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1、精液分析标准实施程序精液分析标准实施程序 1. 取精前准备取精前准备 1.1 核对患者的姓名，并用标签或不宜擦去的记号笔在取精容器上标记好；用电子天平称重取精容器，称重结果标记在其外侧（或使用去皮功能） 。取精容器应无毒、无菌、一次性使用；开口要大，便于精液标本的射入。 1.2 询问并记录患者上次排精的时间。 精液标本采集时间通常为距上次排精 27 天，如果需要进行精浆葡糖苷酶的检测，则应为 47 天，因为距上次排精 23 天留取的精液所测精浆葡糖苷酶水平（34.0411.22）U/ml明显低于相距 47 天(47.2517.54)U/ml留取的精液标本。 如果仅仅是为了观察患者精液中有无精子
2、，排精时间没有严格的限制。如果要复查，排精的间隔时间最好一致。 1.3 实验室人员将患者引导至采精室，交代取精注意事项（清洗双手；用棉签沾取生理盐水擦洗阴茎头； 精液标本应全部射入取精容器， 不能丢失；精液取出后应将取精容器的盖子盖上，并及时送至检查室） 。 2 取精取精 2.1 标本的采集最好在紧靠实验室较为私密的采精室内手淫取精，采精室的温度应在 1825。如果在采精室内留取标本确实有困难，可以允许患者在家里或宾馆里留取精液标本，但必须向患者强调以下几点：不可用避孕套留取，因为普通的乳胶避孕套可影响精子的存活；不可用夫妇射精中断法，因为这很容易丢失部分精液或受到阴道分泌物的污染，尤其是初始
3、部分的精液所含精子密度最高；在运送到实验室的过程中，标本应避免过冷或过热，尤其是冬天，标本通常置于内衣口袋里送检；在采集标本后 1 小时内送到实验室。 2.2 睾丸精子 按经皮睾丸细针穿刺取精法，由专职医生在手术室获取。 2.3 附睾精子 按经皮附睾取精法，由专职医生在手术室获取。 2.4 冷冻精液 按冷冻精液复苏操作。 3 精液分析精液分析 3.1 采集的标本应立即送至实验室， 实验室室温应控制在 1825。 实验室人员再次核对患者的姓名，记录取精的时间，询问并记录标本是否完整，如有丢失，记录下丢失的是前段还是后段标本。射精时前段精液主要为附睾中的精子，后段精液主要为精囊液。 3.2 用电子
4、天平称重含有标本的取精容器，减去取精容器的重量（或使用去皮功能）即为精液标本的重量，按精液密度为 1g/ml 换算为精液的体积。 3.3 将标本置于 37恒温金属浴液化。 一般情况下， 精液在 15 分钟内完全液化，超过 60 分钟不液化的视为异常。不液化的精液可加入适量的蛋白酶促其液化。加酶处理的精液标本会影响精浆生化指标、精子浓度和活力等指标的检测结果，应当加以注明。 3.4 待精液完全液化后，进行以下分析。精液分析应在精液液化后立即或射精后 1 小时之内进行。 3.4.1 需要进行培养的标本按无菌操作要求进行接种，之后的操作不要求无菌。 3.4.2 外观 正常的精液应具有均质、灰白色的外
5、观；精子浓度很低标本，精液透明； 长期没有排精， 精液可为淡黄色或黄色； 患有黄疸或服用某些维生素，精液也可能为黄色；有红细胞的标本，精液可呈现为红褐色。 3.4.3 pH 用精确 pH 试纸（6.88.0）测定，测定前精液应用玻璃棒轻缓搅匀。精液中 CO2的丢失会影响精液的酸碱度， 因此， 测定不应超过射精后 1 小时。如果 pH 很低且为无精子，提示可能存在射精管道的堵塞或双侧输精管先天性缺如。 3.4.4 CASA 分析 3.4.4.1 打开 CASA 分析程序，输入患者的基本信息。 3.4.4.2 预先将 2 快计数板置于 37恒温板上预热，显微镜载物平台预先加热并恒温在 37。用玻璃
6、棒轻缓、充分混匀精液标本，混匀时不能剧烈或产生气泡，以免损伤精子。取约 5l 精液滴加到计数板载物平台上，轻轻盖上盖板，置于显微镜下观察。精液在计数板平台和盖板之间不应有气泡，如有气泡，应清洗干净计数板后重新加样，否则气泡会使盖板与平台之间的间隙超过 10m，影响检测结果。 3.4.4.3 调节好显微镜焦距，选择计数板中央及四周至少 5 个视野，分析至少 200条精子。如没有检测到精子，则需将精液标本 3000g 离心 15 分钟，取其沉淀物显微镜下逐一观察，并将结果在最终报告中备注。 （离心的速度和时间不能低于上述要求；若在沉淀物中找到精子，则为隐匿性无精子症。 ） 3.4.4.4 加样另一
7、块计数板，重复以上分析。2 次分析结果应在 95%可置信区间，如不在 95%可置信区间，则需重复上述分析直至符合质控要求。 3.4.4.5 打印、签发报告，并将结果记录在登记本上。 3.5 精子形态分析 3.5.1 取适量精液加入等量生理盐水或磷酸盐缓冲液，充分混匀；混匀时操作要轻缓，不要产生气泡；500800g 离心 10 分钟。 3.5.2 弃上清，根据精子浓度加入适量生理盐水或磷酸盐缓冲液，轻轻悬浮，使精子浓度控制在 2050106/ml。 3.5.3 取一张洁净的玻片，吸取 5l 精液标本置于玻片末端。用另外一块玻璃片或盖玻片将精液慢慢展开，并且两片保持 45角倾斜，然后轻轻、均匀地往
8、另一边拖动，注意拖动过程用力不宜过大，否则将会导致精子头部和尾部断裂，影响形态学分析结果。涂好片后，在室内风干。同样的方法制备另一张精子涂片。 3.5.4 用 Diff-Quick 染色，具体操作按厂家提供的试剂盒说明书进行。染好的精子涂片风干后，可用盖玻片封存。 3.5.5 CASA 分析 3.5.5.1 打开精子形态学分析系统程序，输入必要的信息。 3.5.5.2 用棉签蘸取 75%的酒精将玻片底部多余的染色液去除以保证分析效果，然后擦干；将玻片置于显微镜载物平台上，先用 10 倍物镜选中染色效果好、分散好的区域，对好焦距，再将物镜转到 100 倍油镜下，调节好焦距后进行分析。至少分析 200 条精子。 3.5.5.3 将另一张涂片置于显微镜下重发以上分析。 2 次分析结果应在 95%可置信区间，如不在 95%可置信区间，则需重复上述分析直至符合质控要求。 3.5.5.4 打印、签发报告，并将结果记录在登记本上。