光度为“A1”，则校正后的实际吸光，则校正后的实际吸光度度A为：为：oA=
26、A1A0 第二十八页，讲稿共四十四页哦 检测器检测器o检测器是一种光电转换设备，即把光强度以电讯号显示出来，常用的检测器有光电管，光电倍增管和光电二极管等三种。o光电二极管：原理是硅二极管受紫外近红外辐射照射时，其导电性增强的大小与光强成正比。近年来分光光度计使用光电二极管作检测器在增加，虽然其灵敏度还赶不上光电倍增管，但它的稳定性更好，使用寿命更长，价格便宜，因而许多著名品牌的高档分光光度计都在使用它作检测器。尤其值得注意的是由于计算机技术的飞速发展，使用光电二极管的二极管阵列分光光度计有了很大发展，二极管数目已达1024个，明显提高了分辨率。o这种新型分光光度计的特点是“后分光”，即氘灯发
27、射的光经透镜聚焦后穿过样品吸收池，经全息光栅色散后被二极管阵列的各个二极管接收，信号由计算机进行处理和存储，因而扫描速度极快，约10ms就可完成全波段扫描，绘出吸光度、波长和时间的三维立体色谱图，可以最方便快速地得到任一波长的吸收数据，它最适宜用于动力学测定，也是高效液相色谱仪最理想的检测器。第二十九页，讲稿共四十四页哦显示输出装置显示输出装置低档分光光度计现在已都使用数字显示，有的低档分光光度计现在已都使用数字显示，有的还连有打印机。现代高性能分光光度计均可还连有打印机。现代高性能分光光度计均可以连接微机，而且有的主机还使用带液晶或以连接微机，而且有的主机还使用带液晶或CRT荧屏显示的微处理
28、机和打印绘图机。荧屏显示的微处理机和打印绘图机。有的还带有标准软驱，存取数据更加方便（例有的还带有标准软驱，存取数据更加方便（例如如SPECORD 200）。）。第三十页，讲稿共四十四页哦分光光度计光路原理图光源切换镜石英卤素灯氘灯滤色盘场镜入口球面反光镜基准转换镜旋转镜电机螺环镜样品室凹形全息光栅出口第三十一页，讲稿共四十四页哦分光光度法在生化实验中的应用o分光光度计除用于常规的吸光度测定和吸收分光光度计除用于常规的吸光度测定和吸收光谱的扫描外，常用的分光光度法还有导数光谱的扫描外，常用的分光光度法还有导数分光光度法、催化动力学分光光度法和差示分光光度法、催化动力学分光光度法和差示分光光度法
29、等。分光光度法等。o在生化实验中主要用于氨基酸含量的测定、在生化实验中主要用于氨基酸含量的测定、蛋白质含量的测定、核酸的测定、酶活力测蛋白质含量的测定、核酸的测定、酶活力测定、生物大分子的鉴定和酶催化反应动力学定、生物大分子的鉴定和酶催化反应动力学的研究等。的研究等。o相对浓度、分子构象、反应过程记录等等。相对浓度、分子构象、反应过程记录等等。第三十二页，讲稿共四十四页哦NAD 和和 NADH吸收光谱的对比吸收光谱的对比第三十三页，讲稿共四十四页哦三、三、Helios仪器特点仪器特点o采用全息母光栅（不是复制光栅），采用全息母光栅（不是复制光栅），可获得优异的光学性可获得优异的光学性能和耐久性
30、，即使在高吸光度能和耐久性，即使在高吸光度3A下也能保持线性。下也能保持线性。o采用步进马达单色器，配合采用步进马达单色器，配合Hatten Modulator 调调制器，使得无论是高速扫描还是低速扫描，其扫描曲线完制器，使得无论是高速扫描还是低速扫描，其扫描曲线完全重合（没有峰值）。全重合（没有峰值）。o真正的双光束，光束能量比为样品真正的双光束，光束能量比为样品/参比参比=80/20，可获，可获得良好的信噪比。得良好的信噪比。o标准软盘，存取方便，方便计算机的应用。标准软盘，存取方便，方便计算机的应用。第三十四页，讲稿共四十四页哦主机功能oSCAN：测定吸收值和吸收峰oFIXED：在一固定
31、波长下的吸收值oQUANT：浓度测定（以一标准作参照）oRATE：一定时间范围内吸收值的变化曲线。o存盘第三十五页，讲稿共四十四页哦配件功能配件功能n连续进样分析：加流动池配件连续进样分析：加流动池配件（SUPPERSIPPER）n打印：配打印机打印：配打印机n计算机控制：配计算机计算机控制：配计算机n核酸解链分析：配核酸解链配件（水浴核酸解链分析：配核酸解链配件（水浴+温温控）控）n酶动力学：温控装置。酶动力学：温控装置。第三十六页，讲稿共四十四页哦操作步骤o开机预热：电源在机器后面。开机预热：电源在机器后面。o在在HOME 主页上选择功能，用箭头（机子右下角）选主页上选择功能，用箭头（机子
32、右下角）选择，确定后按择，确定后按ENTER，再进一步用箭头，光标和，再进一步用箭头，光标和ENTER选，直到所有功能（参数）确定。选，直到所有功能（参数）确定。o调零：用左右箭头选比色杯号，一般调零：用左右箭头选比色杯号，一般1号是对照，机子在号是对照，机子在右上角显示杯号和调零情况，按右上角显示杯号和调零情况，按ZERO/BASE 调零，调零，直到在右上角第一排为直到在右上角第一排为0.000A。o按按RUN测定，进一步观测按屏幕底部的功能键。测定，进一步观测按屏幕底部的功能键。o测定结束后回到测定结束后回到HOME页。页。o关电源关电源第三十七页，讲稿共四十四页哦注意事项o选好合适的工作
33、环境：没有阳光直射，避免选好合适的工作环境：没有阳光直射，避免静电和震动，温度一般在静电和震动，温度一般在540之间。之间。o打开比色池时（换样品时）要在打开比色池时（换样品时）要在HOME页页状态下。状态下。o保持比色池内清洁，不要用腐蚀性物质。保持比色池内清洁，不要用腐蚀性物质。o磁盘不用时应该取出，磁盘在驱动器中不要磁盘不用时应该取出，磁盘在驱动器中不要开启仪器，否则可能会损害磁盘。开启仪器，否则可能会损害磁盘。o关机要在关机要在HOME状态下。状态下。第三十八页，讲稿共四十四页哦测定测定DNADNA样品的吸光光度值样品的吸光光度值 o开机预热开机预热o在在HOME主页上选择主页上选择S
34、CAN，按，按ENTER键，出现在键，出现在SCAN METHODS主页主页o参数设置：参数设置：oSTART：选择开始波长：选择开始波长 nmoSTOP：选择终止波长：选择终止波长：310nm（这两者间最少相隔（这两者间最少相隔4nm）oBANDWIDTH：带宽，一般固定在：带宽，一般固定在 2.0nmo将光标移到将光标移到RATIO 处，分别选择两个波长：处，分别选择两个波长：260和和280nmo调零：按调零：按ZERO/BASE 键调零，直到出现键调零，直到出现0.000Ao用缓冲液做对照用缓冲液做对照o测定样品在这两个波长下的吸收值测定样品在这两个波长下的吸收值o计算两者比值，如果约为计算两者比值，如果约为 1.8，说明样品比较纯。，说明样品比较纯。o先回到先回到HOME主页，再关机。主页，再关机。o擦干比色池。擦干比色池。第三十九页，讲稿共四十四页哦Helios 特性演示第四十页，讲稿共四十四页哦第四十一页，讲稿共四十四页哦第四十二页，讲稿共四十四页哦第四十三页，讲稿共四十四页哦v谢谢谢谢！第四十四页，讲稿共四十四页哦