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1、单增李斯特氏菌检测详单增李斯特氏菌检测详解解现在学习的是第1页，共23页李斯特氏菌李斯特氏菌特征特征格氏李斯格氏李斯特氏菌特氏菌英诺克李斯英诺克李斯特氏菌特氏菌绵羊李斯特绵羊李斯特氏菌氏菌单核细胞增单核细胞增生李斯特氏生李斯特氏菌菌默氏李斯特默氏李斯特氏菌氏菌西尔李斯特西尔李斯特氏菌氏菌威尔斯李斯威尔斯李斯特氏菌特氏菌 -溶血溶血CAMP CAMP(Staphylococc(Staphylococcus aureus)us aureus)CAMP CAMP(Rhodococcus(Rhodococcus equi)equi)甘露醇甘露醇 甲基甲基-D-D甘甘露糖苷露糖苷NDNDNDNDL-L-
2、鼠李糖鼠李糖 d d d d d d可溶性淀粉可溶性淀粉NDNDNDNDD-D-木糖木糖马尿酸盐水解马尿酸盐水解NDNDNDND硝酸盐还原硝酸盐还原NDNDNDND小鼠致病力小鼠致病力现在学习的是第2页，共23页样品的存放与制备样品的存放与制备n n冷冻样品：应于25解冻，且不超过18小时；若不能及时检验，应置于15保存。n n非冷冻的易腐样品：尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于4冰箱保存，在24h之内检验。n n无菌取样品25g(mL)放入灭菌均质杯或均质袋中加225mL FB1增菌液中，充分均质。现在学习的是第3页，共23页增菌培养增菌培养 225mL FB1 301培养25h1h，吸
3、取1mL，加入10mL FB2增菌液中301二次增菌25h1h。现在学习的是第4页，共23页VIDAS快速筛选（可选）快速筛选（可选）FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。n n筛选为阴性的结果可直接报告未检出。n n筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。现在学习的是第5页，共23页分离培养分离培养n n取增菌液一环，划线分离于选择性培养基OXA、PALCAM上，351培养24h48h。n n菌落形态：24h后菌落呈现黑色，直径为1mm，在其周围形成一个黑色环。培养48h，菌落仍成黑色，直径2mm3mm，除在菌落周围有一环外，在菌落中心部位的深层也形成黑点。n n挑取5个或更多的可疑菌落，接种于T
4、SA-YE。现在学习的是第6页，共23页鉴定鉴定n n蓝色菌落检验 用45斜射光照射TSA-YE平板，菌落呈现蓝灰色到蓝色。（设标准菌株对照）现在学习的是第7页，共23页鉴定鉴定n n典型运动镜检典型运动镜检 李斯特氏菌为短棒状杆李斯特氏菌为短棒状杆菌，可见轻微的旋转翻菌，可见轻微的旋转翻滚。滚。（设标准（设标准菌株对照）菌株对照）注：压片法或悬滴法注：压片法或悬滴法 暗光暗光现在学习的是第8页，共23页鉴定鉴定n n革兰氏染色 短杆状革兰氏阳性反应注：陈旧培养物多转为阴性。现在学习的是第9页，共23页鉴定鉴定n n过氧化氢酶试验 挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片上，滴加1滴3的过氧化
5、氢溶液，李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。现在学习的是第10页，共23页鉴定鉴定n n溶血试验溶血试验 刺种刺种7 7羊血琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核细羊血琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性对照胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性对照菌（英诺克李斯特氏菌），菌（英诺克李斯特氏菌），3030培养24h48h。单核细胞增生李斯特氏菌单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的窄小的 溶血环溶血环溶血环溶血环 西尔李斯特氏菌西尔李斯特氏菌 窄小的窄小的 溶血环溶血环溶血环溶血环 绵羊李斯特氏菌绵羊李斯特氏菌 大的大的 溶血环溶血环溶血环溶血环 其他其他 不溶血不溶血现
6、在学习的是第11页，共23页鉴定鉴定n n动力试验穿刺SIM半固体培养基，于室温（2025）培养48h。李斯特氏菌有动力，呈典型的伞状生长。现在学习的是第12页，共23页鉴定鉴定n n硝酸盐还原试验接种于硝酸盐肉汤，于35培养5d。李斯特氏菌为阴性。现在学习的是第13页，共23页鉴定鉴定n nMRVP试验接种于MRVP肉汤中，于35培养48h。李斯特氏菌为阳性反应。现在学习的是第14页，共23页鉴定鉴定n n三糖铁试验接种于TSI，35培养5d。李斯特氏菌斜面和底层产酸，不产硫化氢。现在学习的是第15页，共23页鉴定鉴定n n尿素酶试验 穿刺尿素琼脂斜面，于35培养5d。李斯特氏菌尿素酶试验阴
7、性。现在学习的是第16页，共23页鉴定鉴定n n糖发酵试验 接种0.5%葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内，35培养24h48h，阴性继续培养到第5天。现在学习的是第17页，共23页李斯特氏菌菌种鉴别特征李斯特氏菌菌种鉴别特征中文菌名中文菌名学名学名蓝蓝色色菌菌落落典典型型运运动动过过氧氧化化氢氢酶酶革革兰兰氏氏染染色色溶溶血血试试验验动动力力试试验验尿尿素素酶酶试试验验硝硝酸酸盐盐还还原原MRMR VPVP试试验验三糖铁三糖铁试验试验糖发酵利用糖发酵利用葡葡萄萄糖糖麦麦芽芽糖糖七七叶叶苷苷甘甘露露醇醇鼠鼠李李糖糖木木糖糖单核细胞增生单核细胞增生李斯特氏菌李斯特氏菌L.L.m
8、onocytogenmonocytogeneses /产酸，产酸，不产不产H H2 2S S 绵羊李斯特氏菌绵羊李斯特氏菌L.ivanoviiL.ivanovii /产酸，产酸，不产不产H H2 2S S 英诺克李斯特氏菌英诺克李斯特氏菌L.innocuaL.innocua /产酸，产酸，不产不产H H2 2S S V V威尔斯李斯特氏菌威尔斯李斯特氏菌L.welshimeriL.welshimeri /产酸，产酸，不产不产H H2 2S S V V西尔李斯特氏菌西尔李斯特氏菌L.seeligeriL.seeligeri /产酸，产酸，不产不产H H2 2S S 格氏李斯特氏菌格氏李斯特氏菌L
9、.grayiL.grayi /产酸，产酸，不产不产H H2 2S S 现在学习的是第18页，共23页鉴定鉴定n n协同溶血试验（cAMP）在羊血琼脂平板上各划在羊血琼脂平板上各划一直线，使两线平行，在平一直线，使两线平行，在平行线上分别接种金黄色葡萄行线上分别接种金黄色葡萄球菌球菌ATCC49444ATCC49444和马红球菌和马红球菌ATCC6939ATCC6939，在两线之间垂，在两线之间垂直接种，与两线相近但不相直接种，与两线相近但不相交，于交，于3535培养培养24h24h48h48h后，后，观察相交处溶血情况。观察相交处溶血情况。L.monocytogenes L.innocua L
10、.ivanovii窄的窄的 溶血带溶血带 不溶血不溶血宽的 溶血带现在学习的是第19页，共23页CAMP(CAMP(Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus)Staphylococcus aureusStaphylococcus aureusListeria monocytogenes现在学习的是第20页，共23页鉴定鉴定n nAPI鉴定试验 可代替硝酸盐还原、MR-VP、三糖铁、糖发酵、尿素酶和CAMP等试验。现在学习的是第21页，共23页鉴定鉴定n n血清学检验 菌悬液于80水域中加热1h，离心弃上清，剩余液与沉淀混匀制成菌悬液，进行血清学玻片凝集试验。单核细胞增生李斯特氏菌：1/2A，1/2B，1/2C，3A，3B，3C，4A，4AB，4B，4C，4D，4E，7现在学习的是第22页，共23页质量控制质量控制n n每次检验均需用标准阳性菌株和阴性菌株进行质量控制。样品制备的同时，在空白对照FB1增菌液中加入新鲜配制的每毫升含有10个100个单核细胞增生李斯特氏菌的稀释液1mL和阴性培养物，按检验程序进行同步检验。现在学习的是第23页，共23页