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1、关于抗体的测定及临床意义现在学习的是第1页，共29页梅毒螺旋体（苍白密螺旋体）梅毒螺旋体（苍白密螺旋体）梅梅毒毒是是由由梅梅毒毒螺螺旋旋体体引引起起的的一一种种慢慢性性、系系统统性性性性传传播播疾疾病病。人人体体受受感感染染后后，螺螺旋旋体体很很快快播播散散到到全全身身，几几乎乎可可侵侵犯犯全全身身各各组组织与器官，临床表现多种多样，且时显时隐，病程较长。织与器官，临床表现多种多样，且时显时隐，病程较长。2005年国家卫生部公布年国家卫生部公布,在全国在全国27 种法定报告的种法定报告的 甲、乙类传染病中甲、乙类传染病中,梅毒发病人数仅次于肺结核、乙型肝梅毒发病人数仅次于肺结核、乙型肝 炎、细
2、菌性和阿米巴性痢疾、淋病而高居第五位炎、细菌性和阿米巴性痢疾、淋病而高居第五位(2002 年为第七位年为第七位)。二二.传播途径传播途径 一一.概况概况现在学习的是第2页，共29页n1、性接触传播、性接触传播 占占95%。主要通过性交或其他性行为，如同性恋、接主要通过性交或其他性行为，如同性恋、接吻等。梅毒密螺旋体大量存在于一、二期梅吻等。梅毒密螺旋体大量存在于一、二期梅毒患者的生殖器和其他部位的皮肤粘膜表面，毒患者的生殖器和其他部位的皮肤粘膜表面，也存在于唾液、精液、乳汁、尿液和血液等也存在于唾液、精液、乳汁、尿液和血液等体液中。未经治疗的梅毒患者在感染体液中。未经治疗的梅毒患者在感染12期
3、期内最具传染性。随着病期延长，传染性越来越小，内最具传染性。随着病期延长，传染性越来越小，4年后通过性接触无传染性。年后通过性接触无传染性。现在学习的是第3页，共29页n3、胎盘传播、胎盘传播 未经治疗的梅毒孕妇在整个病程都可经胎盘传未经治疗的梅毒孕妇在整个病程都可经胎盘传播给胎儿。其中在一期或二期患者，血中螺旋播给胎儿。其中在一期或二期患者，血中螺旋体最多。如不治疗造成流产或死胎的约为体最多。如不治疗造成流产或死胎的约为50%，发生胎传播梅毒的危险约，发生胎传播梅毒的危险约50%，感染梅毒，感染梅毒1年年后的胎盘传播的危险性逐渐降为后的胎盘传播的危险性逐渐降为50%以下。病以下。病期超过期超
4、过4年虽通过性接触无传染性，但仍可传给年虽通过性接触无传染性，但仍可传给胎儿，病期越长，传染性越小。胎儿，病期越长，传染性越小。2、输血传染、输血传染现在学习的是第4页，共29页4、产道传播、产道传播 新生儿在出生时，头部、肩部损伤或接触了新生儿在出生时，头部、肩部损伤或接触了母体生殖器都能受母体阴部的螺旋体感染，母体生殖器都能受母体阴部的螺旋体感染，而引起婴儿的后天性梅毒。而引起婴儿的后天性梅毒。5、其他传播、其他传播 哺乳、接触梅毒患者污染的衣被、毛巾、食哺乳、接触梅毒患者污染的衣被、毛巾、食具或污染的医疗器械，都可引起梅毒的间接具或污染的医疗器械，都可引起梅毒的间接传播。传播。现在学习的
5、是第5页，共29页人人类类对对梅梅毒毒无无先先天天免免疫疫性性，尚尚无无疫疫苗苗接接种种进进行行人人工工免免疫疫，仅仅能能在在受受感感染染后后产产生生感感染染性性免免疫疫。已已完完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染三、梅毒的免疫性三、梅毒的免疫性现在学习的是第6页，共29页首首先先产产生生IgM型型抗抗梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗体体，感感染染2周周后后即即可可测测出出，早早期期梅梅毒毒抗抗梅梅治治疗疗39个个月月后后或或晚晚期期梅梅毒毒治治疗疗2年年后后，大大部部分分病病人人IgM可可转转阴阴性性，再再感感染染时时又又出出现现阳阳性性，故故IgM型型抗抗体体的的存存
6、在在是是活活动动性性（现现症症）梅梅毒毒的表现。的表现。感感染染梅梅毒毒4周周左左右右产产生生IgG型型抗抗梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗体体，即即使使经经足足量量抗抗梅梅治治疗疗，梅梅毒毒螺螺旋旋体体抗抗原原消消失失后后很很长长时时间间，IgG抗抗体体仍仍可可通通过过记记忆忆细细胞胞的的作作用用继继续续产产生生，甚甚至至终生在血清中可测出。终生在血清中可测出。n一种是梅毒特异性抗体一种是梅毒特异性抗体IgM和和IgG现在学习的是第7页，共29页胎胎儿儿在在宫宫内内感感染染梅梅毒毒螺螺旋旋体体后后，胚胚胎胎晚晚期期（69个个月月）已已能能合合成成IgM型型抗抗体体，出出生生后后第第3个个月月开开始始
7、形形成成IgG型型抗抗体体；IgM抗抗体体不不能能通通过过胎胎盘盘，而而IgG抗抗体体能能通通过过胎胎盘盘，如如患患儿儿血血清清中中检检侧侧出出19S-IgM抗抗梅梅毒螺旋体抗体是诊断先天梅毒的有力证据毒螺旋体抗体是诊断先天梅毒的有力证据l一种是非特异性抗体一种是非特异性抗体-反应素（反应素（reagin）是是梅梅毒毒螺螺旋旋体体破破坏坏人人体体组组织织过过程程中中释释放放出出的的一一种种抗抗原原性性心心磷磷脂脂刺刺激激机机体体所所产产生生的的抗抗体体。一一般般在在感感染染后后57周周（或或下下疳疳出出现现后后23周周）产产生生。经经正正规规治治疗后可逐渐消失疗后可逐渐消失。现在学习的是第8页
8、，共29页四四.梅毒的诊断梅毒的诊断1、病史、病史2、临床表现、临床表现3、实验室检查。、实验室检查。（1）血清学检验）血清学检验(测抗体测抗体)（2）病原学检查：直接查梅毒螺旋体）病原学检查：直接查梅毒螺旋体(暗暗 视野显微镜视野显微镜,直接荧光抗体法直接荧光抗体法)（3）梅毒螺旋体核酸测定。）梅毒螺旋体核酸测定。现在学习的是第9页，共29页非特异性类脂质抗原血清试验非特异性类脂质抗原血清试验：是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素反应素，用于初筛试验及疗效观察用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种可以分为以下四种试验试验，原理基
9、，原理基本相同：本相同：1、性病研究实验室玻片试验（、性病研究实验室玻片试验（VDRL)：由于试剂需现配：由于试剂需现配 现用，现用，故而国内实验室很少采用。但故而国内实验室很少采用。但VDRL是唯一可用于神经性梅毒是唯一可用于神经性梅毒诊断的血清学方法诊断的血清学方法 2、快速血浆反应素环状卡片试验、快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)：在特制的纸片：在特制的纸片 上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现 凝集，用肉眼可观察结果。凝集，用肉眼可观察结果。3、甲苯胺红试验（、甲苯胺红试验（TRUST)：在试剂中加入甲苯胺红代替炭粉：在试剂中加
10、入甲苯胺红代替炭粉 颗颗粒，使结果更易于观察。粒，使结果更易于观察。4、不加热血清反应素试验（、不加热血清反应素试验（USR)梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验现在学习的是第10页，共29页非特异性类脂质抗原非特异性类脂质抗原血清试验血清试验的缺陷：的缺陷：1、特异性：不高。在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、特异性：不高。在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、麻风病、静脉吸毒者以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以此类试验麻风病、静脉吸毒者以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现有时会出现假阳性反应假阳性反应。用于初筛试验。用于初筛试验。2、敏感性：不高。抗体过量可引
11、起前带现象（、敏感性：不高。抗体过量可引起前带现象（1-2二期梅毒病二期梅毒病人）；由于感染梅毒后反应素的出现晚于特异性梅毒螺旋体抗人）；由于感染梅毒后反应素的出现晚于特异性梅毒螺旋体抗体；晚期梅毒反应素又可能转阴体；晚期梅毒反应素又可能转阴-假阴性反应假阴性反应，因此这类试验，因此这类试验不适于一、三期梅毒，对隐性梅毒和神经梅毒也不敏感。因不适于一、三期梅毒，对隐性梅毒和神经梅毒也不敏感。因此此类试验做梅毒初筛时，存在一定数量的漏检此此类试验做梅毒初筛时，存在一定数量的漏检非梅毒螺旋体抗原血清试验非梅毒螺旋体抗原血清试验的的优点：优点：1、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随治疗逐渐下降，、
12、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随治疗逐渐下降，故可以作为疗效观察的指标故可以作为疗效观察的指标 2、此类方法简便，价格低廉、此类方法简便，价格低廉梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验现在学习的是第11页，共29页 梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgMIgM和和/或或IgGIgG抗体，其抗体，其敏感性和特异性均较高。常用的有以下五种方法：敏感性和特异性均较高。常用的有以下五种方法：1 1、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS)FTA-ABS)最敏感的方法最敏感的方法
13、 技术操作上也是最困难的，故常不被临床实验室作为首选技术操作上也是最困难的，故常不被临床实验室作为首选 方法方法 2 2、梅毒螺旋体血球凝集试验（、梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHATPHA）国内使用的商品化国内使用的商品化 TPHA试剂盒均未通过国家的批批检试剂盒均未通过国家的批批检3 3、梅毒螺旋体明胶凝集试验（、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)TPPA)确证试验方法确证试验方法4 4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISATP-ELISA）5 5、梅毒螺旋体快速诊断试验（、梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RTTP-RT）未通过国家的批批未通过国家的批批
14、检检梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验现在学习的是第12页，共29页 梅毒螺旋体明胶凝集试验（梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA IgG）原理：用超声裂解的梅毒螺旋体为抗原，致敏惰性明胶颗原理：用超声裂解的梅毒螺旋体为抗原，致敏惰性明胶颗 粒，此致敏明胶颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋粒，此致敏明胶颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋 体抗体结合，产生肉眼可观察的凝集反应。是体抗体结合，产生肉眼可观察的凝集反应。是TPHA 的升级产品。的升级产品。优点：优点：1、试剂稳定，批间差小试剂稳定，批间差小 2、结果判读清晰明确结果判读清晰明确 3、敏感性和特异性高敏感性和特异性高不足：结果判定主观，不易保存不足
15、：结果判定主观，不易保存.成本较高，成本较高，不适合大批量检测不适合大批量检测梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验现在学习的是第13页，共29页Serodia TPPA的操作步骤的操作步骤6、结果判读、结果判读1、加入样品稀释液、加入样品稀释液100l25l25l25l孔号143212、加入测试样品、加入测试样品25l孔号14321致敏颗粒4、加入明胶颗粒、加入明胶颗粒最终稀释倍数孔号143211:401:8025l25l未致敏颗粒5、混匀，加盖，孵育、混匀，加盖，孵育2个小时个小时3、样品的倍比稀释、样品的倍比稀释孔号14321最终稀释倍数1:201:4025l25l25l25l弃去弃去现在学习
16、的是第14页，共29页Serodia TPPA的结果判读（定性试验）的结果判读（定性试验）现在学习的是第15页，共29页梅毒螺旋体酶联免疫试验（梅毒螺旋体酶联免疫试验（TP-ELISA）原理：以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，再加原理：以梅毒螺旋体抗原包被聚丙乙烯板，再加入待检血清以及酶标抗原，形成双抗原夹心，同时入待检血清以及酶标抗原，形成双抗原夹心，同时检测检测IgG、IgM抗体。少数试剂采用间接法，检测抗体。少数试剂采用间接法，检测IgG 优点：优点：1、敏感性和特异性较高、敏感性和特异性较高 2、价格较低，适合于对大量样品的筛查、价格较低，适合于对大量样品的筛查 3、可实现操作的自动化、
17、客观化、可实现操作的自动化、客观化 不足：各家不足：各家ELISA试剂盒采用的抗原和工艺不试剂盒采用的抗原和工艺不 同，使测定的敏感性和特异性产生较大的同，使测定的敏感性和特异性产生较大的 差异，临床实验室在选用差异，临床实验室在选用ELISA试剂前应认试剂前应认 真进行评估真进行评估.基因重组抗原基因重组抗原,假阴性假阴性.梅毒的血清学试验梅毒的血清学试验现在学习的是第16页，共29页n有研究表明有研究表明:使用由使用由rTP47,rTP17和和rTP15这这3种重组表达相关抗原包被的种重组表达相关抗原包被的ELISA试剂盒试剂盒,有非常好的敏感性和特有非常好的敏感性和特异性异性.nELIS
18、A试剂对试剂对II期、潜伏期和疗后梅毒期、潜伏期和疗后梅毒的特异性和敏感性都较好，但对的特异性和敏感性都较好，但对I期梅期梅毒的敏感性尚有待提高。毒的敏感性尚有待提高。现在学习的是第17页，共29页样品对样品对ELISA及及PA检测结果的影响检测结果的影响 X：假阳性：假阳性 O加热灭活加热灭活 X：与底物有关：与底物有关O溶血溶血O黄疸黄疸 O脂血脂血 OO血浆血浆 O O血清血清 ELISAPA样品类型样品类型O：无影响：无影响：部分有影响：部分有影响X：有影响：有影响现在学习的是第18页，共29页n敏感性和特异性敏感性和特异性nELISA比比TPPA法稍差。法稍差。n13736份标本份标
19、本nTPPA法法 阳性阳性214nRPR法法 阳性阳性192(18例确诊假阳性例确诊假阳性 22例假阴性例假阴性)nELISA法法 阳性阳性204(4例假阳性例假阳性)现在学习的是第19页，共29页 无偿献血者无偿献血者(1855岁岁)中中,ELISA法为法为0.58%。其中其中5155岁阳性率达岁阳性率达2.14(9/421)n无临床症状，只有抗体阳性。阳性结果难以用正在或曾无临床症状，只有抗体阳性。阳性结果难以用正在或曾经感染梅毒解释。经感染梅毒解释。普通人群：阳性率普通人群：阳性率 1.5%(1.52%1.61%)。其中其中 50岁岁 53.3%62.3%7180岁岁 27.7%27.9
20、%。ELISA或或TPPA法假阳性（老年人）法假阳性（老年人）现在学习的是第20页，共29页n梅毒螺旋体抗体试验所测为抗T.pa llidum的IgG/IgM类抗体。试验中所用抗原nFTA2ABS：T.pallidum subsp pallidum 的Nichols株冻干悬液nTPPA：Nichols株超声处理nEL ISA：纯化的/基因重组的分子量(MW)47 000、45500、17000、15500的T.pa llidum特异抗原梅毒血清学试验的假阳性生物学基础梅毒血清学试验的假阳性生物学基础现在学习的是第21页，共29页n人类共生的螺旋体很多，虽然有些螺旋体可能不人类共生的螺旋体很多，
21、虽然有些螺旋体可能不致病致病,但可能参与齿龈类、牙周病、腹泻等的发但可能参与齿龈类、牙周病、腹泻等的发病。已发现抗病。已发现抗T.pallidum MW 37 000的鞭毛的鞭毛鞘蛋白的单克隆抗体和抗鞘蛋白的单克隆抗体和抗MW47 000脂蛋白的单脂蛋白的单克隆抗体可与某些口腔螺旋体反克隆抗体可与某些口腔螺旋体反 应。齿龈炎和牙应。齿龈炎和牙周病患者常产生抗梅毒螺旋体周病患者常产生抗梅毒螺旋体(T.pallidum subsp.pallidum)MW 47 000、37 000、14 000和和12 000抗原的抗原的IgG类抗体。甚至少部分健类抗体。甚至少部分健康人也可测出抗康人也可测出抗M
22、W 47 000和和37 000抗原的抗抗原的抗体体。现在学习的是第22页，共29页如何解决假阳性问题？n进行进行梅毒螺旋体血清学试验梅毒螺旋体血清学试验时，待测血清预先用非致时，待测血清预先用非致病性密螺旋体病性密螺旋体T.phageden is的的Reiter株株 提取物吸收（或阳性标本提取物吸收（或阳性标本进行吸收试验。进行吸收试验。n即使如此即使如此,试验的特异性仍试验的特异性仍只能达只能达99%左右左右,不能绝不能绝对排除假阳性对排除假阳性 现在学习的是第23页，共29页关于梅毒血清学试验程序的探讨（一）关于梅毒血清学试验程序的探讨（一）先以非梅毒螺旋体抗原血清试验（先以非梅毒螺旋体
23、抗原血清试验（RPR、TRUST等）进等）进行初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验（行初筛，再以梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA、TPHA、ELISA等）进行确认。等）进行确认。优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉，使优点：非梅毒螺旋体抗原血清试验价格低廉，使 梅毒检测的成本可以保持在低水平梅毒检测的成本可以保持在低水平 缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较缺点：非梅毒螺旋体抗原血清试验的敏感性较 差，导致临床上易出现漏检的情况。差，导致临床上易出现漏检的情况。现在学习的是第24页，共29页先进行梅毒螺旋体抗先进行梅毒螺旋体抗原血清试验，阳性时原血清试验，阳性时再进行非梅毒螺旋体再进行非梅毒
24、螺旋体抗原血清试验。抗原血清试验。关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）现在学习的是第25页，共29页关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）关于梅毒血清学试验程序的探讨（二）梅毒螺旋体抗原血清试验（梅毒螺旋体抗原血清试验（TPPA等）等）（-）阴性报告阴性报告（+）非梅毒螺旋体抗原血清试验（非梅毒螺旋体抗原血清试验（RPR等）等）（+）现症梅毒现症梅毒抗梅治疗，疗效观察抗梅治疗，疗效观察（-）询问梅毒既往感染和治疗史询问梅毒既往感染和治疗史（有）（有）既往感染既往感染（无）（无）随访或抗梅治疗随访或抗梅治疗现在学习的是第26页，共29页 为了控制一些传染性疾病的院内感
25、染为了控制一些传染性疾病的院内感染,现现已规定凡是手术、输血已规定凡是手术、输血(供、受血者供、受血者)、各、各种创伤性检查的患者种创伤性检查的患者,均须进行包括均须进行包括HBV、HCV、H IV(1+2)和梅毒螺旋体的相关和梅毒螺旋体的相关血清学检验。血清学检验。这这4种病原所致传染病由于对健康和生种病原所致传染病由于对健康和生命造成的危害以及患病后对患者参军、入命造成的危害以及患病后对患者参军、入学、就业、婚嫁、家庭稳定等的影响学、就业、婚嫁、家庭稳定等的影响,因此因此相关检测结果的正确与否一直是十分敏感的相关检测结果的正确与否一直是十分敏感的医学和社会问题。错误的检测结果是很多医医学和社会问题。错误的检测结果是很多医疗纠纷的起因。疗纠纷的起因。现在学习的是第27页，共29页 在在全国临床检验操作规程全国临床检验操作规程中中 建议两种方法建议两种方法(RPR与与ELISA)同时进行。同时进行。梅毒血清学试验阳性结果只提示所测标本中有梅毒血清学试验阳性结果只提示所测标本中有抗类脂抗体和抗类脂抗体和/或抗或抗T.pa llidum抗体存在抗体存在,不不能作为患者感染梅毒螺旋体能作为患者感染梅毒螺旋体(患梅毒患梅毒)的绝对依据的绝对依据;检测结果应结合临床综合分析检测结果应结合临床综合分析。现在学习的是第28页，共29页感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第29页，共29页